视网膜中小胶质细胞对光感受器细胞的作用

小胶质细胞作为视网膜的固有免疫细胞,能够主动监测周围微环境的变化。光感受器细胞作为视网膜的一级神经元,能够将光信号转换为电信号。在视网膜的多种生理、病理环境中,小胶质细胞对光感受器细胞的功能或存活具有重要影响。在视网膜发育过程中,小胶质细胞吞噬细胞碎片、促进神经发生及突触塑形。在健康视网膜环境中,小胶质细胞能够维持内环境稳定、维持神经元突触结构和功能、分泌营养因子。关于视网膜疾病的研究,既往多关注小胶质细胞的损害作用。随着研究进展发现,在视网膜急性损伤和应激(视网膜脱离、朊病毒损伤、光损伤)中,小胶质细胞对光感受器细胞的保护作用大于损害作用。在视网膜慢性炎性疾病,如视网膜色素变性、年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变中,免疫微环境失衡,小胶质细胞被过度激活,释放大量炎性因子,吞噬非凋亡光感受器细胞,其损害作用大于保护作用。如何发挥小胶质细胞的保护作用而抑制其损害作用,对视网膜疾病,尤其是慢性炎性疾病的治疗具有重要意义。本文就不同视网膜条件下小胶质细胞对光感受器细胞的作用进行综述。

提高移植光感受器功能性整合的策略

视网膜退行性疾病的最终结局是光感受器的大量丢失,造成视力不可逆的损害,目前基本上无有效治疗措施。光感受器移植为一种潜在的细胞治疗手段,旨在通过替换丢失的光感受器,重建视网膜回路,在一定程度上帮助恢复视网膜功能。然而,物质交换机制的发现揭示了既往研究结果中移植光感受器的整合比例低、外段形成不足及突触形成不够等问题,显示了该疗法临床转化的难度。本文通过多个维度综述了提高移植光感受器功能性整合的策略,探究相关内容的可行性,具体包括选择最佳发育时间窗的移植细胞群,增强与宿主视网膜间的相互作用;破坏宿主外界膜,减轻视网膜重塑,提高移植细胞的迁移及整合;利用免疫调节,减少小胶质细胞活化,改善宿主的移植微环境;通过视网膜片或生物支架的移植形式,提高移植光感受器的组织性;合理地开发及使用生物材料,优化移植细胞的生理微环境;充分评估手术参数,降低手术本身对移植细胞及宿主视网膜的影响。

川芎嗪对rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞干预作用的光镜观察

目的通过rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的病理变化探讨盐酸川芎嗪对遗传性视网膜色素变性小鼠可能的治疗作用。方法rd和rds新生鼠各84只,随机分为两组,实验组和对照组,每组42只小鼠。实验组小鼠从出生当天开始,ip盐酸川芎嗪80mg/kg,每日2次,至出生后35d;对照组ip等量生理盐水。分别于0d和注射后3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,光学显微镜下观察水平视网膜近赤道部位光感受器细胞的厚度。结果病理结果显示,经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28、35d,与未用药的对照组相比较,rd和rds小鼠光感受器细胞层数明显增加(P<0.01)。结论川芎嗪可延缓rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的破坏。

白蒺藜对光损伤小鼠光感受器细胞的保护作用

目的探讨白蒺藜对小鼠视网膜光损伤的保护作用。方法采用10 000 lux白炽光光照30 min建立视网膜光损伤模型,将BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组和治疗组,每组各6只。光照前0.5 h治疗组腹腔注射白蒺藜水煎液100μL(生药100mg/20 g),正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。光照后3 h、7 d分别通过OCT检测小鼠视网膜形态学改变;造模后7 d处死小鼠,取眼球固定、包埋、切片进行HE染色,视紫红质和短波敏感视蛋白(short wave-length sensitivity opsin,M-opsin)的免疫荧光化学染色,观察视网膜病理改变情况。结果正常对照组内外核层结构清楚、界限明显,视网膜视杆细胞内外节排列整齐;模型组视网膜结构层次模糊且外核层变薄,与正常对照组差异显著;治疗组小鼠视网膜结构与正常对照组没有显著差异。与正常对照组比较,模型组视紫红质和M-opsin表达降低,治疗组显著提高了视紫红质和M-opsin的表达。模型组较正常对照组视网膜外核层厚度显著变薄(P<0.05);治疗组较模型组能显著性预防小鼠视网膜外核层变薄(P<0.05)。结论小鼠视网膜光损伤模型造模成功,白蒺藜对光损伤视网膜具有显著的保护作用。

