意义未明的特发性及克隆性血细胞减少症的临床研究

目的探讨意义未明的特发性/克隆性血细胞减少症(ICUS/CCUS)患者的临床表现及相关实验室诊断,评估疾病发展及预后。方法选取2019年1月至2021年2月于该院诊治的14例ICUS/CCUS患者,其中ICUS 7例、CCUS 7例,对其临床表现、骨髓形态及病理、染色体及骨髓增生异常综合征荧光原位杂交检测(MDS FISH)、基因突变进行检测分析。结果7例ICUS患者超过1年随诊,予对症支持治疗为主,1例进展为CCUS;7例CCUS患者中2例进展为MDS伴原始细胞增多亚型-1,1例进展为急性髓系白血病-M5。结论ICUS患者需定期随访,建议定期复查MDS基因突变检测,有进展为CCUS可能;合并有提示预后不良基因突变的CCUS患者需定期复查骨髓,及早干预诊治。

高通量测序分析B细胞非霍奇金淋巴瘤IGH基因克隆性重排特点及临床应用价值

目的探讨B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)IGH基因克隆性重排特点及临床应用价值。方法收集接受NGS检测,且存在IGH基因存在克隆性重排的55例B-NHL患者的人口学资料、临床资料及IGH基因NGS检测结果,分析IGH基因克隆性重排特点、IGHV基因取用频率,以及NGS检测IGH基因重排在临床中的应用价值。结果55例患者中,以单个优势克隆为主(85.45%,47/55),少数患者可检测到2个(12.73%,7/55)和3个优势克隆(1.82%,1/55);在IGHV基因取用偏好方面,IGHV3基因在B-NHL中取用频率最高,其次为IGHV4基因;在IGHV亚型中,IGHV3-23在慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)中出现频率最高,IGHV4-34在原发中枢神经系统弥漫大B细胞淋巴瘤(PCNSL-DLBCL)及弥漫大B细胞淋巴瘤非特指型(DLBCL-NOS)中出现频率最高。结论不同病理类型的B-NHL患者IGH基因克隆性重排中IGHV基因片段取用频率存在偏好,使用NGS检测IGH重排可以识别亚克隆,鉴定克隆相关性,辅助疾病诊断。

克隆性造血与心血管疾病相关性的研究进展

造血系统中体细胞突变的非恶性克隆扩增被称为克隆性造血,是在驱动基因突变后突变白细胞比例增加的过程。克隆性造血的遗传模式包括白血病驱动基因突变、常染色体镶嵌染色体交替和性染色体缺失。新近研究指出,由白血病驱动基因突变或白细胞Y染色体镶嵌缺失引起的克隆性造血,会影响各种心血管疾病(包括动脉粥样硬化、心力衰竭、心脏纤维化)的发生发展。越来越多的证据表明,克隆性造血是心血管疾病的一种新机制,也是一类新的危险因素,与传统危险因素同等重要。现分析克隆性造血的遗传模式,对其与心血管疾病之间的相关性展开综述分析。

克隆性造血相关基因突变可增加冠心病风险

《JAMA心脏病学》杂志近期在线发表了国家心血管病中心、中国医学科学院阜外医院顾东风院士和鲁向锋教授团队一项有关克隆性造血相关体细胞基因突变与冠心病发生关系的研究成果。该成果首次在中国自然人群中构建了克隆性造血相关体细胞基因突变特征谱,发现其会显著增加冠心病发生风险,而且与先天炎症基因遗传风险呈现明显叠加效应。

