光-直接多肽反应试验方法的建立及其在化学物光致敏性评价中的应用

目的建立基于光-直接多肽反应试验(photo-direct peptide reactivity assay,photo-DPRA)的化妆品原料光致敏性体外化学评价方法,并使用该方法筛选化妆品用化学防晒剂的光致敏性。方法将受试物与半胱氨酸多肽以1∶10的比例混合,在UVA光照(5 J/cm^(2))或避光处理后,再避光孵育24 h,采用高效液相色谱分析并计算半胱氨酸多肽在光照和避光条件下的消耗率,依据半胱氨酸多肽预测模型进行光致敏性预测。结果建立的光-直接多肽反应试验能够准确区分出7种标准化学品的光致敏性,方法建立成功。使用该方法对12种化妆品用防晒剂的检测结果显示,苯基苯并咪唑磺酸被判定为具有光致敏性,其余11种防晒剂未见光致敏性。结论光-直接多肽反应可用于化妆品原料的光致敏性高通量初筛,为建立化妆品原料的光致敏性评价替代模型提供参考。

直接多肽反应试验在化妆品检测中的应用

以OECD指南为基础,在实验室建立直接多肽反应试验(DPRA)方法并进行实验室内验证,同时评估该方法对测试化妆品配方致敏反应的可能性。依据OECD TG 442C指南,将受试物(包括化学品和化妆水配方)分别与半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽以10:1和50:1的比例避光孵育24h,采用高效液相色谱法分析两种多肽的消耗,计算多肽消耗率并依据DPRA预测模型对受试物致敏性进行判定。由试验结果可知,DPRA可准确区分16种化学品的致敏性,检测结果与OECD TG 442C指南及文献中小鼠淋巴结试验(LLNA)结果一致;DPRA对3种化妆水配方检测结果分别为致敏物、致敏物、非致敏物,与多肽反应程度分别为中、低和无。

基于超高效液相色谱的改良直接肽反应试验预测化学物皮肤致敏性

建立基于超高效液相色谱改良直接肽反应试验预测化学物致敏性并提高检测效率和通量。选择8种已知皮肤致敏性化合物与半胱氨酸多肽或赖氨酸多肽反应24 h,通过基于超高效液相色谱或高效液相色谱的检测系统计算得到多肽消耗率预测受试物皮肤致敏性。结果显示,基于超高效液相色谱的改良直接多肽反应试验能正确区分8种化学物为皮肤致敏物或非致敏物,且节省检测时间,提高检测通量,同时色谱峰分离度更高。

正交试验设计法研究二安替比林-(2-羟基)-苯基甲烷试剂与铬(Ⅵ)的显色反应

以正交试验设计法研究并得到了二安替比林 - (2 -羟基 ) -苯基甲烷试剂吸光光度法测定微量铬的最佳显色条件 ,其最大吸收波长为 480 nm。 Cr( )在 0 .10～ 10μg· 2 5 m L- 1 范围内呈良好线性关系 ,线性回归方程为A=0 .0 5 83C+0 .0 478,线性相关系数为 0 .9971,摩尔吸光系数ε=1.37× 10 5(L· mo L- 1 · cm- 1 )。灵敏度比文献报道有较大提高。方法应用于水样中铬 ( )的测定 。

直接多肽反应在预测注射用曲克芦丁过敏反应中的应用

目的建立直接多肽反应试验(DPRA)的致敏检测方法,对发生药品不良反应(ADR)聚集性信号的注射用曲克芦丁的致敏性进行评价。方法运用HPLC法,测定注射用曲克芦丁涉ADR批次和正常批次对半胱氨酸多肽(Cys)和赖氨酸多肽(Lys)的消耗量。结果涉ADR批次及正常批次制剂,与Cys和Lys均不发生共洗脱,采用1∶10 Cys和1∶50 Lys模型预测,各批次之间的数据结果差异较小,依模型预测判定各批次致敏性均为阴性。结论各批次注射用曲克芦丁DPRA方法预测结果均为阴性,基于该方法原理分析,初步判定涉ADR批次注射用曲克芦丁发生临床ADR聚集性信号原因应与小分子半抗原无关,同时探讨了该方法用于预测致敏成分是否为小分子半抗原的可行性。