葛根素抗rds小鼠视网膜光感受器细胞凋亡及其机制探讨

目的观察葛根素对遗传性视网膜色素变性rds小鼠的治疗作用,并探讨其抗视网膜光感受器细胞凋亡的作用机制。方法rds新生小鼠随机分为两组,实验组和对照组。实验组小鼠从出生时开始,ip盐酸葛根素80mg/kg,每天2次,至生后35 d,对照组同时ip等量生理盐水。分别在用药后0、3、7、14、21、28、35 d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,常规病理切片。另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定,电镜观察。用TUNEL方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组化方法测定Bcl-2在视网膜的表达。结果病理结果显示,经葛根素治疗后14、21、28、35 d,rds小鼠光感受器细胞层数与对照组比较,明显增加(P<0.01)。电镜结果显示,葛根素治疗组与对照组比较,在7、14、21、28、35 d可减轻rds小鼠光感受器细胞及其外段盘膜部位的线粒体、盘膜和外界膜的破坏。rds小鼠经葛根素药物治疗后3、7、14、21、28、35 d,光感受器细胞的凋亡率与对照组比较明显减少(P<0.01);在7、14、21、28、35 d,Bcl-2在视网膜光感受器细胞基质及其内外段的表达明显增强(P<0.01)。结论葛根素可减轻rds小鼠视网膜光感受器细胞的病变,其作用机制可能是通过上调视网膜光感受器细胞及其内外段Bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。

猫视网膜脱离后光感受器细胞形态学改变

为观察猫视网膜脱离后光感受器细胞形态学变化 ,2 8只猫分为实验组和对照组 ,利用微穿刺技术将 0 2 5 %Healon注入到视网膜下腔造成视网膜脱离。脱离后 0 5～90天的视网膜加工成组织切片 ,用于光镜和电镜观察。结果显示 ,视网膜脱离 2 4h,光感受器外节出现膨胀和破裂 ,内节和细胞体损害轻微。脱离后 3～ 1 4天 ,大多数内节出现空泡、线粒体肿胀和嵴的断裂。细胞胞体出现内质网膨胀、线粒体退化以及多囊小体形成。脱离后 1～3个月 ,外核层细胞体之间出现大量空泡或腔隙。某些光感受器胞体出现细胞浆膜破裂 ,胞浆物质和小细胞器丢失。这种改变在视网膜高脱离区比浅脱离区更明显 ,并随脱离时间的延长呈渐进性加重。研究表明 ,视网膜脱离能诱发光感受器细胞发生退行性改变 。

大鼠脂肪干细胞体外诱导为光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞

目的探讨大鼠的脂肪干细胞（ADSCs）体外诱导为光感受器细胞和视网膜色素上皮（RPE）细胞的方法。方法经贴壁筛选法连续传代纯化细胞,流式细胞仪检测CD45、CD90、CD49d、CD106鉴定ADSCs。用EGF、激活素A、牛磺酸、视黄酸和视网膜细胞提取液单独诱导ADSCs;用EGF＋牛磺酸、EGF＋视黄酸、牛磺酸＋视黄酸、EGF＋牛磺酸＋视黄酸联合诱导,免疫荧光法和流式细胞仪检测细胞的视紫红质、CK和S-100的表达。结果原代ADSCs,CD45阳性率是1.6%,CD90是71.3%,CD49d是7.8%,CD106是3.5%。从传1-5代,CD45阳性率是0.8%-9.3%,CD90是84.7%-94.8%,CD49d是16.8%-31.0%,CD106是8.3%-22.2%。各代ADSCs中,CD49d的阳性率均高于CD106。ADSCs的视紫红质的诱导效应是17.5%-46.0%,CK的诱导效应是19.7%-79.3%,S-100的诱导效应是27.3%-50.7%。结论ADSCs具有向光感受器细胞和RPE细胞分化的潜能。

骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞的分化

目的探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)的分化情况。方法体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠BMSC,记录BMSC的增殖情况并进行鉴定;制备细胞爬片并在双层培养板内与新生鼠视网膜神经细胞共培养,观察BMSC的神经存活和分化情况,并行免疫荧光染色鉴定。结果早期的BMSC分裂较缓慢,第2天进入快速增殖期,细胞生长活跃,大约持续至第5天,细胞分裂进入平台期,增殖缓慢或轻微下降。流式细胞仪显示,90.27%的3代BMSC处于G0-G1期,其余9.73%的细胞处于G2期、S期和M期;93.28%的4代BMSC处于G0-G1期,其余6.72%的细胞处于G2期、S期和M期。流式细胞仪检测示3代和4代BMSC抗原CD90+/CD45-分别为92%、90%,体外获得了较高纯度的BMSC。MTT法检测共培养后3d、5d、7d的细胞存活率分别为(65.48±9.95)%、(73.56±8.68)%、(76.84±8.65)%,与对照组[(66.14±10.45)%、(70.11±9.60)%、(73.21±6.98)%]比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫荧光染色显示,共培养组诱导后部分BMSC视蛋白、巢蛋白于3d后、微管蛋白于5d后出现阳性反应,对照组均为阴性。结论 BMSC具有向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞分化的潜能。

白血病抑制因子对视网膜光感受器细胞光损伤的保护作用及其机制

目的 探讨白血病抑制因子（LIF）对视网膜光感受器细胞光损伤的保护作用及其机制.方法 选取50只5～6周龄BALB/c小鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组10只、光损伤＋LIF组20只和光损伤＋PBS组20只.于光照前4d,光损伤＋LIF组小鼠右眼行玻璃体腔LIF注药,光损伤＋PBS组小鼠右眼行玻璃体腔PBS注药.采用4 000 lx白色冷光源对光损伤＋LIF组和光损伤＋PBS组小鼠持续照射4h建立小鼠视网膜光损伤模型.分别采用闪光视网膜电图（fERG）和组织病理学检查检测视网膜光感受器细胞的功能和形态学变化.应用实时荧光定量PCR法检测小鼠视网膜中Jak3、STAT3及凋亡相关因子Bcl-2、Bax mRNA的相对表达水平. 结果 暗适应ERG检查结果显示,0.01、1、100、200、400 cd·s/m2光强度下光损伤＋PBS组a波振幅较正常对照组和光损伤＋LIF组低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;明适应ERG检查结果显示,在白光、绿光和蓝光刺激下,光损伤＋PBS组b波振幅较正常对照组和光损伤＋LIF组低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.光损伤＋PBS组外核层光感受器细胞数量显著低于正常对照组和光损伤＋LIF组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.与光损伤＋PBS组相比,光损伤＋LIF组Jak3、STAT3、Bcl-2 mRNA的相对表达量显著增加,Bax mRNA的相对表达量显著下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 LIF对视网膜光感受器细胞光损伤具有保护作用,其可能通过激活Jak3/STAT3信号通道抑制下游Bax/Bcl-2凋亡通道而发挥作用.

