过表达/干扰表达miR-122对HBV稳转优势单克隆株HepGA14表达功能的影响

目的:采用miR-122过表达/干扰表达慢病毒质粒干预HBV稳转优势单克隆株HepGA14,观察其乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV DNA)表达功能的变化。方法:构建miR-122过表达和干扰表达慢病毒质粒,以最佳感染复数MOI值侵染HBV全基因组1.3倍体HBV稳转优势单克隆株HepGA14(对照组),分别命名为HepGA14-VL1044(miR122过表达组)和HepGA14-VL1043(miR122干扰组)。qPCR检测HepG2和HepGA14中的中miR-122的表达情况。ELISA分别检测3组细胞中上清HBsAg和HBeAg表达量,qPCR检测3组细胞的HBV DNA和miR-122表达水平。结果:最佳MOI值为30。与对照组比较,过表达miR-122慢病毒质粒侵染HepGA14后可上调优势细胞株内miR-122表达量,下调HBV DNA复制活性及HBsAg、HBeAg的表达量;干扰miR-122表达后,可上调HepGA14的HBV DNA复制活性及HBsAg、HBeAg的表达量,差异均有统计学意义(均P<0.0001)。结论:成功构建miR-122慢病毒过表达/干扰载体,并建立稳定过表达/干扰miR-122的HepGA14细胞系;miR-122可调控HBsAg、HBeAg、HBV-DNA的表达水平。

基于免疫优势克隆文化算法的故障诊断方法及其在TE过程中的应用

免疫优势克隆选择算法是一种新型的免疫算法,具有较强的局部和全局搜索能力。将其与文化算法结合,提出一种新型的免疫优势克隆文化算法,它可以更好地利用先验知识指导种群进化;并设计了新的动态接受函数来促进文化算法内部知识更新,提高算法的搜索能力。将该算法用于支持向量分类器的核参数优化中,构造性能良好的分类器,并将其用于Wine dataset的数据分类和化工TE过程的故障诊断中,实验结果表明,该算法能够准确地对SVM的核函数参数进行寻优,提高了故障诊断的准确性,具有应用推广价值。

HBV 1.3倍基因组HepG2稳转细胞模型优势单克隆株的筛选及鉴定

背景乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)体外感染模型是开展HBV生命周期、致病机理、药物筛选等研究的基础.随着临床抗HBV治疗进入“功能性治愈”“完全治愈”新时代的趋势,对能稳定模拟共价闭合环状DNA分子(covalently closed circular DNA,cccDNA)转录机制,乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)致病机理的细胞模型的需求日益迫切.HBV1.3倍(1.3-fold HBV)全基因组包含了全部HBV生物信息,能依赖自身启动子启动转录过程,支持cccDNA形成和完整病毒复制,最接近于HBV体内感染状态下的生命周期.慢病毒转染是一种以慢病毒为载体,将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,可形成稳定转染.目的采用慢病毒转染技术构建HBV 1.3倍基因组HepG2稳转细胞模型,筛选并鉴定出能稳定、高效表达HBV生物标志物的优势单克隆株.方法构建含1.3-fold HBV基因组信息的慢病毒质粒并包装慢病毒;以最佳感染复数(MOI)值将1.3-fold HBV慢病毒液侵染靶细胞HepG2,以抗生素杀稻瘟菌素(blasticidin,BSD)最佳筛选剂量筛选出稳定整合1.3-fold HBV基因的HepG2细胞系(1.3-fold HBV-HepG2),继而采用PCR法鉴定该细胞模型中的HBV DNA序列.将1.3-fold HBV-HepG2稳转细胞进行培养并挑选出9株候选阳性单克隆,通过测序各单克隆细胞的侧翼序列,以确定9株候选阳性单克隆相应的基因组在HepG2细胞基因组中的插入位置,再根据各候选单克隆株表达HBsAg、HBeAg的水平,筛选出最优势单克隆株.将该优势单克隆株与HepG2.2.15细胞株分别持续培养20代,比较这两种细胞株表达HBsAg、HBeAg、HBx、cccDNA、HBV DNA等标志物的水平及稳定性.结果(1)将慢病毒pLenti-BSD-1.3-fold HBV以MOI=30的参数侵染HepG2细胞,72 h后加入BSD抗生素(终浓度1μg/mL)进行筛选,连续培养15-20 d后,获得1.3-fold HBV-HepG2稳转细胞系,PCR鉴定出HBV DNA序列;(2)在挑选出的9株候选阳性单克隆中,编号A14的细胞株(命名为HepGA14)的HBsAg、HBeAg表达水平最高,分别为24.28 IU/mL、39.62 NCU/mL,其插入HepG2基因组位置为1:166461695-166461715,确定为优势单克隆株;(3)与HepG2.2.15细胞株比较,HepGA14优势单克隆株1-20代能稳定、高表达HBsAg、HBeAg、HBx、HBV DNA、cccDNA,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论成功构建并筛选出1.3-fold HBV基因组HepG2稳转细胞模型优势单克隆株HepGA14,这为后续开展HBV-宿主关系、发病机制及药物筛选等奠定良好的基础.

阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病机制研究动向

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmalnocturnal hemoglobinuria,PNH)发生机制一直是血液学、免疫学、生物化学家都有兴趣的研究课题,但百余年中仅近十年才有一些较重要的发现,对今后工作有所启示。

丙型肝炎病毒感染者血清中抗-HCV-IgG抗体轻链比值检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎患者保护性免疫缺陷的原因。方法根据HCV C区和NS4基因序列设计并人工合成3条合成肽,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测HCV感染者血清中抗.HCV IgG抗体轻链κ/λ比值。结果 抗-HCVSP42,CP10和CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜;84例抗-HCV阳性者中82例(97.62％)抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值恒定不变。结论HCV感染者抗-HCV抗体的产生不均匀性并呈稳定的克隆性。B细胞克隆优势化可能是HCV感染后机体保护免疫缺陷的原因之一。

免疫聚类算法在基因表达数据分析中的应用

提出了基于免疫聚类算法的基因表达数据分析方法.根据基因表达数据矩阵的特点,设计了改进的Consine系数来度量基因相似度;借鉴生物免疫学的有关免疫理论,利用基因表达数据分析的先验知识自适应地改变抗体本身及其与抗原亲合度的关系,构造了基于免疫优势克隆的聚类算法.与K-均值算法和遗传算法的对比实验表明,该算法能够获得较大的类内紧制度、较小的类间分离度,具有较好的工程应用价值.

求解多维背包问题的改进分布估计算法

研究分布估计算法可以解决难优化问题,且具有很好的全局搜索能力,但存在局部搜索能力差以及因种群多样性容易丧失从而导致的早熟收敛问题。针对上述问题对分布估计算法进行改进,将优势解集克隆,对优势个体进行搜索,从而增强局部搜索能力,并对概率模型进行修正以改善种群多样性损失问题,通过对多维背包问题的标准问题进行测试比较,结果表明了改进的有效性,改进后的算法增加了局部搜索能力、有效保持了种群多样性,获得好的优化结果。

基于人工免疫的机车二系调簧方法

为进一步提高电力机车二系支承载荷调整优化算法的性能,解决已有算法在加垫数量控制上的欠缺,并避免冗余计算,提出了一种基于人工免疫算法的两级结构机车二系载荷调整方法:免疫优势克隆选择多目标算法。针对调簧问题的偏好结构特点,设计具有调簧寻优阶段和可控加垫量寻优阶段的两级寻优算法,分别定义了两个阶段的寻优目标和可行域,进一步将调簧问题的先验知识作为免疫优势引入算法设计中,并结合调簧问题的具体特点以及人工免疫知识设计了特定的抗体编码形式、变异策略和免疫优势获得算法。对不同车型的多次应用试验统计结果表明:该算法不仅具有良好的优化载荷分布特性,还能稳定地控制调簧产生的加垫数量,并且能够避免冗余计算,极大地提高了调簧效率和实际应用价值。

三维空间中异构传感器网络的目标覆盖

在传感器随机分布的目标覆盖问题中,针对由感知属性不同的普通节点和超级节点构成的异构传感器网络,在三维空间中基于概率感知模型,结合免疫优势克隆算法来进行目标覆盖问题的优化.由免疫优势克隆算法提供的传感器节点最少等效个数的寻求方法,保证了随机分布于三维空间里的可感知的目标点能够全部被覆盖到.实验结果表明,与目前解决此问题最好的遗传算法相比,在达到与遗传算法相同覆盖质量的条件下,免疫优势克隆算法有效提高了实时性,明显降低了寻优时间.

五地区铜绿假单胞菌PFGE型分析

目的 :寻找铜绿假单胞菌流行优势克隆与气候、地域流行病学相关性 ,观察医院感染的流行趋势与流行特点 ,指导医院感染的预防与监控。方法 :对全国 5个地区随机选取的 30株铜绿假单胞菌进行脉冲电场凝胶电泳分析 ,电泳图谱经数据转化后进行聚类分析。结果 :仅少数菌株可证实来源的同源性 ,在相似性 85 .0 %和相似性 5 0 .0 %水平没有明显的优势克隆存在。在相似性达 33.3%时所有的菌株可全部被聚为 3类。结论 :30株菌变异较大 。

高炮武器发射目标毁伤效率优化设计仿真

高炮武器发射目标毁伤效率优化设计对于武器快速反应以及高效打击有重要的作用。传统高炮对空中目标拦截时,仅仅考虑时间因素,忽略了发射时间对于毁伤概率的影响,导致弹药资源的浪费。以提前发射及增大毁伤概率为目标,建立了防空高炮发射时机多目标优化模型。为快速求解模型争取武器发射时间,改进免疫克隆算法的多样性保持策略。仿真发现,改进算法收敛性提高,运行时间减少,解分布更为均匀。使用改进算法在实际防空作战中可以尽快击中目标并增大了毁伤概率。

一种改进文化算法的研究

文化算法是一双重进化算法,它基于知识经验的积累,具有较强的全局搜索能力。首先,本文将免疫优势克隆算法嵌入文化算法的种群空间,增强种群空间的进化速度,从而使提高算法的搜索速度;其次,本文还设计了新的随种群进化代数更新的动态接受函数,以促进算法中信念空间知识更新,更好地利用先验知识指导种群进化,进一步提高算法的搜索能力。

检测抗-HCVIgGκ/λ轻链比值及其临床意义

目的 探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染者保护性免疫缺陷的原因。方法 根据HCVC区和NS4区基因序列设计并人工合成 3条合成肽 ,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测HCV感染者血清中抗 -HCVIgG抗体轻链κ/λ比值。结果 抗 -HCVSP42 ,CP10和CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜 ;84例抗 -HCV阳性者中 82例 ( 97 62 %)抗 -HCVIgG抗体轻链κ/λ比值偏离。所有病例追踪观察一年 (其中 11例抗 -HCV阳性者随访二年 ) ,发现抗 -HCV抗体κ/λ比值恒定不变。结论 HCV感染者抗 -HCV抗体的产生不均匀性并呈稳定的克隆性。B细胞克隆优势化可能是HCV感染后机体保护性免疫缺陷的原因之一。