差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 TXT基序对抗冻活性的影响

研究光滑鳖甲抗冻蛋白Ap AFP914及其突变体的原核表达及活性,推测TXT基序的突变对昆虫抗冻蛋白抗冻活性的影响。通过定点突变新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白apafp914基因TXT基序的规则位点个数,并亚克隆至p ET32a原核表达载体,转化大肠杆菌,Ni-NTA纯化得到融合蛋白Trx A-Ap AFP914及3种突变体蛋白;利用Swis S-Model服务器预测分析了Ap AFP914蛋白的三维结构;通过差示扫描量热法测定Trx A-Ap AFP914及其突变体的热滞活性。结果显示,4种融合蛋白分子量均在30 k D左右;且突变蛋白Trx A-A19T具有最高的热滞活性,而突变体Trx A-T33F和Trx A-T33&45F的热滞活性显著低于未突变的Trx A-914。研究结果表明昆虫抗冻蛋白的TXT基序越规则其具有的热滞活性越高。

光滑鳖甲抗冻蛋白对人类精子冷冻保护研究

观察新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白对人精子冷冻保护作用。方法:收集30份正常精液标本,每份分为两等份,采用欧文TYB(90128)精子冷冻剂冷冻保存或含有 10μg/mL的新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白(AFP194)的欧文TYB冷冻液保存。冷冻复苏前后,进行前向运动百分率、精子总活力,存活率、精子形态及精子DNA碎片分析。结果:添加10μg/mL AFP的精子冷冻组,与对照组(0μg/mL AFP)相比,冻融后精子总活力、前向运动精子百分率(PR)和精子存活率方面分别比对照组提高50.14%、66.08%、6.75%、差异显著(P<0.05),正常形态精子百分率和精子DNA碎片率(DFI)差异不显著(P>0.05)。结论:新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白在精子冻融损伤中具有一定的保护作用。