克罗卡林抗脂质过氧化损伤的实验研究

目的：在大鼠心肌细胞水平研究缺氧再给氧时克罗卡林对心肌细胞内丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及心肌细胞膜脂质流动性的影响，探讨克罗卡林抗脂质过氧化作用及其可能机制。方法：实验用培养的Ｓｐｒｅｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）乳鼠原代心肌细胞，分对照组、缺氧再给氧组及缺氧再给氧＋克罗卡林组（又分３个浓度组，即１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ组、１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ组，１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ组）。每组观察５个培养瓶，分别观察以下指标：心肌细胞内ＭＤＡ含量（荧光微量法）；心肌细胞内ＳＯＤ活性（光化学扩增法）；心肌细胞膜脂质流动性（ＤＰＨ法），以各向异性ｒ值表示膜脂质流动性的大小。数据以ｘ±ｓ表示，组间差异显著性检测用方差分析法。Ｐ＜０．０５为差别有显著性。结果：缺氧再给氧组心肌细胞内ＭＤＡ含量增加，ＳＯＤ活性降低，心肌细胞膜脂质流动性下降（与对照组比较，Ｐ均＜０．０１）；缺氧再给氧＋克罗卡林组上述改变减轻，其中１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ组、１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ组上述指标与缺氧再给氧组及１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ组比较，Ｐ均＜０．０１，呈良好的量效关系。结论：缺氧再给氧时细胞内脂质过氧化作用增强；克罗卡林明显减轻缺氧?

KRN2391和克罗卡林对大鼠离体心脏的保护作用

目的：比较两种不同的 Ａ Ｔ Ｐ敏感性钾通道开放剂 Ｋ Ｒ Ｎ２３９１（ Ｋ Ｒ Ｎ）和克罗卡林（ Ｃ Ｒ）对大鼠离体心脏心功能的影响及缺血后的心脏保护作用。方法：将离体心脏进行完全缺血 ２５ ｍ ｉｎ，观察再灌注３０ ｍ ｉｎ 时心功能的变化。结果：１～２０ μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｋ Ｒ Ｎ 及１～２０ μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｃ Ｒ均能显著增加冠脉灌流量。２０ μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｋ Ｒ Ｎ 及 １０ μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｃ Ｒ 可明显降低心脏收缩功能，１ μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｋ Ｒ Ｎ 和１ μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｃ Ｒ较对照组均有改善缺血后心功能的作用，此作用可完全被格列本脲所阻断。结论：两药均有明显冠脉扩张作用，大剂量应用可降低心脏收缩功能，用不影响心功能的剂量两者均有对缺血后心脏的保护作用，此作用与 Ａ Ｔ Ｐ敏感性钾通道开放有关。

克罗卡林对急性脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用

目的探讨急性脑缺血再灌注后大鼠脑内小胶质细胞的活化及K-ATP通道开放剂克罗卡林(Cromakalin)的脑保护作用。方法将72只SD大鼠,随机分为3组:A组为假手术组,B组为单纯缺血再灌注组,C组为克罗卡林干预组。应用改良Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,免疫组化染色检测OX42(小胶质细胞的标志)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况;应用特异性尼氏染色进行海马CA1区神经元计数。结果 A组各时间点海马CA1区OX42,iNOS均有少量表达,B组OX42,iNOS随时间推移表达增多,72h达高峰,7d减少,与A组相比两者表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.01)。C组各时间点OX42、iNOS与B组相比表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Cromakalin能明显抑制急性脑缺血再灌注后大鼠脑内OX42增殖,减少iNOS的表达,降低海马神经元的死亡程度,具有脑保护作用。

克罗卡林对不同年龄大鼠血管平滑肌张力作用的影响

目的研究钾通道开放剂克罗卡林（ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ）对不同年龄大鼠血管平滑肌张力作用的影响。方法大鼠离体血管平滑肌张力记录法。结果ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ可抑制由苯肾上腺素（Ｐｈｅ）介导弓；起的血管收缩，其作用在老年大鼠明显减弱；血管内皮的去除或分别应用ＮＯ合酶抑制剂Ｌ．ＮＡＭＥ、环氧酶抑制剂亚甲蓝，均可明显降低ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ的舒血管反应，但内皮去除或ＮＯ作用被抑制却消除了ｃｒｏ－ｍａｋａｌｉｍ作用与年龄变化的关系。此外研究还表明：内源性和外源性ＮＯ供体Ａｃｈ及ＳＮＰ的舒血管反应在老年大鼠明显弱于幼年大鼠。结论ＮＯ释放量的减少或血管对ＮＯ反应性的降低可能是引起ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ舒血管作用在老年大鼠明显减弱的重要原因。

