用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫kDNA探针的研究

用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫ｋＤＮＡ探针的研究王云飞，钟淑梅，周勇志（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）前言动基体ＤＮＡ（ｋＤＮＡ）是伊氏锥虫重要特征之一。应用同位素标记ｋＤＮＡ探针来检测伊氏锥虫，灵敏度高ｔ‘］。然而，同位素标记受实验条件限制，对于...

应用光敏生物素探针检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA

用国产光敏生物素,标记Veto细胞全DNA,通过与疫苗中同源DNA的狭缝杂交,检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA含量。检测灵敏度可达1pg。探针稳定长达一年。杂交反应特:异性高,结果重复性好。与同位素探针相比,生物素标记探针简便、经济、快速、稳定。由本法测得,Vero细胞乙脑粗制疫苗中,含DNA为200～400pg/0.5ml;超滤浓缩苗为4×10~4～6×10~6pg/0.5ml;通过柱层析和沉淀法提纯的疫苗则分别低于60pg/0.5ml和1pg/0.5ml。本法同样适用于传代细胞制备的其它生物制品中细胞残余DNA的检测。

光敏生物素和DIG标记Orf病毒DNA探针的研究

目的 :是用于Orf病毒病的诊断和相应重组菌的检测 ,将HCEDNAHindⅢ A、B片断及重组质粒pGRL - 4A中消化的A片断用光敏生物素和地高辛进行标记 ,对不同病毒分离株DNA进行检测 ,并对不同重组质粒进行了Dot-blotting和Southern -blotting检测。结果 :用光敏生物素标记的探针最低可检出 1 2pg的DNA ,地高辛标记的探针最低可检出 0 1pg的DNA ,且有极强的特异性。

地高辛与光敏生物素标记探针在肝细胞癌原位杂交中应用的比较观察

地高辛与光敏生物素标记探针在肝细胞癌原位杂交中应用的比较观察同济医科大学实验医学研究中心，武汉４３００３０杨木兰，郑杰，杨渝珍，李东关键词地高辛；光敏生物素；肿瘤中图法分类号Ｒ９７２＋１，Ｒ７３５．７原位分子杂交技术最早（１９６９）用于细胞内核蛋白体...

光敏生物素标记流行性出血热病毒R22株M片段cDNA探针的研究

应用光敏生物素标记我国流行性出血热病毒R22株M片段R3克隆cDNA,制备出生物素化的cNNA探针。用此探针与流行性出血热病毒R22株和陈株进行斑点杂交,结果R3克隆与R22株和陈株均出现阳性杂交信号,而与单纯疱疹病毒、柯萨奇B组病毒和正常对照细胞组的杂交结果均为阴性。光敏生物素标记探针可检出10pg的cDNA,并用此方法检测TEHF病毒在感染乳鼠体内的分布情况。

全DNA光敏生物素探针杂交法检测支原体

分别以人型支原体（ＭＨ）、解脲支原体（ＵＵ）三个血清型（ＳＵ１、ＳＵ４与ＳＵ８）全ＤＮＡ与等体积光敏生物素混合，用特种紫外光照射制备成探针。在分离培养的基础上，用上述全ＤＮＡ光敏生物素探针，对８２例非淋菌尿道炎病人标本作了检测，结果分离培养ＭＨ２２例，ＵＵ５５例；探针法检出ＭＨ２０例，ＵＵ５３例，两方法ＭＨ、ＵＵ阳性标本均有重叠，提示ＵＵ感染率较ＭＨ感染率高，且ＭＨ感染多数伴随在ＵＵ感染中。三型ＵＵ探针检测结果表明某一单型ＵＵ探针不能代替分离培养检测出所有型ＵＵ。

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。

光敏生物素标记IgG检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒囊膜蛋白及重组表达蛋白

用光敏生物素标记从兔抗羊接触传染性脓疱性皮炎病毒超免疫血清中提取纯化的IgG ,把从蔗糖密度梯度离心纯化的病毒用 2 ME和NP4 0裂解后与重组转化菌 pGRL 4A和pGRH 3A一起进行SDS PAGE ,并进行转移电泳。对用光敏生物素标记的IgG进行Western blot ting印迹杂交检测。结果 ,检测到产生IgG的病毒囊膜蛋白有 5条 ,分子量分别为 12 5 .0、96 .0、83.0、5 6 .3和 4 2 .0ku ;检测到重组菌 pGRL 4A和 pGRH 3A可表达分泌其中的 3条囊膜蛋白 ,其分子量分别为 83.0、5 6 .3和 4 2 .0ku ;pGRL 4A的表达较强 ,对 4 2 .0ku蛋白的分泌量最高。所重组的病毒DNAHindⅢ

光敏生物素标记IgG检测农产品重金属污染

重金属污染的植物体内会产生较高的金属硫蛋白(MT),实验以光敏生物素标记用MT免疫家兔产生的抗体,用碱性磷酸酶标记亲和素,对MT进行免疫印迹检测,方法简单准确,标记的IgG最低检出量为1 ng/mL。通过对天水秦城区不同地域采集到的16种农产品样本进行检测,其检测结果与样本中金属硫蛋白的含量测定结果一致。

光敏生物素标记胃癌单克隆抗体MG_7的制备

本文介绍一种新的蛋白质标记技术，即用光源照射光敏生物素对本室制备的胃癌单克隆抗体ＭＧ_７进行标记。以亲和素－碱性磷酸酶检测，标记的单抗最低值达０．７５ｐｇ。免疫组化研究显示标记抗体对胃癌组织有很强的亲和力和特异性。上述结果表明这种标记技术具有操作简单，对蛋白质的生物活性影响小等特点。

光敏生物素标记DNA探针检测海南大劣按蚊

光敏生物素标记ＤＮＡ探针检测海南大劣按蚊刘斌陆晓林刘忠湘（第四军医大学寄生虫学教研室西安７１００３３）关键词大劣按蚊光敏生物素斑点杂交中图号Ｒ３９１．１同位素３２Ｐ标记的质粒ｐＡＤ－３２０是一株特异性、敏感性均较好的海南大劣按蚊探针．但是，由于同位素...

