新疆地区克里米亚刚果出血热病毒M片段的遗传分析

目的为进一步了解克里米亚刚果出血热病毒(CCHFV)M基因的特征,对新疆地区4株克里米亚刚果出血热病毒分离株亚东璃眼蜱的部分M片段核苷酸序列进行测定及分析。方法从感染CCHF病毒的鼠脑中提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应扩增,测定CCHF病毒的部分M片段核苷酸序列,与GenBank中的已登录的部分CCHF病毒M基因的同源序列进行比较分析和种系进化分析。结果经测序得到了4株病毒的3962～4385 nt位点的424 bp核苷酸序列(位点依据IbAr10200的M基因序列),该序列共编码139个氨基酸。前3株病毒序列有相当高的核苷酸同源性(99.5%～99.8%),将所得到的序列与已发表的中国、尼日利亚、巴基斯坦、乌兹别克斯坦、塔吉克斯坦和俄罗斯病毒株相比,中国株之间的核苷酸同源性为78.1%～99.8%,而非中国株则为42.9%～94.8%。但它们所编码的氨基酸序列变异不大,同源性非常高。系统发生树表明,所有的毒株被分为5个进化支(所比较的M基因长度为3962～4385 nt核苷酸),来自新疆南部和东部的YT05099、YLD4041和YL05035共处于同一分支。结论相比于新疆其他分离株,YT05099、YL04041和YL05035的部分M基因特征有极高的相似性。新疆株CCHF病毒M基因与中东和远东病毒株之间有较近的亲缘关系。

三株克里米亚刚果出血热病毒中国分离株糖蛋白基因的全序列测定与比较分析

目的 测定克里米亚 刚果出血热病毒 (CCHFV)中国分离株 (即新疆出血热病毒 ,XH FV)BA6 6 0 19、BA840 2及BA8816 6糖蛋白 (M)基因的全部序列并分析各毒株之间的相互关系。方法 病毒RNA在只与其保守末端互补的特异引物PCM Tag和随机引物的共同引发下逆转录成cDNA ,以单一PCM Tag和高保真DNA聚合酶扩增出完整的M基因。扩增产物纯化后作为模板进行序列测定 ,并将所得序列经计算机辅助分析其种系发生与编码策略。结果 XHFV代表株BA6 0 19的M基因与国际原型株IbAr10 2 0 0的M基因比较多 5个碱基 ,为 5 36 5bp ;比BA840 2、BA8816 6多 4个碱基 ,即5 36 4bp。 3株XHFV长ORF起始于M基因的第 78位碱基 ,比IbAr10 2 0 0株提前 15bp。编码的前体蛋白共 16 89个氨基酸 ,比IbAr10 2 0 0株多 6个。 4株病毒之间核苷酸序列的同源性分别为 :80 9%(IbAr10 2 0 0 BA6 6 0 19) ,80 2 % (IbAr10 2 0 0 BA840 2 ) ,80 2 % (IbAr10 2 0 0 BA8816 6 ) ,83 7% (BA6 6 0 19 BA840 2 ) ,83 6 % (BA6 6 0 19 BA8816 6 ) ,99 0 % (BA840 2 BA8816 6 ) ;对应的氨基酸序列的同源性分别为85 1% ,86 3 % ,86 6 % ,87 8% ,88 0 % ,98 8%。它们与Dugbe病毒在核苷酸和氨基酸的同源性较低 ,大约是 5 5 %和 37 7%。

海南省克里米亚─刚果出血热病毒血清抗体检测结果分析

本文首次报告海南省从本土２～３月龄羊羔血清中检出克里米亚─刚果出血热（ＣＣＨＦ）病毒ＩｇＧ抗体，阳性率１．０８％（２／１８６）；人和其它动物未检出阳性。表明海南省低山丘陵地带的澄迈县永发镇、儋州市峨蔓乡存在着ＣＣＨＦ的自然疫源地。