克罗卡林和JTV-506对大鼠离体心脏心功能的影响

目的 :对比两种不同的 ATP敏感性钾通道 (KATP通道 )开放剂克罗卡林 (CR)和 JTV- 5 0 6 (JTV)对大鼠离体心脏心功能的影响及缺血后的心脏保护作用。方法 :用含不同药物浓度的灌注液灌注心脏并将心脏进行完全缺血 2 5min,再灌注 30 m in,观察各组心功能的变化。结果 :1～ 2 0μm ol/ L CR及 JTV均能显著增加冠脉灌注量 ,1μm ol/ L的 CR和 JTV较对照组均有改善缺血后心功能的作用 ,其作用可完全被格列本脲所阻断。结论 :两药均有明显冠脉扩张作用 ,大剂量应用可降低心脏收缩功能 ,用不影响心功能的剂量两者均有对缺血后心脏的保护作用 ,此作用与ATP敏感性钾通道开放有关。

K_(ATP)开放剂克罗卡林对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的:探讨ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂克罗卡林(cromakalim)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hy-poxic-ischemic brain damage,HIBD)细胞凋亡的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供依据。方法:建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、DNA原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色方法观察正常对照组、假手术组、HIBD组,克罗卡林用药组(用药1组),克罗卡林+格列苯脲用药组(用药2组)病理变化、细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达情况。结果:①HIBD组大脑皮质区病理变化明显,用药1组病理变化减轻,用药2组病理变化加重;②对照组及假手术组见少量凋亡细胞;HIBD组凋亡细胞明显增多,与对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0·01);用药1组凋亡细胞明显减少,与HIBD组比较差异有显著性(P<0·01);用药2组凋亡细胞与HIBD组比较差异无显著性(P>0·05);③正常对照组及假手术组大脑皮质区Bcl-2有一定量的表达,Bax几乎无表达,HI后该区Bcl-2表达减弱,Bax表达增强,用药1组Bcl-2表达较HIBD组明显增强(P<0·01),Bax表达明显减弱(P<0·01),而用药2组Bcl-2表达及Bax表达与HIBD组比较差异无显著性(P>0·05)。结论:HIBD后Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加;克罗卡林可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,而KATP阻断剂格列苯脲可拮抗克罗卡林以上作用,这可能是克罗卡林治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。

克罗卡林对离体大鼠心肌梗死范围的影响及机制

目的：探讨克罗卡林对离体大鼠心肌梗死范围的影响及机制。方法：用离体大鼠心脏双冠状动脉分别灌流模型，将左冠状动脉灌流量减到原灌流量的５％，进行不完全缺血６０分钟，再进行２小时再灌注。结果：１μｍｏｌ／Ｌ克罗卡林在缺血前及缺血中投予可明显缩小心肌梗死范围，分别从对照组的１９．８％下降到９．６％和８．４％（Ｐ＜０．０５），而再灌注期间用药无效。其作用可被三磷酸腺苷敏感性钾通道阻滞剂格列本脲所阻滞，心肌梗死范围从克罗卡林组的７．３％增加到克罗卡林＋格列本脲组的１６．７％（Ｐ＜０．０５）。结论：克罗卡林有缩小大鼠心肌梗死范围的作用。

