免疫层析技术及化学发光免疫分析在梅毒检测中的应用价值比较

目的探究免疫层析技术及化学发光免疫分析在梅毒检测中的应用价值。方法选取2020年9月至2021年9月南昌市第一医院接收的100例住院及门诊患者作为研究对象,所有患者均采用化学发光免疫分析、免疫层析技术检测血清标本,以梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)检验结果为金标准,比较不同检测方法的阳性检出率、准确度、特异度、灵敏度、阴性预测值与阳性预测值。结果TPPA检测结果检出阳性13例,化学发光免疫分析法检出阳性12例,免疫层析技术检出阳性13例。免疫层析技术检测准确度高于化学发光免疫分析,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法特异度、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值比较差异无统计学意义。两种检测方法阳性检出率结果均显示,年龄<40岁、40~65岁患者阳性检出率低于年龄>65岁患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫层析技术检测梅毒具有更高的检测效能,值得临床推广应用。

LiCA800光激化学发光法在人类免疫缺陷病毒血清抗体检测中的评价

目的评价LiCA800光激化学发光法在人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测中的准确性。方法回顾性分析2021年5—10月于苏州大学附属第三医院送检的临床血液标本中,符合检测要求并通过LiCA800光激化学发光法检测HIV抗体,结果S/CO≥1的标本53例。以疾控中心反馈的WB结果为HIV抗体检测结果的金标准,分析LiCA800的检测结果。结果LiCA800检测有反应性结果(S/CO≥1)样本53例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和RT方法进行初筛试验:两种初筛方法均为阴性24例,对其余29例初筛呈反应性的样本进行WB抗体确证试验,WB条带阴性6例(11.32%),WB条带不确定7例(13.21%),WB条带阳性16例(30.19%)。WB条带阳性样本的S/CO值在30.31~223.97,S/CO值>100的病例占比75.00%。WB条带阳性样本S/CO值明显高于WB条带不确定、WB结果阴性和ELISA和RT法初筛阴性标本S/CO值,差异有统计学意义(P<0.05)。WB阳性结果中,gp160、gp120、p24出现率为100.00%,p55出现率较最低为43.75%。结论LiCA800检测血清HIV抗体时阳性符合率不高,仅为30.19%,S/CO值与血清HIV抗体WB确证结果相关,实验人员应对S/CO值和WB结果予以关注,避免纠纷。

光激化学发光免疫检测法测定TSH功能灵敏度的评价

目的采用光激化学发光免疫技术(LiCA)测定促甲状腺激素(TSH)项目的功能灵敏度。方法制备系列低浓度的TSH样本,使用LiCA对其进行检测。将待测样本分成10个批次,选用3个批号的TSH检测试剂,并进行3次校准,最终以批间变异系数(CV)=20%确定TSH项目的功能灵敏度,对其进行验证。结果 LiCA检测TSH项目的功能灵敏度验证值为0.018 mIU/L。结论 LiCA检测TSH项目的功能灵敏度能够达到美国国家临床生化学院(NCAB)的相关要求,有助于TSH项目实验室检测技术发展的需要。

基于光激化学发光均相免疫检测技术的黄曲霉毒素检测方法研究

黄曲霉毒素是一种毒性极强的生物毒素,广泛存在于各种农产品与食品中,对公众健康危害极大。提出了一种基于光激化学发光均相免疫检测技术的黄曲毒素B1检测方法,利用生物素亲和及抗原与抗体免疫反应,形成受体微球—AFB1-BSA完全抗原—AFB1单抗体—供体微球的聚合体系,在激发光作用下产生化学发光反应,根据化学发光值可定量分析样品中黄曲霉毒素浓度。通过分析并优化反应条件,包括各种反应物浓度、反应体系体积、反应温度与时间等,可实现最低检测限0.048ng/mL、最低定量限0.22ng/mL、批内与批间变异系数均小于10%、植物油样品中AFB1的加标回收率在87～105%之间。方法灵敏度高、特异性强、免清洗、检测速度快,在真菌毒素现场快速检测领域具有广阔的应用前景。

