固定化银杏克隆细胞悬浮培养产生黄酮的研究

采用银杏果实为原料诱导得到颗粒状愈伤组织,在MS培养液中筛选克隆细胞,单细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT中培养。细胞悬浮液与3%的海藻酸钠混合后滴入2%CaCl2MS,制成小球凝胶。固定化细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT+10mg/L肌醇的培养基中悬浮培养25d,黄酮生物合成量为85·63mg/L,克隆细胞增长速度提高24·45倍。

S180克隆细胞株的选择及其细胞特性研究

目的 对北京市肿瘤研究所及本实验动物学部保存的S180进行了克隆培养，根据克隆细胞的腹水生长特性，从中选出8株克隆，对不同克隆S180细胞的特性进行研究。方法 免疫组化法测不同克隆细胞的蛋白质分布，流式细胞仪测定不同克隆细胞的DNA含量，扫描电镜观察克隆细胞表面结构，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测克隆细胞的电泳图谱。结果 其中3株克隆从可见腹水之日起，腹水即为血性；1株微显血性；4株在接种腹腔7日内腹水无血性。扫描电镜观察6株克隆细胞表面结构，各具特点，有所不同。流式细胞仪测定6株不同S180克隆细胞DNA含量，分别为8.5, 9.3，7.9，8.5，8.6，8.3pg。免疫组化染色显示不同克隆与11种抗体反应有所不同，一旦与某抗体反应阳性，则阳性细胞比率均在97%以上。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定克隆细胞S1H10及S2D9的电泳图谱，S1H10克隆细胞有33条带，S2D9克隆细胞有30条带。 结论 8株克隆细胞各具特点。

不同转移潜能的人胰腺癌JF305单克隆细胞亚系的建立

为研究胰腺癌的转移机理，在我校原建立的人胰腺癌ＪＦ３０５ 细胞系基础上，利用细胞克隆，细胞电泳，流式细胞仪及人癌裸小鼠原位移植技术，建立了具有不同转移潜能的人胰腺癌ＪＦ３０５ 单克隆细胞亚系和具有不同转移潜能的人胰腺癌单克隆细胞亚系裸小鼠原位移植模型。结果表明该单克隆细胞亚系及其肿瘤移植模型的建立，为探讨胰腺癌转移机理提供了较理想的研究方法。

生物素标记的6种cDNA探针检测H22、EAC及其克隆细胞株mRNA的表达

目的 检测H2 2、EAC瘤细胞及其克隆细胞株mRNA的表达。方法 用生物素标记的 6种cDNA探针 ,细胞玻片原位杂交的方法。结果 H2 2与生物素标记的 4种探针杂交阳性 ,其克隆细胞株H2D8、H2G4分别与 3及 1种探针杂交阳性 ;EAC细胞株与 4种探针杂交阳性 ,克隆细胞株E2G8与 2种探针杂交阳性 ,E2C6克隆细胞株与 6种探针杂交均阴性。

鼻咽癌单克隆细胞体内演进中自发性转移及c－myc、c－fos、bcl－2癌基因蛋白的表达

将鼻咽癌单克隆细胞株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５移植于裸鼠，待移植瘤发生转移后，取其淋巴结和肺转移灶癌组织移植裸鼠，如此重复２～４个循环后，观察每代移植瘤的转移表型及肿瘤细胞ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ、ｂｃｌ－２癌基因蛋白的表达。结果表明：随着肿瘤细胞的演进，每代移植瘤的转移率增高，且转移途径更为单一；肿瘤细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２癌基因蛋白的表达增强；ｃ－ｆｏｓ癌基因蛋白的表达降低。提示：肿瘤细胞的演进、转移及癌基因蛋白的表达存在一定的关系。

生物素标记的6种cDNA探针检测S180及其克隆细胞株mRNA的表达

目的 检测S180及其克隆细胞株S1B11及S2D9mRNA的表达 ,对这些细胞株进行识别和质量控制。方法 用生物素标记的 6种cDNA探针 ,细胞玻片原位杂交的方法检测细胞中mRNA的表达。结果 北京市肿瘤研究所 (肿瘤所 )保存的S180与生物素标记的P16、c fos、c myc及c jun探针杂交阳性 ,克隆细胞株S1B11与c fos及c jun探针杂交阳性 ,克隆细胞株S2D9与c fos、c myc及c jun探针杂交阳性。结论 肿瘤所S180及其 2株克隆细胞中mRNA的表达不同 ,c myc基因的表达与否可以把S1B11及S2D9克隆细胞区别开 ;