肿瘤患者T细胞受体多样性和克隆性的高通量测序分析

目的:探讨肺癌和食管癌患者外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)多样性和克隆分布,以及食管癌外周血和肿瘤浸润淋巴细胞中T细胞TCR的差异情况。方法:收集自2019年4月至2021年5月郑州大学第一附属医院未行放、化疗,并排除严重感染性疾病、自身免疫性疾病以及近期使用免疫抑制剂治疗史的8例食管癌、8例肺癌患者的外周血标本,选取其中1例食管癌患者肿瘤组织标本进行TCR测序。17例健康人外周血标本作为对照组。分析肿瘤患者与健康人之间以及早期、晚期肿瘤患者之间TCR多样性指数(D50)、VJ基因使用频率以及CDR3序列克隆型频率的差异。结果:食管癌、肺癌患者外周血TCR CDR3序列的D50值[分别为(0.031±0.028)和(0.077±0.034)],均低于健康人[(0.145±0.057),P<0.000 1和P=0.005 3]。食管癌、肺癌外周血TCR CDR3最大克隆比例[分别为(10.640±7.640)%和(8.334±5.575)%],均高于健康人[(4.070±2.341)%, P=0.003 1和P=0.011 9]。且TCR CDR3序列的最大克隆比例与D50值呈负相关。食管癌和肺癌患者早期外周血T细胞TCR多样性(D50)[分别为(0.057±0.028)和(0.106±0.007)]明显高于晚期患者[分别为(0.015±0.014,P=0.028 5)和(0.059±0.030,P=0.041 7)]。随着疾病进展,肺癌和食管癌患者外周血TCR CDR3中TRBV和TRBJ基因组合使用减少,单个或多个TCR克隆型占比明显增高,存在明显的单一性。结论:肺癌和食管癌中外周血TCR谱多样性低于健康人,且存在克隆性增殖。在肿瘤发展中,TCR谱多样性降低,提示TCR谱为肿瘤的诊断、免疫评估提供了潜在的生物标志物,具有重要的临床指导意义。

意义不明的克隆性造血对老年射血分数降低心力衰竭患者预后的影响

目的探讨意义不明的克隆性造血(CHIP)对老年射血分数降低心力衰竭(HFrEF)患者随访发生不良心脑血管事件(MACCE)的影响。方法前瞻性队列研究。连续选取2020年1月至2022年1月北京安贞医院收治的老年HFrEF患者145例,根据全基因组序列的CHIP状态分组,分为CHIP组[变异等位基因频率(VAF)≥2%,48例]和非CHIP组(VAF<2%,97例)。随访截至2023年1月31日,主要观察终点是MACCE,为死亡、HF加重再入院、非致死性心肌梗死和非致死性卒中的复合结局。结果145例老年HFrEF患者,年龄65~90岁,平均为(78.1±10.4)岁。48例(33.1%)合并有CHIP,最常见突变是DNMT3A或TET2基因,分别占所有突变的47.9%(23/48)和37.5%(18/48)。与非CHIP患者相比,CHIP组患者年龄更大,血肌酐、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)和白介素6(IL-6)水平更高(均为P<0.05)。中位随访16个月(12~33个月)期间,51例患者(35.2%)发生MACCE,包括6例(4.1%)死亡、22例(15.2%)因HF加重入院、13例(9.0%)心肌梗死和10例(6.9%)卒中。与非CHIP组比较,CHIP组的因HF加重入院(HR=1.768,95%CI:1.073~2.837,P=0.025)、心肌梗死(HR=1.551,95%CI:1.049~2.236,P=0.042)、卒中(HR=1.538,95%CI:1.082~2.439,P=0.035)和MACCE事件(HR=1.737,95%CI:1.052~2493,P=0.032)均显著增高。Cox多因素回归分析显示,校正相关因素后,CHIP仍与MACCE显著正相关(HR=1.737)。此外,年龄(HR=1.642)、HF病程(HR=1.869)、IL-6(HR=1.756)、NT-proBNP(HR=2.211)和血肌酐水平(HR=1.528)均是发生MACCE的独立影响因素。受试者工作特征曲线结果显示,与加入CHIP前比较,加入CHIP后,模型预测MACCE的准确性明显提高(P=0.038)。结论CHIP在老年HFrEF患者很常见,与临床预后不佳有关。CHIP可成为老年HFrEF患者的新风险因素,有助于预后的进一步风险分层。