均相光激化学发光免疫分析技术的研究进展

均相光激化学发光免疫分析技术是一种基于纳米微珠的化学发光的新型技术,其具有更高的敏感度、均一性、背景低,且不用洗涤及样本需求量少等特点。该技术可用于生物标志物、激酶及抗原抗体的检测,蛋白:蛋白相互作用的检测,高通量分析的研究及疾病诊断等方面。优化和发展均相光激化学发光免疫分析技术将会在更多研究领域中得到应用。

HBeAb光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003NCU/ml,可测范围为0.003-16NCU/ml。批内与批间的精密度分别为5.3%和6.8%,与HBcAb无交叉反应。使用自制试剂与罗氏化学发光试剂盒同时检测136份临床血清样本,结果具有相关性(r=0.961)。结论自制HBeAb AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能够达到临床检测要求,可用于临床血清样本HBeAb浓度的测定。

人促卵泡激素光激化学发光免疫分析法的建立及性能评价

目的利用光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)建立人促卵泡激素(hFSH)的快速检测试剂。方法使用2株配对的hFSH单克隆抗体,一株hFSH单克隆抗体用生物素标记,另一株hFSH单克隆抗体包被于受体微球上,与包被有链霉亲合素的供体微球共同构成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果自制hFSH试剂分析敏感性和功能敏感性分别为0.09和0.12 U/L,线性测量范围为0.09～192.00 U/L,试剂的分析内变异系数(CV)和分析间CV分别为4.2%～7.1%和7.5%～8.3%,均<10.0%,与人黄体生成素(hLH)、人促甲状腺素(hTSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的交叉率分别为0.16%、0.08%和0.02%。100份临床血清样本用本试剂与西门子Immulite 2000促卵泡生成激素化学发光(CLIA)检测试剂盒检测,其相关系数为0.979(P<0.001)。结论自制hFSH AlphaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本hFSH浓度的测定。

胰岛素光激化学发光免疫分析法的建立

目的建立血清中胰岛素(INS)光激化学发光免疫分析的定量检测方法。方法用2株配对的INS单克隆抗体,一株INS单克隆抗体包被受体微球,另一株INS单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂检测人血清中的INS。结果 INS-AlphaLISA的灵敏度为0.753μU/ml,线性测量范围为0.753～180μU/ml,分析内和分析间的精密度分别为7.46%～9.74%、5.24%～7.31%,与C肽无明显交叉反应、与胰岛素原有轻微交叉反应,125份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.983。结论本法建立的INS-AlphaLISA是一个各项指标均能达到临床要求的、可靠的检测,有望替代国内外同类产品用于临床。

癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立

目的:利用光激化学发光免疫分析技术(Al-phaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂。方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3%～6.8%、5.5%～8.1%,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976。结论:自制CEA Al-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定。

C肽光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的：研制光激化学发光免疫分析技术（AlphaLISA）建立人血清C肽（C peptide）的快速检测试剂盒。方法：采用夹心法建立C peptide AlphaLISA试剂盒。结果：自制C肽试剂盒灵敏度为0.06ng/ml.,可测范围为（0.06~22）ng/ml。批内与批间的精密度分别为4.0%~4.8%,5.6%~6.8%,与胰岛素以及胰岛素原无交叉反应,使用本试剂盒与CMIA-ARCHITECT试剂盒同时检测98份临床血清样本,结果具有相关性,其相关系数为0.973。结论：自制C肽AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能够达到临床检测要求,可用于临床血清样本C肽浓度的测定。

胃蛋白酶原光激化学发光免疫测定方法的建立

目的建立一种检测人血清胃蛋白酶原浓度的光激化学发光免疫测定方法。方法采用双抗体夹心法建立检测人血清中胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ浓度的方法,评估其分析灵敏度、回收率和批内精密度,并与雅培（化学发光法）进行比较。结果胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的分析灵敏度分别为0.8ng/mL和0.6ng/mL,回收率分别为100.3%、106.5%,批内变异系数（CV）为0.93%~4.1%、1.2%~4.3%,与化学发光法的相关性较好（r=0.99）。结论该方法测定胃蛋白酶原具有较高灵敏度、精密度和准确性,适用于临床。方法建立后可进一步进行长期稳定性试验。

