急性早幼粒细胞白血病患者中TCR Vβ T细胞体内外克隆性增殖的比较

急性早幼粒细胞白血病 ;T细胞受体Vβ基因 ;T细胞培养 ;克隆性增殖为了解急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者T细胞在体内或体外经诱导后TCRVβ亚家族的分布和克隆性增殖特点 ,利用T淋巴细胞液体培养法 ,在rhIL 2和抗CD3单抗条件下诱导扩增APL患者单个核细胞 ,并应用RT PCR分别扩增培养前后患者T细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的互补决定区 3 (CDR3 )片段 ,了解各Vβ亚家族的表达情况 ;对阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,了解T细胞克隆性。结果发现 ,APL患者T细胞仅表达部分Vβ亚家族 ,但经体外培养后可检测到部分新增TCRVβ亚家族T细胞。全部患者存在某些TCRVβ亚家族的克隆性增殖T细胞。 2例患者均出现相似的Vβ1,Vβ3 ,Vβ7,Vβ16和Vβ2 0T细胞的克隆性增殖情况。结论 :T细胞的体外培养可诱导某些Vβ亚家族的表达。在T细胞培养不同时间中 。

非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)和T细胞性非霍奇金淋巴瘤 (T NHL)病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况 ,利用RT PCR分别扩增 4例B NHL和 2例T NHL病人外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,以了解T细胞克隆性。结果显示 ,6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达 6 - 12个Vβ亚家族 ,全部病人均选择了表达Vβ1,Vβ8,Vβ13和Vβ19,5例病人表达Vβ2和Vβ16 ,而全部病人均未能检测到Vβ4 - 6 ,Vβ10 - 12 ,Vβ15 ,Vβ17- 18,Vβ2 0 ,Vβ2 2 - 2 3。基因扫描发现 2例B NHL和 1例T NHL病人的 1- 3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示 ,B NHL和T NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点 。

AML-M2a诱导TCR VβT细胞的克隆性增殖和细胞毒作用

目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况。方 法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细 胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞 的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况。结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人 T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79％和62.14±9.79％,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无 杀伤作用。TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖。结论:AML-M2a细胞可诱导健康人 T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主。

AML-M_5细胞诱导TCR Vβ T细胞克隆性增殖研究

目的 了解急性髓细胞白血病 (AML)M5亚型细胞诱导T细胞的TCRVβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况。方法 采用混合淋巴细胞 /肿瘤细胞培养 (MLTC)方法 ,用AML M5细胞体外诱导供者外周血和脐血的T细胞增殖 ,用RT PCR扩增经MLTC前后获得细胞的 2 4个TCRVβ亚家族基因的互补决定区 (CDR3) ,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。并经基因扫描分析确定M5细胞诱导的T细胞克隆性特点。结果 脐血和供者外周血分别表达 13和 5个TCRVβ亚家族T细胞 ,经MLTC培养初期 ,则表达全部 2 4个Vβ亚家族 ,随着诱导时间的增加 ,诱导T细胞所表达的Vβ亚家族逐渐减少。基因扫描显示AML M5细胞诱导后的T细胞出现寡克隆和双克隆增殖改变 ,主要为Vβ2 1的克隆性增殖T细胞。结论 AML M5细胞可诱导TCRVβT细胞克隆性增殖 ,这可能是对AML M5细胞相关抗原的特异细胞免疫应答的结果。

AML-M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点

目的研究AML-M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点,并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT-PCR-基因扫描技术分析初治AML-M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖,免疫磁珠分选患者T淋巴细胞,体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化,并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖,TCR Vβ分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族,体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同,有部分出现新的Vβ亚家族表达及克隆性增殖,有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖,体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML-M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖,部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态,可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL,体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加,并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。

从一例慢性嗜酸性粒细胞白血病发现克隆性增殖T淋巴细胞

利用TCRβV基因指纹图谱分析 1例慢性嗜酸粒细胞白血病 (CEL)患者的外周血T细胞克隆变化 ,了解与CEL疾病相关的T细胞受体 (TCR) β可变区主要接触抗原的CDR3序列特征。用RT PCR扩增CEL患者的外周血TCRβV 1- 2 4个家族的基因序列 ,在变性测序胶上电泳 ,形成TCRβV基因指纹图谱 ,切割克隆性增生的电泳条带进行测序分析。结果显示 :TCRβV基因指纹图谱在 βV13.2家族中的分子量较小处出现一条明显扩增的条带 ,切割此条带并测序证实为单克隆性T细胞增殖 ,其CDR3的氨基酸序列为 :SFSYEQY ,其中SFSY基序为特异性保守序列 ,其它家族无异常改变。结论 :该CEL患者TCRβV13.2家族中出现了单克隆性增殖的T淋巴细胞群 ,可能是针对CEL恶性肿瘤细胞反应性增生的T细胞克隆。

