光神霉素A抑制人肺腺癌A549/DDP细胞MRP1基因表达

该研究旨在探讨Sp1抑制剂光神霉素A(Mithramycin A)对人肺腺癌A549/DDP细胞MRP1表达的影响。不同浓度光神霉素A作用A549/DDP细胞48 h后,采用MTT法检测细胞存活率,Real time RT-PCR检测Sp1和MRP1基因表达水平,Western blot检测Sp1和MRP1蛋白表达水平。结果显示,300 nmol/L光神霉素A作用A549/DDP细胞48 h后Sp1和MRP1 mRNA表达水平分别降低31.22%和85.44%,Sp1和MRP1蛋白表达水平分别降低53.27%和40.42%。提示光神霉素A能够通过抑制Sp1表达,从而抑制MRP1表达。

肺癌细胞株中EPS8表达下降对顺铂化疗敏感性的影响

目的探究肺癌细胞株中表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)表达下降对顺铂化疗敏感性的影响。方法脂质体转染法将EPS8沉默后并通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测EPS8在各细胞系的沉默效率。采用Caspase-3/7细胞凋亡实验检测,5μmol顺铂对淋巴母细胞样细胞系(LCLs)和A549肺癌细胞凋亡的影响。Alamar Blue细胞生长抑制实验中采用0.01μmol/L光神霉素A作为EPS8抑制剂单用及联用不同浓度顺铂,Alamar Blue细胞生长抑制实验检测其对癌和非癌细胞系生长抑制的影响。结果与对照组比较,LCLs细胞系中EPS8的沉默导致顺铂干预时细胞存活率升高7.9%,凋亡率下降8.7%。与此相反,顺铂干预导致肺癌细胞存活率下降20.6%。光神霉素A在LCLs细胞系中能够降低EPS8的表达,并与对照组比较,非癌细胞系LCLs在顺铂干预时具有更低Caspase-3/7活性,凋亡率降低。在5种非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中,光神霉素A同样能够导致EPS8表达下降。与LCLs细胞系比较,光神霉素A的干预能够使4种NSCLC细胞和膀胱癌细胞HTB9对顺铂的敏感性增加(P<0.05),但NSCLC中存在EGFR突变的H1975细胞对顺铂的敏感性并未出现统计学改变(P>0.05)。结论通过核糖核酸(RNA)干扰或者光神霉素A将EPS8表达抑制后,肿瘤细胞对顺铂的敏感性升高,而正常细胞LCLs对其敏感性却出现下降。对EPS8分子机制的进一步研究有望其成为抗肿瘤治疗的新靶点。

输液滤器对药物的选择吸附作用

在临床和实验研究中,很多药品采用带滤膜的输液器行静脉输注,这种滤膜是出纤维素酯制成,它对某些药物有选择性的吸附作用。例如;将40iu胰岛素溶解在100ml 5%葡萄糖注射液中,然后使其通过带滤膜的输液器.

阻断Sp1蛋白对Ki-67基因转录的影响

目的观察阻断转录因子Sp1蛋白及其和顺式作用元件的结合，对Ki-67基因转录的抑制作用。方法Sp1小干扰RNA（Sp1-siRNA）、Sp1蛋白竞争剂光神霉素分别作用于宫颈癌Hela细胞、人肾癌OS—RC-2和肺癌A549细胞。Westernblot检测Hela细胞Sp1蛋白表达。细胞免疫组织化学检测3种肿瘤细胞Ki．67蛋白表达。Sp1—siRNA或光神霉素与Ki-67基因核心启动子pGLBK235共转染上述3种肿瘤细胞，双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性。结果Sp1—siRNA处理的Hela细胞Sp1蛋白表达显著减少。Sp1-siRNA、光神霉素处理的3种肿瘤细胞Ki-67蛋白均显著减少。Sp1-siRNA共转染的质粒pGLBK235启动子活性在Hela、OS-RC-2、A549细胞中分别降至单独转染pGLBK235的45．9％、64．5％、46．0％；光神霉素共转染的pGLBK235启动子活性随着药物浓度的升高而降低，其中药物浓度为500nmol／L时其活性最低，在Hela、OS—RC一2、A549细胞分别降至单独转染pGLBK235的34．7％、44．2％、29．8％。结论抑制Spl蛋白或是阻断其与Sp1顺式作用元件的结合，可以有效抑制Ki-67基因转录。

转录因子Sp1调控VEGF和MMP2的表达促进NK/T细胞淋巴瘤的侵袭

目的:检测转录因子Sp1在NK/T细胞淋巴瘤(NK/TCL)细胞株中的表达,探讨Sp1对肿瘤细胞侵袭的作用及其可能的调控机制。方法:利用Real-time PCR、免疫荧光技术和蛋白质免疫印迹技术检测Spl的表达,Real-time PCR技术和蛋白质免疫印迹技术检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)2的表达,Transwell技术观察Sp1抑制剂光神霉素A(MIT)对细胞侵袭能力的影响。结果:NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6和SNT-8均高表达Sp1。MIT显著抑制SNK-1、SNK-6和SNT-8中VEGF基因和蛋白水平的表达,MMP2蛋白的表达以及细胞的侵袭能力。结论:NK/TCL肿瘤细胞株中存在高表达的Sp1,并可促进肿瘤细胞的侵袭。Sp1可通过调控VEGF和MMP2的表达影响细胞的侵袭力。

Sp1在 NK／T 细胞淋巴瘤细胞株中的表达及其对细胞侵袭的影响

目的：观察转录因子 Sp1在 NK／T 细胞淋巴瘤（NK／TCL）细胞株中的表达及其对细胞侵袭的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、免疫荧光和 Western blot 法测定 NK／TCL 细胞株 SNK-1、SNK-6和健康人 NK 细胞中 Sp1的表达；采用 Sp1抑制剂光神霉素 A（MIT）作用于 NK／TCL细胞株后，用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 法检测 Sp1、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达；采用 Transwell 实验观察 MIT 对细胞侵袭力的影响。结果 NK／TCL 细胞株SNK-1、SNK-6中 Sp1基因和蛋白高表达。其中基因的表达水平分别是健康人 NK 细胞的（9.4±0.3）倍和（10.6±0.3）倍（P＝0.0052，P＝0.0037），蛋白的表达水平分别是健康人 NK 细胞的（5.4±0.3）倍和（8.6±0.5）倍（P＝0.0083，P＝0.0069）。100 nmol／L MIT 抑制 Sp1后，与二甲基亚砜处理的对照组相比，细胞株中 IGF-1R 的基因表达量分别下降了（83.9±3.7）%和（65.8±4.2）%（P＝0.0082，P＝0.0097），蛋白表达量分别下降了（51.5±7.1）%和（49.6±9.1）%（P＝0.0178，P＝0.0155）。100 nmol／L MIT 处理细胞后 SNK-1、SNK-6细胞的侵袭率分别下降了（29.6±6.4）%和（37.2±7.6）%（P＝0.0418，P＝0.0372），MMP-2蛋白表达量分别是对照组蛋白表达量的（52.7±4.7）%、（29.7±5.6）%（P＝0.0286，P＝0.0202）。结论 NK／TCL细胞株高表达 Sp1，其可能通过正调控 IGF-1R 增强 MMP-2的表达，进而提高 NK／TCL 细胞的侵袭力。