光毒性试验方法研究

目的探讨采用单纯紫外线A(UVA)为照射光源的光毒性试验的影响因素及试验条件。方法观察了照射强度随照射时间的变化及照射时间对照射野内温度的影响。选择健康成年白化豚鼠 ,以10J/cm2 剂量UVA照射50min观察阳性对照8_甲氧基补骨脂 (8_MOP)的皮肤光毒性。结果照射开始后100min内光强度稳定在3 3～3.4mW/cm2 ,室温18℃时照射100min后照射野内温度上升1 5℃ ,8_MOP具有明显皮肤光毒性。结论该方法可准确测定化学物质的光毒性。

UV/Fenton反应对直接黑38的脱色与矿化

为了研究过程参数对photo-Fenton法降解偶氮染料直接黑38人工废水的影响,进行了实验室规模的UV/Fenton反应光催化降解染料直接黑38的研究。在一定的时间段内检测水溶液直接黑38的UV吸光度、总有机碳(TOC)浓度的变化,确定了直接黑38废水的降解速度。以单因素实验方法确定了pH值、[Fe2+]、[H2O2]比例及其初始浓度对降解速度的影响。实验结果表明,在pH为3,染料浓度为30mg/L,[Fe2+]/[H2O2]比例1:100,[Fe2+]=0.12mmol/L,[H2O2]=12mmol/L条件下,UV/Fenton方法能在50min内使染料脱色率达90%,使TOC的去除率达到57%。实验证明了photo-Fenton法对于含有偶氮染料废水的脱色与矿化具有很好的应用前景。

揿针联合阿片类镇痛药物治疗中重度癌性疼痛的临床疗效及对血清β-内啡肽、P物质水平的影响

目的观察揿针联合阿片类镇痛药物治疗中重度癌性疼痛的临床疗效及对血清β-内啡肽、P物质水平的影响。方法将76例中重度癌性疼痛患者随机分为治疗组、对照组,每组38例。对照组给予常规治疗(包括积极治疗原发病、营养支持、阿片类镇痛药物止痛治疗等),治疗组在常规治疗的基础上加用揿针疗法,连续治疗14 d。观察不良反应的发生情况,比较治疗前后两组患者疼痛数字评分(NRS)、简明疼痛量表(BPI)、卡氏功能状态评分(KPS),以及血清β-内啡肽、P物质水平的变化情况。结果①试验期间,治疗组脱落4例,对照组脱落3例,最终完成试验者69例,其中治疗组34例、对照组35例。②治疗前后组内比较,治疗组疼痛NRS评分降低、KPS评分升高(P<0.05),对照组疼痛NRS、KPS评分差异无统计学意义(P>0.05);组间治疗后比较,治疗组疼痛NRS评分低于对照组、KPS评分高于对照组(P<0.05)。③治疗前后组内比较,治疗组BPI中24 h最剧烈疼痛、24 h平均疼痛、目前疼痛、对日常生活影响、对情绪影响、对日常工作影响、对睡眠影响及疼痛影响程度总评分降低(P<0.05),对行走能力影响评分升高(P<0.05),对照组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);组间治疗后比较,上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。④治疗前后组内比较,两组血清β-内啡肽水平升高、P物质水平降低(P<0.05);组间治疗后比较,治疗组血清P物质水平低于对照组(P<0.05)。⑤治疗组便秘、恶心呕吐发生率及不良反应总发生率低于对照组(P<0.05)。结论加用揿针对癌性疼痛患者具有更好的临床疗效,可缓解疼痛、改善患者生活质量、降低阿片类镇痛药物的不良反应发生率,其机制可能与调节血清β-内啡肽、P物质表达水平有关。

免疫应答中垂体及下丘脑β—内啡肽样免疫反应性物质含量的动态变化

本文采用放射免疫分析法连续测定成年Wistar大鼠由腹腔一次注射绵羊红细胞诱发抗体应答过程中,垂体前叶(AL)、神经中间叶(NIL)和下丘脑等部位B—内啡肽样免疫反应性物质(ir-β—EP)的含量。结果发现:ALir—β—EP的含量呈现随直接空斑形成细胞(PFC)水平反相波动的趋势。免疫后第3天、ALir-β-EP含量明显下降(P 0.05);PFC反应高峰时(免疫后第5天)、AL和NILir—β—EP含量分别比对照组含量下降了38%和32%,统计学处理、P均小于0.01。据此证实免疫效应物质能影响垂体β-EP的分泌与释放,提示在免疫-神经内分泌环路中、β—EP是一种重要的免疫调节物质。

