家蚕雌蚕无性克隆系与限性卵色品种杂交的配合力初探

为探讨“单交制种”新模式在家蚕育种和蚕种生产上应用的可行性,运用不完全双列杂交法,将雌蚕无性克隆系与限性卵色品种组配杂交组合,以秋丰×白玉为对照,在相同条件下进行饲养,调查了42对单交组合蚕期的主要经济性状和配合力水平。结果表明,有19对组合的万蚕产茧量、万蚕茧层量指标均优于对照,虫蛹率与对照相仿或超过对照。通过进一步的筛选有望选育出应用于生产的单交组合新品种。

利用雌蚕无性克隆系的新型雄蚕品种选育及应用

利用性别控制技术实现"农村专养雄蚕,蚕种场多养雌蚕"对提高蚕茧生产的茧丝产量和品质,以及降低雄蚕杂交种的生产成本具有重要意义。将育成的高发生率和高孵化率雌蚕无性克隆系与平衡致死雄蚕杂交,按不完全双列杂交方法组配成31个雄蚕杂交组合,通过3年5期的比较试验,从中筛选出综合经济性状优良的新型雄蚕品种雌35×平28和雌29×平28,并在浙江主蚕区成功试养。新型雄蚕品种与现行雄蚕品种相比,张种产量提高8.53%,解舒丝长增加45m,鲜茧出丝率提高0.7个百分点。新型雄蚕品种的育成有望进一步降低雄蚕杂交种的生产成本,加速专养雄蚕产业化的进程。

淇河鲫雌核发育克隆系鉴定与性状分析

淇河鲫(Carassius auratus)为河南省的传统优质特色水产品种之一,是我国著名的鲫地方品种。本研究利用15个微卫星标记从85尾淇河鲫样品中共鉴定出21个克隆系,在其中6个克隆系中检测到18尾雄性个体。结果表明:淇河鲫是两性型雌核发育三倍体,遗传多样性水平较高。多元统计分析显示:体高、体宽、背鳍基长等3个性状对体质量的影响达到了极显著的水平(P<0.01),这一结果与体高背厚的淇河鲫种质较优异的生产经验一致。本研究结果提示:可以借鉴两性型雌核发育方正银鲫育种成功经验来开展淇河鲫品种的选育,在选育过程中应关注淇河鲫体高背厚的形态特点。

高产人参寡糖素培养细胞变异克隆系的筛选

用２ｍｍｏｌ／Ｌ的ＭＮＮＧ处理经过滤的人参悬浮培养细胞１小时后，细胞存活率下降显著，细胞克隆植板率只是对照组的１０．１２％。经细胞平板克隆共获得克隆系１５１株，其中很多克隆系在转移培养中生长缓慢，甚至不生长而死亡。经分析可供测定的克隆系生长和寡糖素含量的差异，对１１株寡糖素含量较高克隆系经连续１０代继代培养观察，选出一株稳定高产人参寡糖素优良克隆系ＰＧＭＢ－３７，其平均生长速率是０．５５８ｇＤＷＬ￣（－１）ｄ￣（－１）为亲本的１．５倍，平均寡糖素含量是１４．６７％ＤＷ，平均寡糖素产率是２Ａ５６ｇ／Ｌ，分别比亲本高７０％和１５６％，并且它的过氧化物酶同工酶谱特征与亲本之间也呈稳定性差异。

雌蚕无性克隆系的构建及应用研究

基于雌蚕无性克隆后代全雌、基因型完全一致的遗传特性,在家蚕遗传育种及杂种优势机理研究等方面具有重要价值。本文介绍了10余年来在雌蚕无性克隆性状的遗传特性、无性克隆系的构建及应用方面所取得的主要进展。

新生大鼠海马区神经干细胞分离培养和单细胞克隆系建立及鉴定

目的:分离培养新生大鼠海马区神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),建立NSCs单细胞克隆系。方法:取新生SD大鼠海马组织分离NSCs后无血清技术培养,建立其克隆系并行单细胞传代克隆培养。采用细胞免疫荧光和RT-PCR等技术对NSCs进行鉴定,分子标志物选择Nestin和Sox2。NSCs诱导分化的神经元的鉴定,标示物选择早期神经元特异性微管蛋白(β-tubulin),星形胶质细胞标示物为特异性胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),少突胶质细胞特异性标记蛋白为髓鞘相关蛋白(cyclic nucleotide phosphodiesterase,CNP)。结果:无血清培养法可维持NSCs生长和促进其增殖。成功建立NSCs单细胞克隆系,传代可获得大量亚克隆NSCs株团。单细胞克隆NSCs球团经早期酶消化结合后期机械吹打法传代,分散为单细胞或类单细胞后,增殖及分化能力依然存在。单细胞克隆系株经Nestin和Sox2细胞免疫荧光或RT-PCR检测均为阳性表达。在加有胎牛血清培养基条件下进行诱导分化,来自单细胞克隆系的细胞株同样可分化为神经元样、星形胶质细胞样和少突胶质细胞样3种神经细胞,即β-tubulin、GFAP、CNP免疫荧光染色分别呈阳性。结论:无血清培养可成功建立新生SD大鼠海马区NSCs单细胞克隆系,并可稳定传代增殖,并在一定条件下可诱导分化为成熟的神经元和神经胶质细胞。

