小鼠肿瘤坏死因子-α光激化学发光免疫法的建立

采用光激化学发光免疫法（LICA）建立快速定量检测小鼠mTNF-α。用两株mTNF-α不同表位的单克隆抗体（McAb）,一株McAb包被发光微粒,另一株为生物素化McAb,两者与链亲和素包被的感光微粒构建双McAb夹心法mT-NF-α-LICA。数据采用双对数函数处理程序。结果表明：方法灵敏度为0.5ng/L;ED20、ED50、ED80分别为14.96 ng/L、77.5 ng/L、401.0 ng/L;可测范围为0.5~1200 ng/L;批内和批间CV分别为7.8%和10.5%;平均回收率为100.3%。mTNF-α-LICA与ELISA有较好的相关性。本文建立的mTNF-α-LICA法是mTNF-α检测中灵敏的方法,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。

光激化学发光免疫分析法检测孕妇血清W物质

目的建立定量检测孕妇血清W物质的光激化学发光免疫分析(LICIA)法并进行方法学评价。方法包被有W物质(T2S类似物)的感光微粒与兔抗W物质抗体连接,与生物素化羊抗兔IgG及包被有链霉亲合素的发光微粒构成检测体系;对LICIA法反应条件进行探索并进行方法学评价。结果 LICIA法的检测灵敏度为5 pg/mL,线性范围为5～10 000 pg/mL;批内、批间变异系数(CV)均<10%;回收率为89.2%～108.1%;T3S<10 ng/mL、T4S<100 ng/mL、Hb<5.0 g/L、T-Bil<500mol/L、TG<3 mmol/L对LICIA法检测W物质无显著干扰;LICIA法稳定性较好;与放射免疫分析(RIA)法比较,LICIA法检测W物质差异无统计学意义(t=1.012,P>0.05)。检测孕早期孕妇血清W物质的参考值上限为847 pg/mL。结论 LICIA法检测W物质灵敏且简便易行,可用于孕妇血清W物质的检测。

人促卵泡激素光激化学发光免疫分析法的建立及性能评价

目的利用光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)建立人促卵泡激素(hFSH)的快速检测试剂。方法使用2株配对的hFSH单克隆抗体,一株hFSH单克隆抗体用生物素标记,另一株hFSH单克隆抗体包被于受体微球上,与包被有链霉亲合素的供体微球共同构成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果自制hFSH试剂分析敏感性和功能敏感性分别为0.09和0.12 U/L,线性测量范围为0.09～192.00 U/L,试剂的分析内变异系数(CV)和分析间CV分别为4.2%～7.1%和7.5%～8.3%,均<10.0%,与人黄体生成素(hLH)、人促甲状腺素(hTSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的交叉率分别为0.16%、0.08%和0.02%。100份临床血清样本用本试剂与西门子Immulite 2000促卵泡生成激素化学发光(CLIA)检测试剂盒检测,其相关系数为0.979(P<0.001)。结论自制hFSH AlphaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本hFSH浓度的测定。

光激化学发光免疫分析法测定低浓度HBsAg效果评价

目的比较光激化学发光免疫分析法(LICA)与电化学发光免疫分析法(ECLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及胶体金法测定低浓度HBsAg,并评价LICA测定HBsAg的临床效果。方法以广西壮族自治区临检中心提供的临界值控制品作为质控,经ECLIA筛选的HBsAg标本吸光度与仪器所给临界值(Cut-off)的比值(COI)为1～50(低浓度)的临床标本80例(观察组),HBsAg COI<1的临床标本30例(对照组),分别使用LICA、ECLIA、ELISA及金标法测定。结果 LICA测定HBsAg的灵敏度为0.25ng/mL,平均批内变异系数(CV)为8.6%;ECLIA法测定HBsAg的灵敏度为0.12ng/mL,CV为7.8%;ELISA法测HBsAg灵敏度为0.50ng/mL,CV为11.9%,胶体金法灵敏度1ng/mL。观察组标本中LICA检出阳性为79例,ELISA检出阳性为75例,胶体金法检出阳性为20例。结论 LICA检测HBsAg与ECLIA有很高的符合率,在低浓度的HBsAg检测中,可最大程度地减少假阴性结果,且该法可进行自动化定量检测,适于临床使用。