克罗卡林预防实验性心肌缺血再灌注中触发活动及触发性心律失常

目的：已有报道克罗卡林（Ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ）对氯化铯诱发的触发活动及触发性心律失常有防治作用。本实验研究缺血及再灌注性心律失常与触发活动的关系，观察克罗卡林对三者的作用，探讨其作用机制。方法：实验分２组。每组８只家兔。均记录缺血１５分钟和再灌注２分钟时缺血区心外膜单相动作电位（ＭＡＰ）。克罗卡林组于结扎左心室支前１０分钟由耳缘静脉注射克罗卡林０．１ｍｇ／ｋｇ，对照组注射等量生理盐水。观察指标包括心外膜ＭＡＰ参数、触发活动与缺血再灌注性心律失常的关系及各自的发生率。组内比较用方差分析，组间同时相比较用ｔ检验，发生率比较用确切概率计算法。Ｐ＜０．０５差别有显著性。结果：①使用克罗卡林后，动作电位９０％复极化时程（ＡＰＤ９０）立即缩短１０％（与用药前比较Ｐ＜０．０５），缺血１５分钟，动作电位９０％复极化时程缩短约２０％（与同时相对照组比较Ｐ＜０．０５）。②克罗卡林组早期后去极化发生率：缺血期为０（与对照组５０．０％比较，Ｐ＜０．０５）；再灌注期为１２．５％（与对照组７５．０％比较Ｐ＜０．０５）。对照组３０．０％的缺血性心律失常及７１．４％的再灌注性心律失常与早期后去极化有关。

克罗卡林及优降糖对实验性急性心肌梗死的影响

目的 :研究克罗卡林及优降糖对心肌梗死面积及梗死部位心肌细胞三磷酸腺苷 (ATP)含量的影响。方法 :以 Wistar大鼠为模型 ,开胸安置缺血再灌注装置 ,将大鼠分为 4组 :A组未作特殊处理 ;B组阻断冠状动脉 (冠脉 ) 1小时 ,再灌注 2小时 ;C组冠脉阻断前 0 .5小时静注克罗卡林 1 0 0μg/ kg;D组冠脉阻断前 0 .5小时静注克罗卡林 1 0 0μg/ kg,接着予优降糖 0 .3mg/ kg。各组动物经上述处理后 ,抽股静脉血测肌酸激酶浓度 ,随后 B、C、D组各分成 2个亚组 ,一亚组摘取心脏测梗死面积 ,另一亚组测梗死部位心肌 ATP含量。结果 :缺血后血浆肌酸激酶含量升高 ,局部 ATP浓度下降 ;克罗卡林缩小心肌梗死面积 ,降低血浆肌酸激酶浓度 ,减轻梗死部位心肌细胞 ATP的消耗 (C组与 B组比较 ,各指标 P值均 <0 .0 1 ) ;优降糖对克罗卡林的上述效应有拮抗作用。结论 :克罗卡林对缺血心肌有明显的保护作用 ;其机制可能与激活心肌细胞膜 ATP敏感性钾通道有关 ;优降糖对克罗卡林的上述效应有拮抗作用。

钾通道激活剂克罗卡林的药理与临床

综述了钾通道激活剂克罗卡林的药理作用及临床应用。

克罗卡林对心肌梗死面积及心肌细胞三磷酸腺苷含量的影响

目的 研究克罗卡林对心肌梗死面积及梗死部位心肌细胞内三磷酸腺苷 (ATP)含量的影响 ,并探讨其可能机制。方法 将 84只开胸安置缺血再灌注装置的Wistar大鼠分为四组 :对照组 ,缺血再灌注组 ,克罗卡林 +缺血再灌注组和克罗卡林 +优降糖 +缺血再灌注组 ,分别测定各组的血浆肌酸激酶浓度、梗死面积和梗死部位心肌细胞ATP含量。结果 缺血后血浆肌酸激酶含量升高 ,局部ATP浓度下降 ;克罗卡林能缩小心梗面积、降低血浆肌酸激酶浓度、减少梗死部位心肌细胞ATP的消耗 (P <0 .0 1) ;优降糖明显减弱克罗卡林的上述作用 (P <0 .0 1)。结论 克罗卡林对缺血心肌有明显的保护作用 ;