克隆性增殖T细胞的检测和研究进展

肿瘤部位出现大量淋巴细胞浸润的病人常有较好的预后 ,推测这是宿主对肿瘤相关抗原的一种直接反应。目前理想的检测是否存在针对肿瘤细胞的克隆性增殖T细胞的方法是CDR3长度分析法。克隆性增殖T细胞的研究有助于进一步阐明肿瘤免疫机制 。

急性髓系白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖分析

本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVβ亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能,尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血病患者不同疾病状态下及3名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,通过基因扫描(genescan)的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质,比较不同疾病状态下白血病患者外周血T细胞的Vβ亚家族的应用、克隆性增殖、T细胞的复杂性以及T细胞免疫表型的变化。结果表明:11例AML白血病患者初诊时外周血T细胞均表达部分TCRVβ亚家族,经体外诱导后TCRVβ亚家族表达增加;完全缓解期患者外周血T细胞TCRVβ亚家族数量明显增多,但未达到完全正常;4例患者在复发时TCRVβ亚家族表达数量明显下降;11例患者中有9例在初诊时外周血有1至2个TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖,缓解期克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞有增加趋势,在多数病例观察到部分Vβ亚家族T细胞在初发、缓解、体外诱导扩增以及复发时仍维持克隆性增殖状态;AML白血病患者初发及复发时T细胞CDR3复杂性明显降低,呈偏态分布,而疾病缓解时T细胞复杂性有所改善。结论:AML白血病患者外周血T细胞TCRVβ亚家族呈限制性表达;在大多数病例中无论是疾病初发抑或缓解及体外诱导、甚至在疾病复发时均可观察到克隆性T细胞的存在;在部分病例中某些Vβ亚家族在上述不同疾病状态下始终维持克隆性增殖状态,部分Vβ亚家族的克隆性增殖同白血病细胞的存在相关;在疾病状态下,AML白血病患者外周血T细胞的复杂性有所降低,而疾病缓解后可部分恢复。

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT -PCR和基因扫描分析T细胞受体 (TCR)Vβ2 4个亚家族基因CDR3长度 ,可确定T细胞的克隆性 .对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCRVβT细胞出现倾斜性分布和克隆性生长的情况 .肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCRVβT细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖 .这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的 ,对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用 ,探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗 ,清除肿瘤患者微小残留病变 ,具有重要的意义 .

bcr3-abl2多肽诱导脐血T细胞受体Vβ亚家族T细胞克隆性增殖的研究

目的 了解bcr3 abl2多肽诱导T细胞受体 (TCR)Vβ亚家族T细胞克隆性增殖情况。 方法 以人工合成bcr3 abl2多肽联合IL 2 +抗CD3单克隆抗体 (单抗 )诱导脐血T细胞增殖 ,运用RT PCR 基因扫描技术分析其TCRVβ亚家族的利用和克隆性特点。结果 bcr3 abl2多肽成功诱导 3份脐血单个核细胞 (MNC)产生多肽特异T细胞。bcr3 abl2多肽和CD3单抗 +IL 2均可诱导脐血T细胞扩增 ,多肽诱导的新增Vβ亚家族表达与不加多肽的CD3单抗 +IL 2诱导组的T细胞不完全相同。培养前和单用CD3单抗 +IL 2诱导后的T细胞绝大多数为多克隆性 ,而bcr3 abl2多肽诱导 1周或 2周后 ,分别在 3例脐血中诱导出寡克隆增殖和呈寡克隆增殖趋势T细胞。结论 bcr3 abl2多肽可在体外诱导出抗慢性粒细胞白血病细胞的脐血特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) ,该CTL作用可能是由优势表达的Vβ亚家族克隆性T细胞所介导。

儿童EB病毒T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病诊治进展

EB病毒(EBV)T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病(Epstein-Barr virus positive T/NK cell lymphoproliferative diseases,EBV+T/NK-LPDs)是一组T细胞和(或)NK细胞感染EBV后克隆性增殖、浸润组织器官的异质性疾病。在儿童及青少年中,EBV+T/NK-LPDs与恶性肿瘤相关的疾病主要包括T/NK细胞型慢性活动性EBV感染(chronic active EBV infection,CAEBV)和儿童系统性EBV阳性T细胞淋巴瘤(systemic EBV-positive T-cell lymphoma of childhood,STLC)。