潜质未定克隆性造血致动脉粥样硬化及NLRP3炎性小体治疗作用研究进展

近年来有研究显示,体细胞驱动基因突变导致的潜质未定克隆性造血(CHIP)刺激炎症标志物升高是动脉粥样硬化性心血管疾病发生及发展的因素之一,核苷酸结合寡聚结构域样受体家族Pyrin结构域中的NLRP3炎性小体,是细胞焦亡的重要调控分子,在其炎症过程中起着关键作用。MCC950作为一种特定的小分子抑制剂,对于NLRP3炎性小体介导细胞焦亡具有选择性的抑制作用,因此,MCC950有望成为临床治疗CHIP介导炎症所致动脉粥样硬化性心血管疾病的有效药物。本文从CHIP相关基因突变入手,概述了NLRP3炎性小体调控细胞焦亡作用于动脉粥样硬化发病机制,以及NLRP3炎性小体选择性抑制剂MCC950作用于CHIP诱发动脉粥样硬化的作用及机制,为临床治疗动脉粥样硬化开辟新的道路。

伴T细胞受体基因克隆性重排阳性的淋巴瘤样丘疹病C型1例

患者女性,25岁,主诉左侧小腿足踝上方紫癜样褐色丘疹2年。曾诊断为血管炎,给予抗组胺药及沙利度胺等治疗,期间皮疹有新发,血液中IgE 373.9 IU/mL,尿蛋白±,贫血。皮肤科拟诊“丘疹性荨麻疹血管炎”,给予醋酸地塞米松片、乌灵胶囊、粉尘螨滴剂治疗,患者病情仍无缓解,故行皮肤活检。患者无过敏性鼻炎、过敏性紫癜病史,家族中无类似疾病患者。血液流式细胞免疫分型示:淋巴细胞占11.1%,提示淋巴细胞比例偏低,抗原表达无明显异常。骨髓病理学检查示:未见异型淋巴细胞。染色体分析正常。血液分子病理示:TCRβ、TCRγ和TCRδ重排检测阴性。体格检查示全身浅表淋巴结无肿大及压痛。

非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)和T细胞性非霍奇金淋巴瘤 (T NHL)病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况 ,利用RT PCR分别扩增 4例B NHL和 2例T NHL病人外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,以了解T细胞克隆性。结果显示 ,6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达 6 - 12个Vβ亚家族 ,全部病人均选择了表达Vβ1,Vβ8,Vβ13和Vβ19,5例病人表达Vβ2和Vβ16 ,而全部病人均未能检测到Vβ4 - 6 ,Vβ10 - 12 ,Vβ15 ,Vβ17- 18,Vβ2 0 ,Vβ2 2 - 2 3。基因扫描发现 2例B NHL和 1例T NHL病人的 1- 3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示 ,B NHL和T NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点 。

IgH基因克隆性重排检测在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的建立B-NHL临床诊断中Ig H基因克隆性重排检测基本方法。方法应用PCR方法,采用IgHFR3A引物,检测了7例B-NHL及4例反应性增生的淋巴结石蜡样本中IgH基因重排情况。结果黏膜相关型边缘区B细胞淋巴瘤(MALT)3例中有2例(2/3),弥漫大B细胞淋巴瘤2例中2例(2/2),滤泡淋巴瘤1例中0例(0/1),套细胞淋巴瘤1例中1例(1/1)检测到IgH基因的克隆性重排。总检测率为5/7(71%),4例淋巴结反应性增生病例病例均为IgH基因的多克隆性重排。结论PCR-FR3A在鉴别淋巴组织肿瘤性或反应性增生和最终确诊B-NHL上是一项有效的辅助方法。