家蚕雌蚕无性克隆系与平衡致死雄蚕杂交组合比较试验

为了进一步降低雄蚕杂交种的生产成本,用雌蚕无性克隆系与平衡致死雄蚕杂交的方法,配制成30对雄蚕杂交组合,经两年的实验室比较试验,从中初步筛选出3对组合,其虫蛹率、万蚕产茧层量、鲜茧出丝率等主要经济性状优于对照种秋丰×白玉,解舒和净度优良。通过进一步的筛选,有望育成综合经济性状优良、能有效降低制种成本的新型雄蚕杂交组合。

以吸水链霉菌应城变种为宿主的一系列基因克隆体系的发展

对链霉菌分子生物学的兴趣有一个十分突出的特点,就是人们感兴趣的菌种非常广泛,这个特点出自对不同的抗生素和细胞外酶生物合成遗传调控研究的需要。吸水链霉菌应城变种就是这类有趣菌种中的一员。 吸水链霉菌应城变种具有下述有趣的特征:(一)它产生三种不同结构的农用抗生素,一种为氨基糖苷类抗生素,与有效霉素A(Validamycin)的结构相类似,对水稻病原菌中的丝核菌类(如纹枯病,小核菌核病),具有良好防效;一种为多肽类抗生素。

不同转移潜能的人胰腺癌JF305单克隆细胞亚系的建立

为研究胰腺癌的转移机理，在我校原建立的人胰腺癌ＪＦ３０５ 细胞系基础上，利用细胞克隆，细胞电泳，流式细胞仪及人癌裸小鼠原位移植技术，建立了具有不同转移潜能的人胰腺癌ＪＦ３０５ 单克隆细胞亚系和具有不同转移潜能的人胰腺癌单克隆细胞亚系裸小鼠原位移植模型。结果表明该单克隆细胞亚系及其肿瘤移植模型的建立，为探讨胰腺癌转移机理提供了较理想的研究方法。

人骨髓基质成纤维样细胞克隆亚系分泌产物的实验研究

经过克隆挑选,选出一株能耐受低血清浓度(5%)培养条件的纤维母细胞克隆细胞系(HFCL-1)。这个亚系的条件培养液(HFCL-1CM)能刺激人骨髓和小鼠骨髓中 GM-CFU 形成集落。不同浓度的 HFCL-1CM 与 K_(562)和 HL_(60)白血病细胞系细胞共培后显示对 K_(562)和HL_(60)细胞增殖的抑制,HFCL-1单层也显示同样的效果。HFCL-1要求低血清条件,这为进一步生化分离活性因子,提供了可行的条件。

青蒿无性系中青蒿素生物合成的相关因素

通过诱导丛生芽的方法得到青蒿高产无性克隆系S1,并用S1进行了青蒿素生物合成相关因素的研究 .发现在Hoagland培养液中添加 0 .4 4mg/L浓度的ZnSO4或者 5 .72mg/L的HBO3 时 ,能有效提高青蒿素的含量 .研究表明 ,青蒿素含量和青蒿各株系间的遗传差异存在很大关系 ,RAPD分析的结果表明 ,用OPA15能够在青蒿高产株系中扩增到OPA15 10 0 0 这一特异性片段 .另外 ,对青蒿素含量和青蒿生殖生长关系的研究表明 ,青蒿素含量最高的发育时期是现蕾期 .图 7表 1参

牙鲆连续四代减数分裂雌核发育家系的遗传特征分析

为了研究纯合度和遗传相似度在牙鲆(Paralichthys olivaceus)连续四代减数分裂雌核发育家系中的变化规律,本研究利用分布在不同连锁群上的24个高重组率微卫星标记对牙鲆连续减数分裂雌核发育二代(G2)、三代(G3)、四代(G4)家系及普通家系对照组进行了遗传分析。结果显示,24个微卫星位点在对照组、G2、G3、G4家系中,分别检测到96、42、32和32个等位基因,平均等位基因数分别为4.00、1.98、1.33和1.33;期望杂合度分别为0.6416、0.3472、0.1694和0.1492;纯合度分别为0.3503、0.6528、0.8306和0.8508;遗传相似系数分别为0.5822、0.9238、0.9890和0.9988。24个位点中已有17个纯合,但尚有7个保持杂合状态。同时,将上述结果和已发表的减数分裂雌核发育一代(G1)家系的数据进行分析,结果表明,诱导连续减数分裂雌核发育不仅能提高个体的纯合度,同时也可提高子代个体间的遗传相似度;纯合度和遗传相似度在G1、G2和G3家系中能够得到逐步提高,代际之间差异显著(P<0.05);但在G4家系中趋于稳定,与G3家系差异不显著。G4家系的遗传相似性(0.9988)已高于连续20代全同胞交配所获得的理论值(0.9860),连续诱导减数分裂雌核发育是快速建立鱼类近交系的良好方法。