光激化学发光法与电化学发光免疫法检测甲胎蛋白的一致性

目的:参照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)的EP9-A2文件,对测定血清中甲胎蛋白(AFP)含量的电化学发光免疫法和光激化学发光法进行方法学比对试验,比较二者结果的一致性。方法:收集40例患者血清标本,以罗氏Cobas601电化学发光免疫分析仪为比较仪器(x),博阳LICA光激化学发光免疫分析仪为实验仪器(y),同时检测血清中AFP的含量;分析2种生化仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的一致性。结果:2种仪器测定的结果相关性良好(r=0.9925),预期偏倚可以接受。结论:在严格按操作规程进行检测的前提下,2种方法测定结果基本一致,其偏差可为临床所接受。当同一实验室同一检验项目存在2种以上检测方法时,应进行方法比对,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性。

Lica光激化学发光免疫分析系统检测乙肝两对半的性能评价

目的对Lica光激化学发光免疫分析系统主要性能进行初步评价。方法以美国临床实验室标准化协会(CLSI)制定的评价标准,通过一系列实验设计,对Lica光激化学发光免疫分析系统进行乙肝"两对半"检测的精密度、准确度、线性、分析灵敏度等进行评价。结果 Lica光激化学发光免疫分析系统进行乙肝"两对半"检测,批内不精密度变异系数在1.49%～4.40%,总不精密度在2.15%～6.22%,回收试验的回收率为96.32%～106.54%,HbsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc的分析灵敏度分别为0.04ng/mL、1.72mIU/mL、0.09PEIU/mL、0.31PEIU/mL、0.02PEIU/mL。结论 Lica光激化学发光免疫分析系统各方面性能良好,测定样本快速、准确、精密可靠,能适应医院日常样本的检测需要。

小鼠肿瘤坏死因子-α光激化学发光免疫法的建立

采用光激化学发光免疫法（LICA）建立快速定量检测小鼠mTNF-α。用两株mTNF-α不同表位的单克隆抗体（McAb）,一株McAb包被发光微粒,另一株为生物素化McAb,两者与链亲和素包被的感光微粒构建双McAb夹心法mT-NF-α-LICA。数据采用双对数函数处理程序。结果表明：方法灵敏度为0.5ng/L;ED20、ED50、ED80分别为14.96 ng/L、77.5 ng/L、401.0 ng/L;可测范围为0.5~1200 ng/L;批内和批间CV分别为7.8%和10.5%;平均回收率为100.3%。mTNF-α-LICA与ELISA有较好的相关性。本文建立的mTNF-α-LICA法是mTNF-α检测中灵敏的方法,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。

妊娠相关血清蛋白A光激化学发光免疫分析法的建立

目的采用光激化学发光免疫分析技术（AlphaLISA）建立快速定量检测妊娠相关血清蛋白A（PAPPA）的方法。方法用两株配对的PAPPA单克隆抗体，一株PAPPA单克隆抗体包被受体微球，另一株PAPPA单克隆抗体用生物素标记，与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂。结果自制PAPPA试剂分析灵敏度为1．365mU／L，线性测量范围为1．365～10000mU／L，分析内和分析间的精密度分别为5．61％～6．51％和2．07％～4．82％，与AFP、RPL、HPL和HCG无明显交叉反应。使用自制试剂对853份9～13周的正常孕妇血清进行检测，建立了孕妇血清在不同孕周时的中位数水平，为正常值参考范围的确定提供了一定依据，其中165份临床血清样本使用自制试剂与Perkin Elmer公司PAPPATRFIA诊断试剂盒同时进行检测，结果具有相关性（r=0．987）。结论自制PAPPA光激化学发光免疫分析试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求，有望替代国外同类产品。