利用基因扫描分析TCR Vβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克隆性

分析了健康人、Ｔ－ＡＬＬ外周血及Ｔ细胞株Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ中ＴＣＲＶβＴ细胞的表达和克隆性。应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＴＣＲＶβ２４个亚家族的ＣＤＲ３，并经基因扫描和序列分析确定Ｔ细胞克隆性。结果表明健康人表达除Ｖβ２０外的多克隆Ｔ细胞；Ｔ－ＡＬＬ仅表达３～４个Ｖβ亚家族Ｔ细胞；部分呈寡克隆性；Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ分别表达Ｖβ２和Ｖβ８单克隆Ｔ细胞。Ｔ－ＡＬＬ中存在克隆性生长Ｔ细胞。该方法是检测Ｔ细胞克隆性的敏感和精确的方法。

女性外阴尖锐湿疣的克隆性

目的 根据女性体细胞中两条X染色体上雄激素受体 (AR)基因的长度多态性进行非放标克隆性检测 ,以探讨尖锐湿疣的克隆组成。方法 石蜡切片HE染色后进行显微解剖 ,提取基因组DNA ,Hha Ⅰ消化 ,巢式PCR扩增 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示单股DNA片段长度。结果 在 68例湿疣标本中 ,65例扩增成功 ,其中 53例 (81 5 % )具有AR位点的多态性 ;在适于分析的 45例中 ,9例 (2 0 % )显示AR位点长度多态性丢失 ,属于单克隆性增生 ;其余 36例 (80 % )无多态性丢失 ,提示为多克隆增生。单克隆性病变的核分裂指数明显高于多克隆病变 ,但二者的凋亡小体计数差异不显著。结论 大部分尖锐湿疣属于多克隆性病变 ,属反应性增生 ;少部分是克隆性增生 。

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML M1 )患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。 方法采用RT PCR扩增 9例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同标本中可检测到 2～ 5个Vβ亚家族T细胞 ,以Vβ2、Vβ3、Vβ1 7和Vβ1 9为常见 ,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ1 9中发现克隆性生长T细胞。结论 M1病人外周血TCRVβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况 ,这可能与M1细胞相关抗原有关 ,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。

利用 Genescan 分析 TCRVβ 亚家族CDR3长度的方法检测AML的T细胞克隆性

分析急性髓性白血病（ＡＭＬ）的Ｔ细胞克隆性，方法利用反转录一多聚酶链反应（ＲＴ┐ＰＣＲ）法分析５例ＡＭＬ、８例正常人的外周血单个核细胞和Ｔ细胞株Ｊｕｒｋａｔ的Ｔ细胞受体ＴＣＲＶβ２４个亚家族的互补决定区３（ＣＤＲ３）长度，ＰＣＲ产物进一步进行基因扫描（ｇｅｎｅｓｃａｎ）和核苷酸序列分析。结果ＲＴ┐ＰＣＲ分析显示８例正常人外周血单个核细胞除Ｖβ２０外，存在各Ｖβ亚家族的Ｔ细胞，而５例病人则仅存在部分亚家族的Ｔ细胞，Ｊｕｒｋａｔ细胞则仅表达Ｖβ８亚家族，基因扫描分析显示３例病人的个别亚家族产物呈一主峰图像，而对照组８例正常人的全部Ｖβ产物均显示为多峰图像，Ｊｕｒｋａｔ细胞的Ｖβ８家族ＰＣＲ产物呈单峰。结论ＡＭＬ病人外周血存在克隆性生长Ｔ细胞，这可能是宿主对白血病相关抗原的直接反应。该方法可以作为一种新的临床研究方法用于检测微小残留病变。

非放标AR基因多态性分析探讨子宫平滑肌瘤的克隆性

目的 根据女性体细胞中两条 X染色体上雄激素受体 (AR)基因的限制性片段长度多态性进行非放标克隆性检测 ,以探讨子宫平滑肌瘤的克隆组成 .方法 自新鲜子宫平滑肌瘤组织中提取基因组 DNA,经 H ha 消化后 ,PCR扩增 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示单股 DNA片段长度 .结果 在检测的 5 4例子宫平滑肌瘤标本中 ,32例(5 9.3% )具有这种 AR位点的多态性 ;其中 3例标本 X染色体失活发生了严重偏移 ,不适用于这种克隆性分析 .对 2 9例共 6 8个平滑肌瘤结节的分析均显示 AR位点长度多态性丢失 ,提示全部为单克隆细胞组成 .其中 8例结节个数≥ 3个的多发性子宫平滑肌瘤中 ,6例标本的不同瘤结节均具有相同的 X染色体灭活带型 ;另外 ,发现 1例具有 X染色体失活偏移的标本其肿瘤组织中有额外条带出现 ,而且两个瘤结节具有相同改变 .结论 此研究为在国内开展非放标 AR克隆性检测奠定了基础 ,同时还证实我们以前的研究结果 。