硝酸甘油与克罗卡林合用抗大鼠心肌缺血的药理性预适应

目的:观察克罗卡林和硝酸甘油两药单用及合用抗大鼠心肌缺血的药理性预适应早期心脏保护作用。方法:实验于2005-10/2006-05在辽宁医学院药理学实验室进行。①实验分组和方法:取60只雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只:假手术组:完成模型全部操作,只穿线不结扎。缺血再灌注组:采用左冠状动脉下穿线,拉紧丝线引起心肌缺血,放松丝线给予再灌注的方法建立心肌缺血再灌注损伤动物模型,缺血30min,再灌注60min。缺血预适应组:缺血前行缺血5min再灌注5min,共3个循环,余同缺血再灌注组。硝酸甘油组:100μg/kg尾静脉缓慢静脉滴注1h,再行缺血再灌注。克罗卡林组:100μg/kg尾静脉缓慢静注,30min后行缺血再灌注。硝酸甘油+克罗卡林组:缺血前1h静滴硝酸甘油100μg/kg,30min时静注克罗卡林,再行缺血再灌注。②实验评估:各组大鼠在再灌注60min后,经颈动脉取血采用比色法测定肌酸激酶;于实验结束后立即取左室游离心肌组织0.5g,采用羟胺法测定超氧化物歧化酶活性,硫代巴比妥钠比色法测定丙二醛含量,硝酸还原酶法测定一氧化氮含量,用虫荧光素酶法测定ATP含量。结果:60只大鼠进入结果分析。①血清中肌酸激酶活力:缺血预适应组、硝酸甘油组、克罗卡林组和硝酸甘油+克罗卡林组均低于缺血再灌注组(P<0.05),硝酸甘油+克罗卡林组下降更显著(P<0.01)。②心肌组织超氧化物酶活力:缺血预适应组、硝酸甘油组、克罗卡林组和硝酸甘油+克罗卡林组均高于缺血再灌注组(P<0.05或P<0.01),硝酸甘油+克罗卡林组高于硝酸甘油组、克罗卡林组(P<0.05)。③心肌组织内丙二醛含量:缺血预适应组、硝酸甘油组、克罗卡林组和硝酸甘油+克罗卡林组均低于缺血再灌注组(P<0.05或P<0.01)。④心肌组织内一氧化氮含量:缺血预适应组、硝酸甘油组、克罗卡林组和硝酸甘油+克罗卡林组均高于缺血再灌注组(P<0.05或P<0.0l),硝酸甘油+克罗卡林组高于硝酸甘油组、克罗卡林组(P<0.05)。⑤心肌组织ATP含量:缺血预适应组、硝酸甘油组、克罗卡林组和硝酸甘油+克罗卡林组均高于缺血再灌注组(P<0.05或P<0.01),硝酸甘油+克罗卡林组高于硝酸甘油组、克罗卡林组(P<0.05)。结论:硝酸甘油、色满卡林具有明显的抗大鼠心肌缺血的药理性预适应早期心脏保护作用,合用优于单用。

克罗卡林对心肌细胞脂质过氧化作用的实验研究

在细胞水平研究克罗卡林缺氧再给氧时对细胞内丙二醛（ＭＤＡ）含量，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及细胞膜脂质流动性的影响，探讨克罗卡林克抗脂质过氧化作用及其可能机制。

克罗卡林对长QT间期扭转型室性心动过速的治疗作用及机制

记录家兔心外膜单相动作电位（ＭＡＰ），应用氯化铯（ＣｓＣｌ）建立多形性室性心动过速（简称室速）模型，模拟临床ＱＴ间期延长扭转型室速（ＴｄＰ），研究克罗卡林（Ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ）对触发活动及ＴｄＰ的抑制作用。结果显示：（１）应用ＣｓＣｌ后，１６只家兔均出现早期后除极（ＥＡＤ）及室性心律失常（其中１０只为ＴｄＰ）。异位心室搏动的启动电位、耦联间期与ＥＡＤ的振幅及耦联间期高度相关（ｒ分别为０．９４，０．９７）；（２）与用药前相比，克罗卡林使ＥＡＤ发生率下降（１００％ＶＳ１８．８％，Ｐ＜０．０５），平均振幅降低（１１．５±２．６ｍＶＶＳ５．２±４．０ｍＶ，Ｐ＜０．０５）；（３）克罗卡林能纠正ＣｓＣｌ引起的各种室性心律失常。结果提示：（１）触发活动为长ＱＴ间期ＴｄＰ的重要发生机制；（２）克罗卡林通过抑制触发活动而对长ＱＴ间期ＴｄＰ产生治疗作用。

