HBV核酸光敏生物素探针的制备

利用设计合成的特异性引物,通过PCR扩增获得乙肝病毒的S区621个bp DNA片段。该扩增产物经EcoRI与BamHI双酶切后直接克隆进入PSK载体进行表达,再通过扩增重组菌株,以获得大量的S区DNA片段,对它们进行光敏生物素标记,制成探针,对乙肝病毒进行检测灵敏度高,特异性强,其灵敏度可达到4pg水平。

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因光敏生物素探针的制备及初步应用

将重组质粒ｐＵＣＬａＦｃ和ｐＵＣＦ４６Ｆｃ用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ酶切，回收新城疫病毒融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因，将此Ｆｃ片段用光敏生物素标记，制备出Ｆｃ探针。该探针能够与新城疫病毒（ＮＤＶ）的强毒株Ｆ４６Ｅ９、中毒株Ｍ株和弱毒株ＬａＳｏｔａＥ４株杂交，而不与对照的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒杂交，说明探针是特异的。用ｐＵＣＬａＦｃ的Ｆｃ探针检测了各５份ＮＤＶ强中弱毒株的尿囊液，均为阳性。但强毒株和弱毒株的Ｆｃ探针都能与所用的强、中、弱毒株杂交，说明该Ｆｃ探针尚不能区分强、弱毒株。

应用光敏生物素探针检测杂交瘤及细胞中的小鼠白血病病毒

采用ＢａｍＨＩ酶切和琼脂糖凝胶电泳技术，从重组质粒ＰｓＦｌｌ中回收５ｋｂ小鼠白血病病毒（ＭｕＬＶ）ＤＮＡ片段，经光敏生物素标记后制备ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测杂交瘤细胞、ＭｃＡｂ纯品以及ＳＰ２／０细胞中的ＭｕＬｖ。结果表明：此探针灵敏度可达２５ｐｇ，特异性好，在被检测的１３株杂交瘤细胞和２株ＳＰ２／０细胞中分别查出５株和１株为ＭｕＬｖ阳性，ＭｃＡｂ纯品中未发现ＭｕＬｖ。

马立克氏病毒光敏生物素核酸探针的制备及应用

马立克氏病毒光敏生物素核酸探针的制备及应用王嘉福，冉雪琴，叶在荣，王宁波，周开志马立克氏病毒光敏生物素核酸探针的制备及应用@王嘉福，冉雪琴，叶在荣，王宁波，周开志...

ADV特异性糖蛋白GP50基因片段的核酸探针

新疆军区后勤部卫生防疫大队生物医学研究室进行了用光敏生物素标记核酸探针检测伪狂犬病的研究,他们利用分子生物学方法,将伪狂犬病毒(ADV)的特异性糖蛋白GP50基因片段制备成光敏生物素探针,经过杂交试验,灵敏度高达46.8Pg水平。该探针与HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ及CMV杂交阴性,证明特异性强。通过检测感染乳猪及屠宰场随机样品,证明此探针能有效地用于临床检测AD,换言之。用ADV

猴D型逆转病毒Ⅰ型cDNA合成及其分子克隆的建立

利用随机引物法反转录合成SRV-1 ss-cDNA和ds—cDNA.将ds—cDNA平端连接到质粒pUC19中,转化E.Coli.DH5α菌.氨苄青霉素、X-gal培基和菌落杂交筛选,克隆阳性重组率为20.7%.EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切分析,12.7％的插入片段大于500bp。Southern杂交进一步确证,所选三株重组质粒(pSRV-127、pSRV-156和pSRV-169)的探针用插入片段(0.9kb、1.0kb和1.4kb),是SRV-1 cDNA片段.光敏生物素标记纯化pSRV-169DNA和pSRV-156cDNA片段制备探针,前者用于检测SRV-1病毒RNA,后者用于检测纯化病毒颗粒。碱性磷酸酶系统染色。