化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用

目的研究探讨化学发光免疫分析技术(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙肝病毒血清学检验中的应用价值。方法 141例疑似乙肝患者,均在晨间空腹静脉采血分离血清后分别采用ECLIA、ELISA两种方式进行检测,对比分析两种检测结果。结果 141例疑似乙肝患者通过ECLIA、ELISA两种方式检验病毒血清,其中ELISA方式检验乙型肝炎病毒血清标志物[乙肝表面抗原(HBs Ag)、乙肝表面抗体(HBs Ab)、乙肝e抗原(HBe Ag)、乙肝核心抗体(HBc Ab)]与ECLIA检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);但是两种方式检测HBe Ab标志物差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝病毒血清学检验中采用ECLIA诊断价值显著高于ELISA方式,前者在乙型肝炎病毒e抗体(HBe Ab)阳性检出率明显高于后者,具有重要临床意义。

光激化学发光免疫分析法检测孕妇血清W物质

目的建立定量检测孕妇血清W物质的光激化学发光免疫分析(LICIA)法并进行方法学评价。方法包被有W物质(T2S类似物)的感光微粒与兔抗W物质抗体连接,与生物素化羊抗兔IgG及包被有链霉亲合素的发光微粒构成检测体系;对LICIA法反应条件进行探索并进行方法学评价。结果 LICIA法的检测灵敏度为5 pg/mL,线性范围为5～10 000 pg/mL;批内、批间变异系数(CV)均<10%;回收率为89.2%～108.1%;T3S<10 ng/mL、T4S<100 ng/mL、Hb<5.0 g/L、T-Bil<500mol/L、TG<3 mmol/L对LICIA法检测W物质无显著干扰;LICIA法稳定性较好;与放射免疫分析(RIA)法比较,LICIA法检测W物质差异无统计学意义(t=1.012,P>0.05)。检测孕早期孕妇血清W物质的参考值上限为847 pg/mL。结论 LICIA法检测W物质灵敏且简便易行,可用于孕妇血清W物质的检测。

光激化学发光均相免疫分析的应用动态

光激化学发光均相免疫分析(LOCI)技术,是一种新型的免疫纳米传感技术,它结合了激光技术、化学发光传感技术与免疫分析技术的优点,并以其简单快速、灵敏度高、特异性强、适用面广等优势引起越来越多的关注,成为当今免疫传感检测领域的前沿热点.LOCI技术有效避免了传统免疫分析方法中的洗脱、分离等繁琐步骤,降低了交叉反应的可能性以及背景噪音的影响,显著提高了分析效率和检测灵敏度.LOCI技术在诸多领域的高通量检测和筛选中得到了广泛应用,因此,极有必要对LOCI技术的相关应用及发展趋势进行总结,从而加速其推广应用.本文综述了LOCI技术在生物医学、药物学、食品安全以及检验检疫等领域的应用状况,并根据各自学科发展的不同特点探索了其发展趋势.

β-人绒毛膜促性腺激素光激化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）浓度的光激化学发光免疫分析方法。方法采用2株针对不同抗原表位的抗β-HCG抗体,其中一株抗体用来包被发光微粒,另一株抗体标记生物素,以双抗体夹心法检测人血清中的β-HCG浓度,并与Beckman-Coulter公司试剂（化学发光法）进行比较。结果发光微粒浓度为100μg/mL、生物素标记抗体浓度为7μg/mL时,检测范围为0~1 000 mIU/mL,灵敏度为0.16 mIU/mL,平均回收率为100.3%,批内变异系数（CV）为0.80%~3.99%,批间CV为2.25%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率低,稳定性较好,与化学发光法的符合率好（r=0.99）。结论光激化学发光免疫分析方法测定β-HCG具有较高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床测定。

基于光激化学发光技术开发的多表位检测cTnI的方法

目的建立一种多表位识别检测人血清心肌肌钙蛋白水平的光激化学发光免疫检测分析方法。方法采用双抗体夹心法,通过多表位识别建立检测人血清中心肌肌钙蛋白水平的方法,评估其分析灵敏度、回收率和批内精密度,并与Siemens（化学发光法）进行比较。结果心肌肌钙蛋白I的分析灵敏度为0.06 ng/ml,回收率为93.43%,批内精密度（CV）为0.62%-1.55%,与化学发光法的符合率好（r=0.99）。结论光激化学发光免疫分析方法多表位测定心肌肌钙蛋白I具有超高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床。