川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲(NmethylNnitrosourea,MNU)致大鼠视网膜损伤的作用。方法大鼠生后47d,腹腔注射不同剂量的川芎嗪注射液;50d注射MNU60mg·kg-1。测量视网膜总厚度;TUNEL和RTPCR法分别检测细胞凋亡、cjun和cfos的表达。结果川芎嗪注射液可剂量依赖性地增加周边视网膜总厚度和降低凋亡指数,并抑制MNU诱导的即早基因表达。结论川芎嗪通过下调基因c-jun和c-fos的表达,抑制光感受器细胞凋亡,从而部分保护MNU引起的视网膜损伤。

人骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞诱导分化的研究

目的：探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）定向分化成光感受器样细胞所需的微环境。方法：采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化人BMSCs，培养第3代的细胞以碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）及脑源性神经营养因子（BDNF）3种因子首先进行向神经前体细胞诱导分化，应用免疫细胞化学检测巢蛋白及微管相关蛋白-2，当巢蛋白阳性表达率达到最高时更换诱导因子，加入色素上皮衍生因子（PEDF）及牛磺酸（taurine）继续诱导2~3wk，用免疫细胞化学及RT-PCR法检测视紫红质的表达情况。结果：诱导第3d开始能检测到巢蛋白表达，第12d阳性表达率达到最高，达（90.9±2.6）%。微管相关蛋白-2在诱导后第6d检测到阳性表达。部分细胞形态呈神经元细胞样。第12d诱导因子更换为PEDF及taurine继续诱导2~3wk，检测到有视紫红质表达，第2wk阳性率为（20.7±38）%,第3wk阳性率为（89.8±3.7）%。结论：采用分阶段诱导法，应用因子bFGF,EGF,BDNF及PEDF,taurine能在体外诱导BMSCs表达光感受器细胞标志物视紫红质。

白蒺藜对光感受器细胞的抗炎、抗氧化保护效应机制研究

目的探讨白蒺藜对光损伤诱导的光感受器细胞退行性改变的保护作用。方法 36只小鼠随机分为3组,每组各12只,采用10×10~3 Lux白炽光光照30 min建立BALB/C小鼠视网膜光损伤模型,光照前30 min白蒺藜给药组腹腔注射白蒺藜水煎液100μL,正常对照组和光损伤模型组腹腔注射等量生理盐水。光照后22 h,腹腔注射二氢乙锭,2 h后摘取眼球制备冰冻切片,观察视网膜原位氧化应激状态。分别于光照后6h、24 h摘取视网膜组织,进行总RNA抽提、逆转录制备cDNA样品,通过实时荧光定量PCR分析小鼠视网膜炎症相关因子。检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、趋化因子CcL2(chemokine,Ccl2)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附因子-1(intercellular cell adhesion molecules-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)基因的mRNA表达水平。结果光照24 h后,与正常对照组、白蒺藜给药组相比较,光损伤模型组视网膜色素上皮细胞及光感受器细胞氧化应激标志物呈显著阳性,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与正常对照组相比较,光损伤模型组视网膜IL-1β、Ccl2、COX-2、TNF-α、ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(均为P<0.01);与光损伤模型组相比,白蒺藜给药组视网膜IL-1β、Ccl2、COX-2、TNF-α、ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论在视网膜退行性病变模型中,白蒺藜表现出良好的光感受器细胞保护作用。抗氧化、抗炎可能是白蒺藜防治光感受器细胞损伤效应的相关机制之一。

早期衰老大鼠视网膜色素上皮-光感受器细胞复合体超微结构的变化

目的:观察早期衰老大鼠视网膜色素上皮-光感受器细胞复合体超微结构的变化。方法:取3月龄及12月龄大鼠视网膜,制成半薄切片,透射电镜下观察视网膜色素上皮-光感受器细胞复合体超微结构的变化。结果:12月龄大鼠视网膜中出现视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)凋亡和RPE-光感受器细胞复合体的退行性改变。结论:视网膜色素上皮-光感受器细胞复合体的退行性改变是视网膜衰老的早期表现。