多克隆细胞系的研究价值——J6-1人白血病细胞系30年研究评述

J6-1细胞系是我国建立的第一株人白血病细胞系,是EBV和HHV-6双重感染的多克隆细胞系。J6-1细胞系建系30年来,从J6-1细胞克隆了许多细胞因子、受体及其他基因,提供了许多有关白血病细胞性质和功能的信息,从而衍生出多项研究课题,而所有这些显示出多克隆细胞系特有的研究价值。本文就30年来J6-1人白血病细胞系的研究作一评述,包括J6-1细胞系的异质性和多克隆性,J6-1细胞群体的生存机制和J6-1细胞系的异常细胞间通讯及其意义,以及J6-1细胞系的启示。

L1210克隆细胞肿瘤动物模型生物学特性研究

目的 对L12 10细胞及其 4株克隆细胞建立的肿瘤动物模型的某些生物学特性进行比较研究 ,从中筛选出基本符合L12 10细胞生物学特性且一致性更好的克隆细胞。方法 北京肿瘤所L12 10细胞和 4株克隆细胞腹腔接种DBA 2小鼠 ,观察产生腹水的性质、腹水瘤细胞浓度和致小鼠死亡时间 ;皮下接种DBA 2小鼠 ,观察瘤块的生长情况 ;腹腔注射化疗药物环磷酰胺 (CY) ,比较对CY治疗的敏感性。结果 腹腔接种DBA 2小鼠均能生长腹水 ,其中克隆细胞L2H8、L3B12产生血性腹水 ,L3F9的腹水微血性 ,L3E11与肿瘤所L12 10细胞为无血性腹水 ;腹水瘤细胞的浓度及小鼠生存时间亦有差别。肿瘤所L12 10细胞及克隆细胞L3F9、L2H8、L3E11、L3B12第 10天瘤重依次为 1 9± 0 4 6、1 5± 0 3 8、0 75± 0 5 2、2 6± 0 3 0、2 0± 0 3 3g ;用CY治疗的抑瘤率分别是 4 8 7% ,81 3 % ,86 0 % ,78 7%及 67 1%。结论 4株克隆细胞的生物学特性基本符合L12 10细胞 ,对化疗药物CY的敏感性均高于L12

高成瘤性前列腺癌细胞亚克隆细胞株的制备及其生物学特性的研究

目的:建立人前列腺癌LNCap细胞高成瘤性亚克隆细胞株并探讨其生物学特性。方法:慢病毒载体PGK-luciferase-GFP转染LNCap细胞,稳转株与Matrigel混合注入SCID小鼠皮下,反复消化法原代培养皮下瘤获得亚克隆细胞株,CCK8及Transwell实验检测细胞增殖及迁移力;用亲代LNCap细胞及亚克隆细胞皮下注射SCID小鼠成瘤,观察两组瘤体生长及大小,并用生物活体发光、病理及免疫组织化学检测瘤体情况。结果:与亲代LNCap细胞相比,亚克隆细胞的生长速度增快,迁移力增强,皮下瘤成瘤率增高,荧光信号强度增加,皮下瘤组织切片HE染色镜下可见核分裂相,免疫组织化学AR染色阳性。结论:制备的人前列腺癌亚克隆细胞株其恶性生物行为增加。