CML相关TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点

目的了解慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因，分析其TCR Vα亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等（1～21个），以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见，并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞。结论CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞，这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关，且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主。

慢性苯中毒患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞分布和克隆性研究

目的：了解慢性苯中毒患者外周血T细胞的TCRVδ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法：利用RT-PCR方法扩增10例慢性苯中毒患者外周血单个核细胞中8个TCR Vδ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果：8例健康人平均表达（6.63±0.52）个Vδ亚家族,外周血中未检测到Vδ4和Vδ5亚家族,慢性苯中毒患者工人表达（1.10±0.57）个Vδ亚家族（1例重度苯中毒工人8个Vδ亚家族均未表达）,外周血中未检测到Vδ1、Vδ3、Vδ4和Vδ8亚家族,与健康人比较有显著性差异（P〈0.01）。6例慢性苯中毒患者存在1-2个Vδα亚家族T细胞出现克隆性增殖。结论：慢性苯中毒患者外周血出现TCR Vδ亚家族倾斜性分布和克隆性增殖T细胞,这可能是苯中毒后所引起的机体特异性免疫反应。

基因扫描分析B-CLL的TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性

利用RT-PCR扩增12例B-CLL外周血单个核细胞的TCR Vβ基因24个亚家族的互补决定区3(CDR3),以了解T细胞的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果显示:12例B-CLL共表达13个TCRVβ亚家族T细胞,每例病人仅表达3-9个Vβ亚家族,主要为Vβ2,Vβ3,Vβ6,Vβ7,Vβ17或Vβ19,9例病人的一个或两个Vβ3家族T细胞里克隆性生长。提示B-CLL选择性地表达TCR VβT细胞,大部分B-CLL出现克隆性增殖T细胞,这可能是对白血病细胞相关抗原的免疫反应。

急性早幼粒细胞白血病患者中TCR Vβ T细胞体内外克隆性增殖的比较

急性早幼粒细胞白血病 ;T细胞受体Vβ基因 ;T细胞培养 ;克隆性增殖为了解急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者T细胞在体内或体外经诱导后TCRVβ亚家族的分布和克隆性增殖特点 ,利用T淋巴细胞液体培养法 ,在rhIL 2和抗CD3单抗条件下诱导扩增APL患者单个核细胞 ,并应用RT PCR分别扩增培养前后患者T细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的互补决定区 3 (CDR3 )片段 ,了解各Vβ亚家族的表达情况 ;对阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,了解T细胞克隆性。结果发现 ,APL患者T细胞仅表达部分Vβ亚家族 ,但经体外培养后可检测到部分新增TCRVβ亚家族T细胞。全部患者存在某些TCRVβ亚家族的克隆性增殖T细胞。 2例患者均出现相似的Vβ1,Vβ3 ,Vβ7,Vβ16和Vβ2 0T细胞的克隆性增殖情况。结论 :T细胞的体外培养可诱导某些Vβ亚家族的表达。在T细胞培养不同时间中 。

CML患者CD4^+和CD8^+ T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的:了解慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者外周血CD4+和CD8+T细胞中TCRVβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性。方法:利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞(PBMCs)、CD4+和CD8+细胞TCRVβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性。结果:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞分别表达部分(1～21个)Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率最高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8+细胞中,分别以Vβ21(CD4+)和Vβ11(CD8+)亚家族的克隆性增殖多见。结论:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞的TCRVβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4+和CD8+T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用。