控制表皮细胞克隆性增殖降低皮肤癌风险

澳大利亚昆士兰大学主导的一项研究发现,通过防晒等方法控制表皮细胞的克隆性增殖,有助于降低皮肤癌发生率。昆士兰大学迪亚曼蒂纳研究所高级研究员黄可宜告诉新华社记者,为更好地理解紫外线照射对皮肤癌变初始阶段的影响,研究团队利用基因工程对实验鼠的皮肤表皮干细胞添加了荧光标记,并在紫外线照射下追踪细胞的生长、退化和癌变情况。结果发现,毛囊周围的表皮细胞克隆性增殖能力最强,也最容易导致皮肤癌变。

基因扫描分析维持性血液透析患者外周血T细胞克隆性分布的特点

目的：了解慢性肾功能衰竭进行维持性血液透析(MHD)患者的外周血T细胞克隆性增殖的特性和意义。方法：通过RT-PCR方法扩增11例膜性肾病(MGN)3例、膜增殖性肾炎(MPGN)3例、IgA肾病(IgAN)4例、局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)1例。MHD患者外周血单核细胞T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族基因的CDR3，阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描的方法分析产物CDR3的长度及序列，了解T细胞的克隆性。结果：11例MHD患者中仅表达1-10个TCRVβ的亚家族，其中2例只表达Vβ3一个亚家族，分别为寡克隆及双克隆性。最常见的TCR Vβ亚家族是Vβ3，其次Vβ8、Vβ19、Vβ22，再次为Vβ10、Vβ23。11例患者的透析时间与TCR Vβ表达呈显著负相关(r=-0．646，P=0．044)；用协方差分析MGN、MPGN、IgAN三个病种的TCR Vβ表达差别：不同透析时间的TCR Vβ表达的数量不同(F=10．193，P=0．019)，而MGN、MPGN、IgAN三个病种之间的表达量没有显著的差异(F=1．772，P=0．249)。结论：MHD患者外周血存和着TCR Vβ亚家族T细胞倾斜分布的现象，并有克隆性增殖的特征，提示大部分MHD患者存在某些细胞免疫功能低下和有相同的免疫刺激原。透析时间愈长，TCR Vβ表达的数量愈少，提示长期血液透析可能是MHD患者的细胞免疫功能低下的一个原因；而MGN、MPGN、IgAN三个病种之间TCR Vβ的表达量没有显著差异。

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的 了解脐血T细胞体外诱导后TCRVβ亚家族的分布和克隆性增殖特点 .方法 利用T淋巴细胞液体培养法 ,在不同刺激源 (rhIL - 2、抗CD3 单抗、PHA、AML -M5细胞和bcr -abl多肽 )条件下诱导脐血T细胞扩增 ,并利用RT -PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3片段 ,了解各Vβ亚家族的表达情况 .阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,了解T细胞克隆性 .结果 脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族 ,但经体外培养后 ,可检测到绝大多数TCRVβ亚家族T细胞 ,而经AML -M5细胞和bcr-abl多肽诱导后 ,TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖 .结论 脐血T细胞具备产生各TCRVβ亚家族T细胞的潜能 ,在白血病相关抗原诱导下 ,具有限制性和克隆性增殖的能力 .

鼻咽癌细胞株体外诱导同种异体T细胞TCR Vβ CDR3谱型和细胞毒性分析

目的用鼻咽癌细胞株CNE2体外负载同种异体树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导T淋巴细胞,使之活化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),观察其体外特异性杀伤和克隆性增殖。方法用GM-CSF,IL-4和TNF-α体外诱导健康志愿者外周血单核细胞,用CNE2负载,使之分化为成熟DC,流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征。在IL-2的作用下,用负载CNE2抗原的DC诱导自身T细胞生成特异性CTL。乳酸脱氢酶释放法检测其特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术分析T细胞的克隆性。结果健康志愿者外周血单核细胞体外在GM-CSF,IL-4和TNF-α诱导下获得具有典型表型特征的成熟DC,其诱导的CTL对CNE2有明显的特异性杀伤作用;PBMC的TCRVβCDR3谱型呈高斯分布,而诱导后的T细胞部分家族出现优势表达。结论负载鼻咽癌抗原的同种异体DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用,优势表达的TCRVβCDR3家族对鼻咽癌治疗有潜在的临床应用价值。

多发性骨髓瘤的诊治进展

MM患者的骨髓瘤细胞在骨髓内的克隆性增殖除可引起溶骨性骨骼破坏外,尚可分泌单株免疫球蛋白,使正常的多株免疫球蛋白合成受抑、本周蛋白随尿液排出,故常伴有贫血、肾功能衰竭和骨髓瘤髓外浸润所致各种损害。治疗的主要目的仍是减轻症状、延长生存期及改善生存质量。