内源性促红细胞生成素对大鼠脱离视网膜光感受器细胞的保护作用

背景促红细胞生成素（EPO）对多种视网膜疾病模型中视网膜神经元具有一定的保护作用，但EPO对视网膜脱离（RD）后光感受器细胞是否具有保护作用尚不清楚。目的探讨内源性EPO对RD状态下光感受器细胞的保护作用及可能机制。方法利用视网膜下腔注射质量分数1．4％透明质酸钠建立大鼠RD模型，按每组情况各组玻璃体腔内分别单次注射PBS或不同剂量的外源性可溶性EPO受体（EPOsR），采用计算机产生随机数字法将72只SD大鼠随机平均分为正常对照组、RD组、RD＋PBS组、RD＋EPOsR2、20、200ng组。分别于造模后3d和14d用过量麻醉法处死大鼠并获得大鼠视网膜标本，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测光感受器细胞的凋亡情况，并分别采用Westernblot和免疫荧光法检测视网膜中caspase-3的活性，RD造模后14d进行组织病理学检查并测量外核层（ONL）厚度。结果RD造模后3d，RD组ONL出现凋亡细胞核，玻璃体腔注射EPOsR组光感受器细胞凋亡进一步增加，随着玻璃体腔注射EPOsR的剂量增加，ONL凋亡细胞核有增加趋势。Westernblot和免疫荧光检测结果均显示，各组视网膜caspase-3表达的条带灰度值分别为（0．15±0．04）、（0．49±0．03）、（0．50±0．07）、（0．63±O．03）、（0．69±0．04）、（0．83±0．04），各组的总体差异有统计学意义（F=76．016，P=0．000），RD＋EPOsR200ng组的caspase-3活性均强于其他各组，差异均有统计学意义（P〈0．01）。RD造模后14d，正常对照组、RD组、RD＋PBS组、RD＋EPOsR2、20、200ng组的ONL厚度分别为（47．39±3．39）、（33．96±3．54）、（31．83±5．21）、（31．40±2．63）、（24．99±2．06）、（19．30e3．71）μm，总体差异有统计学意义（F=44．733；P=0．000）；EPOsR处理组ONL厚度明显薄于单纯RD组和RD＋PBS组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论RD状态下，EPOsR通过剂量依赖的方式诱导视网膜细胞的凋亡和caspase-3活性增强，而缺氧状态下视网膜神经上皮的内源性EPO表达增强可通讨抑制casDase-3活性和抗凋亡作用发挥对光感受器细胞的保护作用。

黄芪对N-甲基-N-亚硝脲诱导大鼠光感受器细胞凋亡的预防途径(英文)

背景:视网膜色素变性是非炎症性、双侧进行性的视网膜变性,其特征是光感受器细胞因发生凋亡而丢失,最终导致失明。中药黄芪在阻止该病的进程上显示出了良好的前景。目的:观察黄芪对N-甲基-N-亚硝脲致SD大鼠视网膜损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:新乡医学院药学院。材料:实验于2004-03/12在中山大学中山眼科中心药理实验室完成。雌性SD大鼠114只,由中山大学中山医学院动物中心提供,N-甲基-N-亚硝脲为美国Sigma公司产品,黄芪注射液为成都地奥九泓制药厂生产(生产批号:国药准字Z99060535,2mL/支,主要成分为黄芪)。方法:选用雌性SD大鼠114只,30只用于视网膜层形态学分析;30只用于细胞凋亡检测;54只用于胞核内核因子κBp65活性的检测。采用抽签法随机分组,每组6只。于大鼠生后47d,分别经腹腔注射不同剂量的黄芪(2.5,5和10g/kg),1次/d,除对照组外,其余组的大鼠同时于生后50d腹腔注射N-甲基-N-亚硝脲60mg/kg。在N-甲基-N-亚硝脲处理不同时间后处死动物,取眼球,视网膜形态学分析测量周边视网膜的总厚度,TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡,转录因子试剂盒分析核因子κBp65的活性。主要观察指标:各组视网膜厚度、凋亡指数和胞核内核因子κBp65的活性比较。结果:黄芪可剂量依赖性地显著增加周边视网膜总厚度和降低N-甲基-N-亚硝脲引起的光感受器细胞凋亡指数。黄芪注射液10g/kg还可时间依赖性地上调视网膜细胞胞核内核因子κBp65的活性。但其对N-甲基-N-亚硝脲引起的中心视网膜损伤无明显的保护作用。结论:黄芪通过上调视网膜细胞胞核内核因子κBp65的活性,抑制光感受器细胞凋亡,从而部分地保护N-甲基-N-亚硝脲引起的视网膜损伤。