肾细胞癌组织中谷胱甘肽转移酶π表达与临床病理特征的关系

目的探讨肾细胞癌(RCC)组织中谷胱甘肽转移酶π(GST-π)表达与临床病理特征的关系。方法经皮穿刺取材73例RCC组织,采用酶联免疫吸附试验测定RCC组织中GST-π的表达,采用反转录-聚合酶链反应测定RCC组织中GST-πmRNA的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 RCC组织中GST-π及其mRNA表达与患者的年龄、性别无相关性(P>0.05)。Ⅱ、Ⅲa、Ⅲb和Ⅳ期RCC组织中GST-π及其mRNA表达显著高于Ⅰ期(P<0.01),Ⅲa、Ⅲb和Ⅳ期RCC组织中GST-π及其mRNA表达显著高于Ⅱ期(P<0.01),Ⅳ期RCC组织中GST-π及其mRNA表达显著高于Ⅲa、Ⅲb期(P<0.01),但Ⅲa、Ⅲb期RCC组织中GST-π及其mRNA表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 GST-π的表达与RCC组织TNM分期有关,GST-π可作为RCC诊断及预后评估的酶学指标。

应用DPRA替代方法评价3种香豆素类化合物的皮肤致敏性

应用直接多肽反应试验(DPRA)方法,对化妆品植物提取物原料中存在的蛇床子素、滨蒿内酯、东莨菪内酯3种未知致敏性的香豆素类化合物进行评价。3种香豆素类化合物与半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽模拟的皮肤蛋白共同孵育,使用高效液相色谱法检测3种化合物的多肽消耗率。在标准色谱条件下,蛇床子素和滨蒿内酯与两种多肽的反应体系峰型均正常,东莨菪内酯与赖氨酸反应体系峰型异常,以体积分数0.1%的甲酸水-乙腈流动相体系对标准流动相体系进行优化后检测。结果表明:蛇床子素与半胱氨酸反应体系在反应24 h前产生沉淀,致敏性结果为不确定;滨蒿内酯多肽消耗率均值为6.95%,判定致敏性为阳性,反应等级为弱反应;东莨菪内酯的半胱氨酸多肽消耗率为75.82%,优化色谱条件后的赖氨酸多肽消耗率为80.46%,判定致敏性为阳性,反应等级为中度反应。阳性和阴性对照化合物的结果均与小鼠淋巴结试验(LLNA)致敏性结果一致,实验结果可为3种香豆素类化合物的致敏性提供参考和依据。

体内外组合法在复配防腐剂致敏性评价中的应用

采用直接多肽反应试验(DPRA)、氨基酸衍生化反应试验(APRA)和局部封闭斑贴试验(BT)对多组分复配防腐剂致敏性进行评价。DPRA法测得对羟基苯甲酸丙酯+甲基异噻唑啉酮组合和咪唑烷基脲+甲基异噻唑啉酮组合多肽消耗率分别为56.25%、62.35%,预测结果均为强阳性,对羟基苯甲酸丙酯+咪唑烷基脲组合多肽消耗率为32.55%,预测结果为弱阳性,与APRA法、BT法结果相一致。DPRA法和APRA法可用于非致敏加弱致敏、非致敏加强致敏、弱致敏加强致敏3类组合致敏性评价。复配防腐剂中强致敏组分是多肽和氨基酸衍生物消耗主要决定性因素。体内外组合法可有效用于复配防腐剂致敏性的初步评价。

组合应用替代方法评价5种化妆品中常用防腐剂的皮肤致敏性

采用基于不良反应结局路径(AOP)开发的体外致敏性检测方法对5种常用防腐剂进行皮肤致敏性评估。根据整合测试和评估方法(IATA)的3选2原则,使用直接多肽反应试验(DPRA)和人细胞系活化试验(h-CLAT)分别对化妆品中常用的防腐剂苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸丙酯、咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲进行检测。其中,直接多肽反应试验和人细胞系活化试验参照OECD 442C/442E指南的内容进行。实验结果显示,苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯在DPRA和h-CLAT中均为阴性;咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲在2个试验中均表现出阳性结果;而4-羟基苯甲酸丙酯在DPRA中为阴性,h-CLAT中为阳性。该研究结果表明,甲醛释放体类防腐剂咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲是皮肤致敏物,而苯氧乙醇和4-羟基苯甲酸甲酯不是皮肤致敏物,基于文献调研结合更多的实验数据判定4-羟基苯甲酸丙酯为非致敏物。DPRA和h-CLAT的组合测试弥补了单一方法检测的局限性,适用于化妆品原料皮肤致敏性的初筛。