促甲状腺素光激化学发光免疫测定法的建立和初步应用

采用光激化学发光免疫测定法(LICA)技术建立促甲状腺素(TSH)快速定量检测方法。采用两株针对TSH不同表位的单克隆抗体,一株单抗包被发光微粒,另一株为生物素化单抗,两者与链亲和素包被的感光微粒一起构建双抗体夹心LICA。数据处理采用双对数函数处理程序。方法的灵敏度为0.015mIU/L;批内CV为2.5%～3.6%,批间CV为2.6%～4.4%;平均回收率为100.60%。与时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)比对,相关系数达0.9681;与TRFIA临床测定值呈明显相关;正常值范围为0.33～3.09mIU/L。本文建立的TSH光激化学发光免疫测定法是目前TSH检测中最快速灵敏的方法之一,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。

4种方法测定低浓度HBsAg效果评价

乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg）是由Dane颗粒的外壳和直径22nm的球型颗粒和管型颗粒所组成。 HBsAg是人体感染乙型肝炎病毒（ HBV ）的标志，是人体感染HBV后最先出现的指标，具有免疫原性，可激发机体产生相应的抗体。目前，中国大多数实验室采用酶联免疫吸附试验（ ELISA ）法及胶体金法进行检测。但对于HBsAg低浓度的标本，检测时常因方法学的原因造成灵敏度较低，导致临床出现漏检，并且由于其检测的影响因素较大，尤其是对灰区附近的标本测定结果差异更大，导致重复性差。胶体金法虽然操作简单，但灵敏度最低，临床漏检率最高。光激化学发光免疫分析法（ LICA）始于20世纪90年代问世的单线态氧分子能量传递发光免疫分析技术LOCI经过长时间的发展国内已成功研制了基于LOCI检测原理的LICA及检测设备和相关试剂。本文使用LICA、ELISA及胶体金法同时测定经电化学发光免疫分析法ECLIA筛选的HBV定量检测阳性胶体金法标本吸光度与仪器所给临界值 Cut -off 的比值 COI为1-50的临床标本60例，HBsAgCOI＜1的临床标本30例作为阴性对照，以天津市临床检验中心提供的临界值控制品作为质控，结果报告如下。

两种方法检测血清促甲状腺激素的对比研究

目的采用电化学发光免疫分析法(ECL)与光激化学发光免疫分析法(LiCA)分别测定血清促甲状腺激素(TSH)水平,分析LiCA检测TSH的性能,以及两种方法检测的符合程度。方法按罗氏Cobas e601甲状腺功能初筛结果区间要求,选取132份临床检测标本,其中灰区标本占比>15%,异常标本占比>40%。分析两种方法的精密度、测定结果的相关性,以及诊断性能。结果LiCA检测高、低水平质控品批内变异系数(CV)、批间CV均较ECL小(P<0.05)。相关性分析提示,ECL与LiCA检测TSH的线性回归方程为Y=0.889 9 X-0.042 4,决定系数R 2=0.998,两种方法的测定值之间存在着高度相关性(P<0.01)。两种方法判定甲状腺功能的总体符合率为87.12%,Kappa值为0.801,具有高度一致性。两种方法对甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退一致性判定上的差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种方法测定TSH的性能无明显差异,且LiCA为均相反应,具有快速、免清洗、精密度高、成本低等优点,适用于临床检测,尤其适用于大批量标本检测。

AlphaLISA检测新型冠状病毒

目的建立均相光激化学发光免疫分析方法(AlphaLISA)快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)。方法采用新型冠状病毒抗体偶联发光微球,生物素标记另一抗体,以及链霉亲和素偶联感光微球构建新型冠状病毒AlphaLISA检测体系。采用SARS-CoV-2真核表达抗原和灭活病毒对AlphaLISA方法进行评价,并与商业化ELISA试剂盒进行比对。结果确定单抗1#与多抗组别作为新型冠状病毒AlphaLISA检测的抗体对,AlphaLISA对新型冠状病毒抗原的检出限为0.39 ng/ml,具有较好的重复性,批内差1.90%~8.93%,批间差1.75%~9.04%,对不同临床样本的检测具有较好的耐受性,与ELISA试剂盒相比对灭活病毒的检测敏感性更高。结论AlphaLISA可实现对SARSCoV-2的高效快速检测。