克里米亚-刚果出血热病毒新型治疗性抗体研制展望

随着人们认识的增加,烈性传染性病毒不断被发现和鉴定,高致病性、高传播性的病毒往往由于变异,导致反复流行。如在非洲和阿拉伯半岛多次暴发1931年首次分离到的裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)[1];1937年发现于非洲,并于1999年传入美国且在多个州暴发的西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)[2-3];1944、1956、1965年分别发现于俄国克里米亚、非洲刚果和我国新疆巴楚地区的克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo haemorrhagic fever virus,CCHFV),1967年分离出该病毒,被我国称为新疆出血热病毒(Xinjiang haemorrhagic fever virus,XHFV)[4]。1967年在德国首次发现马尔堡病毒(Marburgvirus,MARV)[5];1976年发现,随后在非洲反复暴发流行的埃博拉病毒(Ebolavirus,EBOV)[6];1998—1999年在马来西亚暴发,2001—2009年连续在印度和孟加拉国流行的尼帕病毒(Nipahvirus,NiV)[7-8];2002年底出现,2003年在我国暴发流行的SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)[9];2012年出现于沙特阿拉伯,具有高致死率的中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)[10];2013年在我国多地出现的H7N9型流感病毒[11]。自2009年以来,中国加强了急性发热性疾病的监测与管理,发现了一种不明原因的严重发热伴血小板减少综合征(SFTS),该病由一种新型病毒引起,命名为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒,简称新布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome visus,SFTSV)[12]。目前,上述病毒感染几乎没有特效药物和疫苗,因此,针对其研制特效药物,对于提高其防治水平、保障我国国民健康,具有非常重要的意义。

天山黑客──克里米亚-刚果出血热病毒

克里米亚－刚果出血热病毒（ＣＣＨＦＶ）属于布尼亚病毒科内罗病毒属，是分节段单负链ＲＮＡ虫媒病毒。该病毒引起的以发热、出血为典型特征的急性烈性传染疾病－克里米亚－刚果出血热（ＣＣＨＦ），病死率高达６７％。我国的新疆出血热病毒（ＸＨＦＶ）为ＣＣＨＦＶ成员，所引起的新疆出血热曾两度爆发流行，危害甚大。本文综述了ＣＣＨＦＶ／ＸＨＦＶ的形态结构、理化性质及某些生物学特性。

克里米亚刚果出血热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

目的原核表达并纯化克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)M基因编码的包膜糖蛋白片段Gn1和Gc1,以两段目的蛋白为包被抗原分别建立检测CCHFV抗体的间接ELISA方法。方法 PCR扩增CCHFV M基因的抗原保守区胞外域Gn1和Gc1基因片段,分别克隆至pET-30a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),并对不同诱导条件(温度、IPTG浓度、时间)进行优化,使用His-Ni柱纯化目的蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,分别以纯化的Gn1和Gc1蛋白作为包被抗原建立抗体ELISA检测方法。结果表达并纯化了CCHFV糖蛋白片段Gn1、Gc1,分子质量分别为35 ku和23 ku;Western blot检测两种重组蛋白均能被抗Gn1,Gc1抗体识别。以纯化蛋白为抗原建立的间接ELISA方法检测已知阳性血清CCHFV抗体滴度为1∶10 240,检测RVFV、WNV、JEV感染者血清均阴性,变异系数<8%。结论表达纯化的Gn1和Gc1蛋白纯度均在90%以上,两种蛋白均表现出良好的免疫原性,以两种蛋白为包被抗原建立的抗体间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性。重组蛋白的制备为克里米亚刚果出血热疫苗免疫效果评价、疫病监测和新型疫苗研发奠定了基础。

克里米亚-刚果出血热病毒反向遗传学系统的开发及应用

克里米亚-刚果出血热正内罗病毒(CCHFV)是引发烈性传染病克里米亚-刚果出血热的病原体。由于CCHFV基因组为3节段负链RNA,且最大的节段长达12 kb,操作难度极大,因此其反向遗传学系统的发展较为缓慢,直至2015年才成功构建了基于质粒的全病毒拯救系统。本文就克里米亚-刚果出血热正内罗病毒反向遗传学系统的研究进展及应用做简要综述。