光敏生物素标记犬细小病毒核酸探针的制备及其应用

将含有犬细小病毒2.0 kb DNA 克隆片段的重组质粒 pBI-264转化大肠杆菌 JF-803,扩增后用碱裂解法提取重组质粒,纯化后电泳,用冷榨法回收克隆片段。用光敏生物素分别标记重组质粒及克隆片段,制成重组质粒探针及克隆片段探针两种核酸探针,它们对犬细小病毒有相同的杂交特异性,检测灵敏度达 pg 水平,保存期至少8个月。检测25份犬粪样,阳性率为32%(8/25),而 HA-HI 试验为24%(6/25),两种方法的符合率为92%(23/25)。本试验从粪样直接提取病毒 DNA,用非放射性的光敏生物素标记探针检测,方法简便,可直接应用于兽医病毒学诊断。

光敏生物素标记总DNA探针对大豆根瘤菌的检测

以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交时,没有杂交斑点形成,而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性,用该探针与压碎的根瘤汁液进行DNA杂交,检测USDA110在不灭菌的盆栽土壤中的竞争结瘤能力,发现USDA110在大豆不同生育期的占瘤率为70%～90%。

应用光敏生物素标记DNA探针监测疟疾的研究

用光敏生物素标记含恶性疟原虫DNA片段的质粒pBF4探针，通过核酸分子杂交试验，探针的敏感性为20pg靶DNA和0．001％原虫血症；并可从多种疟原虫DNA标本中特异地检出恶性疟原虫DNA．显示该探针具有良好的特异性和敏感性。检测恶性疟病人血样，与镜检的符合率为95．4％（123／129），表明本探针有良好的应用价值。

HPV16光敏生物素探针的制备及斑点杂交应用

近年来的研究表明,人乳头瘤病毒(HPV)很可能是子宫颈癌主要的病毒病因。目前,在HPV的分子生物学研究中,许多实验室都采用放射性同位素和生物素两种探针标记法。为了找到一种简单、快速、安全的标记探针方法,我们试用了光敏生物素来标记HPV16DNA作探针,并用斑点杂交法初步检测了部分宫颈癌组织中HPV的感染情况。 材料和方法 一、材料 1.试剂:6—氨基乙酸光敏生物素、蛋白酶K,内切酶BamHI,均为国产;

肾综合征出血热病毒光敏生物素cDNA探针的制备及初步应用

肾综合征出血热病毒光敏生物素ｃＤＮＡ探针的制备及初步应用辛宏，于洋，蔡龙荣，叶芳耘，昌兴民，王渭芬肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）是一单链、分段的负链ＲＮＡ病毒，基因组由大（Ｌ）、中（Ｍ）、小（Ｓ）３个片段组成，可引起发热、出血、肾损害为主的典型临床...

用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒cDNA探针及其应用的研究

应用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒ｃＤＮＡ，制备核酸探针、经斑点杂交法和碱性磷酸酶显色后，探针同以ｃＤＮＡ为模板合成的ＰＣＲ产物及其重组子ｐＳＸＩＢＶＳ１均呈现强阳性的蓝色斑点，而与正常尿囊液、新城疫病毒和鸡败血霉形体无杂交。一个初诊为ＩＢ感染的田间病料与探针杂交阳性结果相符合。试验表明该ｃＤＮＡ探针是敏感和特异的检测方法。

长臂光敏生物素和光敏地高辛核酸探针检测医学真菌灵敏度的比较研究

建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交。检测真菌的方法 ,并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性。设计并合成医学真菌通用引物 ,用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因 ,用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针 ,然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交 ,检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染大鼠 ,建立念珠菌病的实验动物模型 ,验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交 ,检测真菌的敏感性。结果表明 ,这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等 9种真菌杂交呈阳性结果 ;与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度 ,实验证明后者的敏感性最高。总之 ,应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交 ,检测上述真菌既特异和敏感 ,又不需放射性同位素。光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针。

光敏生物素标记淋球菌基因探针的实验研究

本文用碱变性法提取淋球菌92023的DNA,经光敏生物素标记制成基因探针。此探针与8株淋球菌的DNA全部杂交阳性,而不与大肠杆菌、绿脓杆菌、嗜乳糖奈瑟菌等其它细菌的DNA杂交。对36份临床标本的检测结果表明,23份结果阳性,13份阴性。细菌分离培养方法结果是22份阳性,14份阴性。两方法符合率为97,22%。说明本文探针是一种特异、敏感性良好,适合临床使用的新技术。

应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究

〔目的〕建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法。〔方法〕首先合成医学真菌通用引物 ,用PCR扩增白色念珠菌 18SrRNA基因 ,用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针 ,然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southern杂交检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染人鼠 ,建立念珠菌病的实验动物模型 ,验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性。〔结果〕通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等 9种医学常见真菌的 18SrRNA基因 ,扩增片段长度为 62 1～ 687bp。此引物只扩增真菌DNA ,不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度 ,实验证明后者的敏感性最高。〔结论〕本方法快速、敏感、不需放射性同位素 ,有较好的临床应用前景。