克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究

目的 研究从S180获得的克隆细胞株S2D9,接种 4个不同品 (种 )系小鼠建立肿瘤动物模型的某些基本生物学特性。方法 由KM小鼠腹腔传代的S2D9克隆细胞 ,用GKN稀释成不同浓度 ,接种KM、DBA 2、6 15、C57BL 6小鼠右腋皮下及腹腔 ,观察小鼠最早出现可见肿块、腹水时间及小鼠生存时间 ;不同品 (种 )系小鼠经皮下接种S2D9细胞 ,建立肿瘤模型 ,从接种后第 5日 ,每日观察肿瘤生长情况 ,测量肿块直径 (cm) ,绘制肿瘤生长曲线 ;S2D9克隆细胞株接种BALB c小鼠皮下 ,取接种第 7日肿块 ,经石蜡切片 ,HE染色 ,观察病理结果 ;不同品 (种 )系小鼠皮下接种S2D9瘤细胞建立的动物模型 ,经腹腔注射环磷酰胺 (CTX)或顺胺氯铂 ,观察S2D9克隆细胞肿瘤模型对CTX或顺胺氯铂治疗的敏感性。结果 S2D9克隆细胞在 6 15及DBA 2小鼠的皮下较KM及C57BL 6小鼠容易生长肿瘤 ;在KM及DBA 2小鼠腹腔较C57BL/ 6及 6 15小鼠容易长出腹水 ;皮下接种KM、C57BL/ 6、6 15及DBA 2四个不同品(种 )系小鼠 ,第 12天瘤重分别为 (2 3± 0 9)g ,(0 8± 0 2 )g ,(2 0± 0 2 )g及 (1 9± 0 1)g;S2D9瘤细胞接种 4个不同品 (种 )系小鼠制备的肿瘤模型 ,用CTX治疗 ,抑瘤率分别为 80 % (6 15 ) ,75 % (C57BL 6 ) ,6 8 4% (DBA 2 ) ,6 5 2 %(KM) ;用顺胺?

L1210克隆细胞mRNA的表达及蛋白电泳图谱分析

目的 研究 L12 10及其克隆细胞 m RNA表达的差异 ,从基因水平探讨质控瘤株的方法。方法 用SDS- PAGE电泳观察瘤细胞株的蛋白质电泳图谱 ;6株生物素标记的探针与瘤细胞进行玻片原位杂交测定瘤细胞m RNA的表达。结果 北京肿瘤所 L12 10蛋白质条带数为 32条带 ,克隆细胞 L3F9和 L3E11均为 31条带 ;细胞原位杂交证明 ,北京肿瘤所 L12 10与 6株探针均杂交阳性 ,但杂交阳性染色强度不同 ;克隆细胞 L3E11与 p16、c- jun及 p5 3探针杂交阳性 ;克隆细胞 L3F9与 p16 ,c- fos,c- myc及 c- jun探针杂交阳性。结论 从北京肿瘤所保存的L12 10细胞中获得的 2株克隆细胞 L3E11和 L3F9的蛋白质电泳图谱的条带数一致 ,但其 m RNA的表达不同 ;c-fos,c- myc以及 p5 3基因的表达与否可以把这 2株克隆细胞区别开来 ,c

对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究

目的运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。

小鼠肝癌H_(22)克隆细胞株H2D8与其原瘤株武汉H_(22)的基本特性比较研究

用细胞克隆的方法获得武汉大学典型培养物保藏中心保存的小鼠肝癌H2 2 瘤株 (武汉H2 2 )的克隆细胞株H2D8。比较武汉H2 2 及H2D8对血清的依赖性、致瘤性、病理特征和对环磷酰胺 (CTX)的敏感性。结果发现H2D8细胞株对血清的依赖性 ,和对小鼠致瘤性及肿瘤病理学特性与武汉H2 2 细胞无明显差异 ;H2D8细胞对CTX治疗的敏感性更高。说明H2D8克隆株在体外培养、致瘤性和病理特征方面能保持原瘤株的细胞特性 ;

人鼻咽癌单克隆细胞株在传代移植的裸鼠体内转移与HLA表达定量的关系

为了研究人鼻咽癌单克隆细胞裸鼠体内传代转移特性及 HL A的表达变化 ,我们以人鼻咽癌单克隆细胞株 (CNE-2 Z- H5 )为对象 ,将各单克隆细胞株移植于裸鼠 ,待肿瘤发生转移后 ,取其淋巴结和肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠 ,如此移植 2 - 4代 ,观察每代裸鼠的转移特性及鼻咽癌细胞 HL A表达的免疫组织化学定量变化。结果显示随着鼻咽癌单克隆细胞的传代移植 ,每代裸鼠肿瘤的转移率增高 (P<0 .0 1) ,转移途径更为单一。淋巴道转移的克隆细胞其 HL A 类抗原的表达随体内传代次数的增加而呈明显降低的趋势 ,与原代比较有显著性差异 (P<0 .0 1) ,但第 4代又急刷升高 (P<0 .0 1) ;HL A 类抗原的表达则呈波浪样改变 ;各代间表达平均强度变化不规则。肺转移灶癌细胞的 HL A 、 HL A 类抗原表达明显降低 ,两者与原代癌细胞比较都有显著性差异 (P<0 .0 1)。表明鼻咽癌细胞演进中转移能力和细胞本身特性、体内的环境选择关系密切 ,且可能和癌细胞 HL