频域光学相干断层扫描对糖尿病视网膜病变光感受器细胞层的观察

近年来,随着人们生活水平的提高和平均寿命的延长,糖尿病（diabetic mellitus,DM）发病率在不断上升,糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的发病率和致盲率也在逐年增加。现有的研究表明,DR的病理过程主要为视网膜的局部血管刺激因素与抑制因素的平衡破坏导致血视网膜屏障破坏。

骨髓间充质干细胞分化为光感受器样细胞的体外诱导和微环境研究

背景近年来间充质干细胞（MSCs）在眼科方面已成功诱导分化为角膜细胞、视网膜神经节细胞（RGCs）、视网膜神经样细胞等，但诱导成为光感受器细胞及其微环境的研究尚少。目的研究骨髓MSCs（BMSCs）在体外定向分化为光感受器样细胞的可能性及其所需的微环境。方法分别将第2代BMSCs细胞株和视网膜色素上皮（RPE）细胞株进行常规培养和传代，取第4代人BMSCs细胞株及第3代RPE细胞株用于实验。将BMSCs分为诱导组和对照组，诱导组的BMSCs与含有20μg／L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、20μg／L表皮生长因子（EGF）及20μg／L脑源性神经营养因子（BDNF）的骨髓干细胞培养基（MSCM）及RPE细胞的条件培养液共培养进行BMSCs的诱导分化，而对照组的BMSCs仅用MSCM培养基进行培养，倒置显微镜下观察分化细胞的形态学变化。采用免疫细胞化学法检测RPE细胞诱导BMSCs3、5、7d时细胞中视紫红质蛋白的阳性表达率，以鉴定分化细胞的表型。采用逆转录PCR（RT—PCR）法检测RPE细胞诱导BMSCs5d、7d时细胞中视紫红质和恢复蛋白mRNA的表达情况。结果培养的BMSCs形态均一，呈纺锤形或梭形，RPE细胞形态均一，呈多边形或六边形，细胞内充满色素颗粒，生长良好。诱导后的部分BMSCs呈神经样细胞形态，细胞变圆，突起增长，突起末端可见一级、二级分支，相互间连接呈网状。免疫细胞化学法检测表明，诱导组细胞诱导后第3、5、7天细胞中可见视紫红质的表达，表达率分别为（5．83±0．29）％、（20．36±0．32）％和（29．80±2．30）％，明显高于对照组的（0．71±0．35）％、（2．56±0．24）％和（2．32±0．42）％，差异均有统计学意义（t3d=41．510，t5d=107．290，t7d=30．036，P〈0．01）。RT—PCR法检测显示，诱导后5d、7d诱导组细胞中视紫红质和恢复蛋白mRNA表达的灰度值均明显高于对照组，差异均有统计学意义（视紫红质mRNA：t5d=103．506，t7d=122．584，P〈0．01；恢复蛋白mRNA：t5d=106．674，t7d=189．992，P〈0．01）。结论采用含bFGF。