克罗卡林后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨克罗卡林后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用左冠状动脉前降支结扎30min再灌120min建立大鼠心肌缺血再灌注模型。SD大鼠随机分为5组:假手术组,缺血再灌注组,缺血后处理组,克罗卡林后处理组,克罗卡林后处理+线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-HD组,每组8只。观察心肌病理结构改变,肌酸激酶活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛含量、三磷酸腺苷(ATP)含量变化和凋亡抑制蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax表达的变化。结果克罗卡林后处理能减轻心肌损伤程度,使SOD活性增高,丙二醛含量降低,ATP含量增高,Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达减少。加入线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-HD后以上保护作用被阻断。结论克罗卡林后处理可减少缺血再灌注心肌损伤,增强心肌抗氧化能力,减少细胞凋亡,这种保护作用与激活线粒体ATP敏感性钾通道密切相关。

克罗卡林预处理对脑缺血／再灌注大鼠水通道蛋白4表达及血脑屏障通透性的影响

目的研究ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂克罗卡林对大鼠脑缺血，再灌注（ischemia／reperfusion，YR）后水通道蛋白4（aquapofin4，AQP-4）表达及血脑屏障（blood-brain-barrier，BBB）通透性的影响。方法30只健康雄性Wistar大鼠参照随机数目表按三组安全随机分组法分为假手术组（A组）、脑I／R对照组（B组）、脑I／R＋克罗卡林组（C组），每组10只。应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血（middl ecerebral artery occlusion，MCAO）模型，脑缺血2h再灌注24h后，观察动物神经行为缺损，并取脑检查。Bedemon法评价动物的神经行为功能，应用苏木素咿红（HE）染色观察病理变化，干湿重法测定脑组织含水量，并通过免疫组织化学方法检测IgG及AQP-4的表达。结果与A组脑含水量（78．2±1．3）％，IgG、AQP-4蛋白表达（O．0±0．0，13．6±1．5）相比，B组脑含水量（81．3±1．2）％，IgG、AQP-4蛋白表达（2．4±0．4，19．8±1．9）均明显增高（P〈0．05），而C组脑含水量（79．5±0．6）％变化则差异元统计学意义（P〉0．05），但IsG与AQP-4的表达（1．1±0．2，15．7±1．2）也明显升高（P〈0．05）；与B组相比，C组神经行为缺损评分明显减低（P〈0．05），IgG、AQP4（1．1±0．2，15．7±1．2）蛋白表达及脑组织含水量（79．5±0．6）％亦明显降低（P〈0．05）。结论脑I／R损伤过程中，克罗卡林可能通过降低AQP4的表达和BBB的通透性，减轻脑水肿，发挥脑保护作用。

硝苯地平及克罗卡因对离体大鼠膀胱和主动脉平滑肌的影响

用体外大鼠胸主动脉条和膀胱条的制备，比较了钙拮抗剂硝苯地平（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）和钾通道开放剂克罗卡因（ｃｒｏｍａｋａｌｉｎ）对受体激活和ＫＣｌ引起的平滑肌收缩的作用。结果表明，对ＮＥ引起的大鼠主动脉收缩，ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ的抑制作用明显强于ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ；而用氨甲酰胆碱（ｃａｒｂａｃｈｏｌ）激动胆碱能Ｍ受体引起大鼠膀胱环形肌和纵形肌收缩时，两者的抑制作用无明显差异。由ＫＣｌ２７５ｍｍｏｌ·Ｌ－１去极化引起收缩时，ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ对大鼠膀胱环形肌、纵形肌及血管这３种组织的舒张作用均明显比ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ强。提示：在由受体介导的收缩中，ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ对膀胱组织的舒张作用较强，而ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ对血管平滑肌则作用更强；但在由ＫＣｌ去极化引起的收缩中，ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ对血管和膀胱这两种组织的抑制作用较强。

ATP敏感性钾电流与蛋白激酶关系的研究

目的观察蛋白激酶A(PKA)及蛋白激酶C(PKC)抑制剂和蛋白脱磷酸化物质对大鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流 (IKATP)的影响 ,探讨克罗卡林 (cromakalim)开放ATP敏感性钾通道的作用机制。方法采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IKATP。结果在37℃时克罗卡林 (1μmol·L-1)可阻断ATP的抑制作用 ,诱导出IKATP。PKA抑制剂PKI(6～22)amide (1μmol·L -1),可模拟克罗卡林的作用 ,激活IKATP;而PKC抑制剂calphosticC无此作用。同时还观察到蛋白脱磷酸化物质butanedioemonoxime(BDM,5mmol·L -1)也可诱发出IKATP。结论克罗卡林开放IKATP 机制与抑制PKA的活性有关 ,而与PKC无关。