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材料 ,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞系。经 3～ 4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆 (一般B5培养基平板克隆 ,优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆 ) ,经 5代连续继代培养观察和薄板层析 -分光光度法分析 ,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高 ,且克隆最易成功 ,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV 5 7,其平均生长速率为 14 .4 12mg .Fw/L .d ,为原始株系的 1.91倍 ,平均小檗碱含量为 2 .17%干重 ,是原始株系的 2 .2 6倍。

新型CKLF1对家兔红系造血祖细胞增殖分化的影响

目的 探讨新型趋化因子CKLF1对家兔骨髓单个核细胞形成红系集落的影响 ,并初步探讨其作用机制。 方法 采用尼龙毛去除骨髓基质细胞法、甲基纤维素半固体培养法检测新型趋化因子CKLF1对家兔红系形成的影响。 结果 新型趋化因子CKLF1具有促进家兔骨髓单个核细胞形成红系克隆的作用 ,并且该作用与CK LF1的浓度呈正相关 ;去除骨髓基质细胞后 ,CKLF1对红系克隆的形成无明显影响 ;另外 ,CKLF1刺激制备的基质细胞上清也具有促进红系克隆形成的作用。 结论 新型趋化因子CKLF1可能是通过调控骨髓基质细胞而间接促进红系克隆的形成。

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材料,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞系。经3～4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆(一般B5培养基平板克隆、优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆),经5代连续继代培养观察和薄板层析-分光光度法分析,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高,且克隆最易成功,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV-57,其平均生长速率为每天14.412mg/L,为原始株系的1.91倍,平均小檗碱含量为干重的2.17%,是原始株系的2.26倍。

生长特性差别的胃癌MGC803细胞亚系间细胞骨架、细胞通讯与癌基因表达的比较研究

肿瘤细胞表型差异是临床药物敏感性、抗原性、转移性、潜伏性和进展速度等差异的主要原因。为了弄清恶性表型差别的表现、相关性及调节机理、我们从胃癌MGC 803系分离了单细胞亚系,各亚系按克隆过程的时间差别归纳分组,选快组M 17、中组M 6和慢组M 3进行比较。软琼脂生长实验表明三者的恶性程度有显著差别;M17恶性度最高,M3最低,M6居中。与其它表型联系比较,证明细胞生长速度、细胞微丝、微管骨架破坏及细胞通讯功能抑制都与锚着不依赖性生长的恶性特征有平行相关性。同时,M 17和M 3原癌基因表达有明显差别。

“基于雌蚕无性克隆与限性斑纹技术的家蚕新品种选育及应用”通过浙江省省级成果鉴定

2019年12月28日,蚕种扩繁与生产技术岗位科学家主持完成的"基于雌蚕无性克隆与限性斑纹技术的家蚕新品种选育及应用"成果通过了由西南大学、中国科学院上海植物生理生态研究所、中国农科院蚕业研究所、浙江大学、苏州大学、湖州师范学院、浙江省农技术推广中心等专家组成的鉴定委员会鉴定。

雄蚕新品种浙凤2号的选育

利用孵化率高且后代全为雌性个体的雌蚕无性克隆系雌35与平衡致死系平28杂交,育成了综合经济性状优良的雄蚕新品种浙凤2号。新品种在浙江省家蚕新品种实验室鉴定和农村生产试验中表现出孵化、眠起、上蔟齐一,茧型大、产量高,茧丝品质优的特点。新品种的龄期经过略长于对照雄蚕品种秋华×平30,虫蛹率高于对照品种0.66个百分点,万蚕产茧量和万蚕茧层量分别比对照品种提高2.99%、3.73%,茧丝洁净94.80分,出丝率高于对照品种。新品种在蚕种生产过程中,利用雌蚕无性克隆系可实现一方专养雌蚕,另一方专养雄蚕的生产模式,不仅能降低雄蚕杂交种的生产成本,也能提高杂交率和蚕种质量,促进雄蚕新品种的推广应用。2016年5月新品种通过浙江省农作物品种审定委员会审定,适宜在长江中下游及四川、山东、河南等省蚕区春季和晚秋季推广饲养。