胎兔颅骨成骨细胞克隆筛选及鉴定

目的：筛选胎兔颅骨细胞原代培养中的细胞克隆，建立成骨细胞株。方法：从服兔颅骨组织中分离培养颅骨细胞，在此基础上，运用有限稀释法进行克隆传代筛选，建立成骨细胞株，并运用酶组化、免疫级化及染色体染色等方法予以鉴定。结果：原代培养的颅骨细胞来源复杂，形态多样；克隆传代筛选的细胞株，细胞形态单一，碱性磷酸酶组化染色呈强阳性，骨形态发生蛋白免疫级化染色呈强阳性，钙红染色显示具有成骨能力；染色体数目形态保持相对稳定。结论：利用有限稀释和克隆传代培养筛选建立的成骨细胞株，生物学性状均一，遗传学性状稳定。

两种传代方法影响人胚胎干细胞转染效率的比较

背景:现有方法将外源分子如DNA导入到人胚胎干细胞用于科学研究的效率普遍较低,如何优化现有条件,提高转染效率显得尤为重要。目的:比较两种不同的传代方法对人胚胎干细胞系H9转染效率的影响,优化胚胎干细胞转染条件。方法:人胚胎干细胞系H9分别采用小克隆传代法和单细胞传代法进行传代,传代后继续培养细胞48 h,用Lipofectamine 3000转染pAdTrack-AKT1荧光质粒2 d后,荧光显微镜下观察荧光质粒的表达,流式细胞仪检测人胚胎干细胞的转染效率;RT-qPCR和Western blot分别检测转染后AKT1在mRNA和蛋白质水平的表达。结果与结论:①荧光显微镜下观察发现单细胞传代组表达荧光质粒的细胞数量更多,流式细胞仪检测单细胞传代法的转染效率[(47.18±2.00)%]高于小克隆传代法的转染效率[(19.52±0.86)%],差异有显著性意义(P<0.01);②单细胞传代组转染后AKT1 mRNA和蛋白的表达均高于小克隆传代组,差异有显著性意义(P<0.01);③结果表明,采用单细胞传代法,增加细胞与转染试剂脂质体的接触面积可提高人胚胎干细胞的转染效率。

成骨细胞体外培养方法研究进展

本文对成骨细胞的体外培养方法进行了较为全面系统的综述,从动物到人类,从原代分离培养到克隆传代,从有限细胞系到无限细胞系,从二维培养到三维培养,方法不断更新、丰富、完善。反映了成骨细胞体外培养的最新动态,为成骨细胞用于骨代谢相关领域的体外研究以及探讨骨的破坏机理展示了良好的前景。