克里米亚-刚果出血热的诊断与治疗进展

克里米亚－刚果出血热（ＣＣＨＦ）是由克里米亚－刚果出血热病毒（ＣＣＨＦＶ）引起的以发热、出血为典型特征的病死率极高的急性烈性传染性疾病。我国发生的ＣＣＨＦ称为新疆出血热（ＸＨＦ）。本文综述了该病的病原诊断、抗体检测及抗病毒治疗方面的进展。

克里米亚-刚果出血热病毒流行和预防

据医学空间网10月4日报道（原载Curr Opin Infect Dis 2007 Oct；20（5）：495—500），关于克里米亚-刚果出血热病毒的流行和预防，希腊科学家Vorou教授和同事指出，克里米亚-刚果出血热病毒是由蜱传播的、从人到人的、动物源性传染病，在亚洲、欧洲东南部和非洲的广阔区域都有流行，疾病后期主要表现为出血症状，病死率在10％-50％。他们回顾了最近关于克里米亚-刚果出血热病毒流行和治疗的文献。

我国克里米亚－刚果出血热的研究现状

本文简要综述了克里米亚－刚果出血热（Grimean．Congo Hemorrhagic Fever）的病原学、流行病学、临床学和防治，给进一步作好本病的研究与防治工作提供了依据。

刚果-克里米亚出血热抗体的快速检测

自1993年8月至1994年4月,用间接免疫荧光(IF)和Dot—ELISA检测沙特阿拉伯Hadithahquar-antine中心3985只外观健康绵羊、山羊所采的血清样本的克里米亚—刚果出血热病毒(CCHF)。用感染的灭活Vero细胞悬浮液作抗原。自2％的绵羊检出CCHF病毒抗体,但未从山羊检出。

肯尼亚首次发现人克里米亚-刚果出血热病例

2000年10月21日,一名以往健康的25岁男性农民因患急性出血性疾病而住入肯尼亚西部的一家医院。患者在入院前4天发病,突然出现发热、头痛、恶心、呕吐、严重肌痛、腹泻和血样便等症状。入院时体温36.4℃、脉搏60次/分、呼吸20次/分、血压90/40mmHg,并出现颈项强直。鉴别诊断包括细菌性痢疾和脑膜炎;血涂片疟原虫检查和伤寒肥达氏试验阴性,脑脊液和尿检正常。

欧洲克里米亚-刚果出血热的流行现状

克里米亚．刚果出血热（CCHF）是一种急性的高致病性人畜共患病，主要在非洲、亚洲、中东和欧洲东部流行。牛、绵羊、山羊和野兔是主要的动物宿主。人可通过璃眼蜱属（Hyalomma）叮咬或直接接触CCHF病毒感染者血液和组织而感染。典型的临床症状有突发高热、头痛和胃肠道不适。10％～50％的患者以出血为主要症状。

俄罗斯联邦爆发克里米亚—刚果出血热

WHO疾病爆发消息:1999年7月1日,俄罗斯联邦伊万诺夫斯基病毒学研究所在位于黑海和里海之间的斯塔夫罗波尔地区确诊了4例克里米亚—刚果出血热病例,其中2人死亡。卫生部报告说情况已得到控制。 7月17日,在斯塔夫罗波尔北部,伏尔加格勒和罗斯托夫之间的奥布利夫斯卡亚村爆发不明传染病,很多病例发生在儿童中。最早的病例发生在7月5日,已经有8人死于该病。

刚果民主共和国的病毒性出血热/马尔堡病毒病

世界卫生组织已经接到来自刚果Durba的马尔堡出血热散发病例的报告。其中一例已经在国家病毒学研究所(南非)通过病毒学实验确诊,该例病人30岁。