新生小鼠视网膜光感受器前体细胞的体外培养及鉴定

目的对新生小鼠视网膜光感受器前体细胞进行分离和鉴定。方法同窝新生小鼠14只,随机分为7组(P1-P7),每组2只,出生后连续7d每天取1组幼鼠,分离视网膜并进行体外培养,观察其生长状况。传代后培养2周,然后采用细胞荧光免疫组化法检测细胞中的5-溴-2′脱氧尿嘧啶(BrdU)、细胞神经上皮干细胞蛋白(Nestin)、神经视网膜亮氨酸拉链(Nrl)和视蛋白(Opsin)的表达情况,并对视网膜光感受器前体细胞性质进行分析。结果在特定的培养基中,部分P1-P7各组新生小鼠视网膜细胞贴壁生长,荧光免疫组化标记显示传代后生长细胞大部分为BrdU阳性细胞。P1-P7组Nestin阳性率分别为31.0%、31.6%、32.3%、30.2%、31.2%、30.9%、29.5%。Nrl阳性细胞数出生后3d开始明显增多,随后小幅增加,P1-P7组阳性率分别20.6%、35.2%、65.5%、68.6%、71.6%、73.0%、73.3%。P1-P4组细胞不表达Opsin,P5-P7组少量细胞表达Opsin。结论新生小鼠视网膜存在视网膜光感受器前体细胞,该细胞具有分裂增殖能力及向视网膜光感受器细胞分化和表达视蛋白的潜能,并于生后3d明显增多,此后逐渐分化为成熟的光感受器细胞。

大鼠的两种干细胞向光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞分化的实验研究

目的研究大鼠的骨髓间充质干细胞（MSCs）和脂肪干细胞（ADSCs）体外向光感受器细胞和RPE细胞分化的可能性,为临床治疗视网膜病变提供物质基础。方法经贴壁筛选法连续传代纯化细胞,流式细胞仪检测CD45、CD90、CD49d、CD106鉴定MSCs和ADSCs。用视网膜细胞提取液、EGF、牛磺酸和视黄酸分别诱导MSCs和ADSCs;流式细胞仪定量检测细胞的视紫红质、CK和S-100的表达,计算诱导效应。结果传代纯化MSCs和ADSCs,传1代至传5代,MSCs中CD45阳性率是1.8%-7.5%,CD90是83.8%-95.7%,CD49d是6.6%-24.8%,CD106是15.7%-32.2%;ADSCs中CD45阳性率是0.8%-9.3%,CD90是84.7%-94.8%,CD49d是16.8%-31.0%,CD106是8.3%-22.2%。MSCs和ADSCs均为CD45阴性和CD90阳性。各代MSCs和ADSCs比较,MSCs低表达CD49d,高表达CD106;而ADSCs高表达CD49d,低表达CD106。不同的诱导方法,MSCs的视紫红质的诱导效应是55.9%-70.0%,CK的诱导效应是49.5%-72.0%,S-100的诱导效应是25.4%-34.0%;ADSCs的视紫红质的诱导效应是19.6%-31.1%,CK的诱导效应是31.0%-79.3%,S-100的诱导效应是27.3%-50.7%。结论 MSCs和ADSCs均具有向光感受器细胞和RPE细胞分化的潜能,可能成为干细胞移植治疗的来源。

挫伤性视网膜病变大鼠p53基因表达与光感受器细胞凋亡的关系

目的观察鼠眼挫伤性视网膜病变后不同时间点视网膜感光细胞的改变及凋亡相关基因p53的表达。方法自由落体法制作视网膜挫伤模型。49只SD大鼠随机分为正常对照组和视网膜挫伤组,后者又按照挫伤后时间的不同分为1h、4h、1d、3d、7d、14d组,每只大鼠左眼为实验眼,右眼为实验对照眼。行HE染色观察大鼠视网膜组织的病变情况;TUNEL法检测感光细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测视网膜组织中p53的表达。结果TUNEL染色显示正常对照组及实验对照组大鼠视网膜组织未见凋亡阳性细胞。视网膜挫伤后3d视网膜内可见较多阳性表达的细胞,分布在外核层。挫伤后1h、4h、1d、7d、14d,大鼠视网膜组织均未见到凋亡细胞。p53在挫伤后4h即有表达,分布在外核层,随时间延长表达逐渐增加,至挫伤后3d达高峰,至挫伤后7d、14d未见阳性表达。挫伤后4h、1d和3d,视网膜p53阳性细胞光密度值(OD值)差异比较有显著性意义(P<0.01)。正常对照组及实验对照组大鼠视网膜组织未见p53阳性表达。结论大量感光细胞的凋亡是挫伤性视网膜病变的重要机制之一,p53基因的表达可能介导了光感受器细胞凋亡的过程。