荧光分子扩散动态测量在肥大细胞脱颗粒体外检测中的应用

目的:建立基于荧光分子扩散动态测量的肥大细胞脱颗粒的体外快速评估方法。方法:分别采用β-己糖苷酶法、扫描电镜法及光栅图像关联光谱法(raster image correlation spectroscopy,RICS)对稳定表达CD63-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大鼠肥大细胞株RBL-2H3的脱颗粒过程进行评价,比较不同检测方法的灵敏度。结果:β-己糖苷酶法的检测灵敏度为5 mg/L,扫描电镜法的检测灵敏度均为3.9×10-2mg/L,RICS方法也在3.9×10-2mg/L即可检测到扩散系数的降低,并与未给药组有显著差异。结论:RICS方法比传统β-己糖苷酶法更灵敏,虽然与电镜方法灵敏度相当,但该方法较扫描电镜法简便易行成本低,易操作,且所观察的指标为扫描电镜所不能做到的活体动态观测,能在细胞脱颗粒早期即可判定过敏反应的发生,具有传统方法不具备的优势,有潜力成为制药企业质量控制的标准方法,或临床过敏性物质筛查的有利工具。