采用DPRA替代方法评价3种香料的皮肤致敏性

采用直接肽反应试验(DPRA)对新铃兰醛、氯化苔黑醛和苔黑醛3种香料的致敏性进行评价。在本实验室建立DPRA方法,采用高效液相色谱仪测定新铃兰醛、氯化苔黑醛和苔黑醛及其他6种已知致敏性化合物的多肽消除率,并进行皮肤致敏性的预测判定。通过比较DPRA和小鼠局部淋巴结试验(LLNA)结果的一致性,判断方法的可行性,并最终判定3种香料的致敏性。结果表明,6种已知化合物的DPRA和LLNA致敏性结果一致,3种香料的DPRA预测结果均为阳性。DPRA方法操作简便,准确度高,可以作为皮肤致敏性评价的替代方法。

泛影葡胺用于CT增强检查导致过敏性休克抢救的护理

CT是一门新型技术,临床应用日益广泛。我院于2002年5月至2004年2月共检查病人8000例,其中1555例做了增强检查,占检查病人的31.3％,增强效果好,均达到诊断要求。我们的常规剂量:成人为泛影葡胺80ml(30.6g,碘/100m1),小儿为1ml/kg。注射方法:静脉一次快速推注,速度一般于2min以内推完,否则影响增强效果。我们在1555例中共发现过敏者226例,其中轻度200例,占过敏人数的88.5％,中度20例占8.8％,重度6例占2.7％,过敏者静脉碘试验均为(一)。

血清中6-磷酸葡萄糖异构酶抗原升高在类风湿关节炎中的意义探讨

目的评估葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isom erase,GPI)在类风湿关节炎(rheum atoid arthritis,R A)发病中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测100例R A病人、98例其他风湿性疾病病人和108名健康体检者的血清中的G PI浓度,RA病人还检测了抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(rheum atoid factor,RF)和C反应蛋白(CRP)的浓度。结果RA病人中G PI的浓度为(2.4±5.0)滋g/m l,正常对照组为(0.12±0.14)滋g/m l(P<0.01),其他风湿病组为(0.12±0.08)滋g/m l(P<0.01),GPI的浓度在RA活动组和非活动组差异有统计学意义(P<0.01);R A组23%的病人浓度高于2滋g/m l。经过Logistic回归分析发现GPI的浓度与RA病人的关节肿、疼痛成正相关。结论GPI在部分R A病人,尤其在活动期的RA病人血清中异常升高,可以作为RA临床诊断和评估的实验室指标。

两种猪口蹄疫苗免疫效果对比试验

迄今为止,免疫接种仍然是控制猪口蹄疫的关键措施,但在预防接种过程中过敏反应时有发生甚至造成死亡,给基层防疫工作带来较大阻力,给养殖户造成了直接经济损失。因此,笔者通过对猪口蹄疫O型灭活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）（以下简称＂口蹄疫MYA98苗＂）及猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫家畜后的免疫反应情况及抗体水平和变化规律进行比较,为秭归县疫苗选用及制订免疫方案提供参考依据。

采用in silico和in chemico技术评价对氨基酚的皮肤致敏性

目的:采用定量构效关系(QSAR)方法和直接肽结合试验(DPRA)对对氨基酚的皮肤致敏性进行评价。方法:计算机模拟评价(in silico)采用DEREK软件,对化合物的皮肤致敏性进行预测;体外化学分析法(in chemico)采用DPRA试验,用高效液相色谱仪对对氨基酚的多肽消除率进行检测,对其皮肤致敏性进行分级。同时比较2种方法结果一致性。结果:QSAR预测EC3值为0.37%,对应的致敏性分级为强致敏物;DPRA试验的系统适应性符合要求,样品对半胱氨酸多肽的消除率分别为100%,对赖氨酸多肽的消除率分别为43.10%,计算得对氨基酚的多肽消除率为71.55%,对应的致敏性分级为强致敏物。结论:对氨基酚为强致敏性物质。