高低不同分化特性人成骨肉瘤MG-63克隆细胞株的建立

目的:建立分化程度高低不同的骨肉瘤细胞株.方法:用有限稀释法将人成骨肉瘤MG-63细胞系单克隆化,并作如下鉴定:(1)细胞增殖;(2)细胞形态学;(3)软琼脂克隆形成率;(4)染色体分析;(5)细胞周期时相分析;(6)碱性磷酸酶的活性;(7)细胞运动能力;(8)裸鼠成瘤实验.结果:共得到23个克隆,命名为MG-63-1～MG-63-23.其中的5、18号细胞株具有明显差异,18号为大核长梭形细胞,无接触抑制,克隆形成率高,体内成瘤时间短,代表低分化的骨肉瘤细胞株.5号以短梭形为主,核质比例变小,有一定的接触抑制,致瘤能力较低,为高分化的骨肉瘤细胞株.结论:通过对骨肉瘤细胞系MG-63的单克隆化,建立了具有高、低不同分化程度的两个人骨肉瘤细胞株.

5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究

目的研究5个S180克隆细胞株随机扩增多态性DNA(RAPD)特征以及S180-S2D9传代细胞的生物学特性. 方法运用23条引物对S180-S2D9、 S180-S2D7、S180-S1F11 、S180-S1H10 、S180-S1B11的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果;对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞基因组DNA,进行RAPD分析;计数染色体数目;原代、50代细胞分别接种入KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;流式细胞仪测DNA含量. 结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物,通过这3条引物分析S180-S2D9的RAPD特征,原代、25代、50代、75代细胞之间的RAPD条带无差异;原代、25代、50代、75代细胞的染色体数差异无统计学意义.原代、50代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,两组的存活天数分别为13～23 d、13～20 d,原代与50代组存活天数的差异无统计学意义.流式细胞仪测DNA相对含量分别为0.3890、0.3542、0.3575、0.3984.以上结果提示,S180-S2D9传到75代时未发现遗传变异. 结论可以运用RAPD-PCR技术对克隆细胞株进行质量控制.S180-S2D9克隆株性质均一,致瘤特性稳定.

三单位保存的艾氏腹水癌细胞株及克隆细胞蛋白质表达

目的 比较三个单位保存的艾氏腹水癌 (EAC)细胞株及克隆细胞的蛋白质表达。方法 对北京市肿瘤研究所 (北京 )保存的EAC进行克隆培养 ,从中选出 5株克隆 ;对武汉大学保种中心 (武汉 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东 )及北京保存的EAC细胞株及 5株克隆细胞的SDS PAGE电泳图谱及免疫组化蛋白质分布进行了对比。结果 武汉、山东及北京保存的EAC的电泳条带数分别为 2 2、2 5及 2 8条 ,而克隆细胞E2G8为 2 6条带。三单位EAC瘤细胞对 5种抗体做免疫组化染色 ,与 1株抗体反应的阳性细胞比例均较高 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,与另 4种抗体反应的阳性细胞率差异有显著性 ;5株克隆细胞对 10种抗体作免疫组化染色 ,其中克隆细胞E2G8、E2F4与 7种抗体反应阳性 ,E2C6与 8种抗体反应阳性 ,E1G5、E2B5与 6种抗体反应阳性。克隆细胞一旦与某种抗体反应阳性 ,阳性细胞的比例即在 85 %以上。

大鼠舌黏膜鳞癌单克隆细胞系Rca-T的建立及其生物学表征

目的:建立SD大鼠舌黏膜鳞癌细胞系(sprague-dawley rat tongue mucosa squamous cell carcinoma cell line,Rca-T),并观察其生物学特性,为口腔癌的基础研究提供大鼠来源的恶性细胞系及荷瘤动物模型。方法:将4-硝基喹啉-1-氧化物诱发的SD大鼠舌黏膜鳞癌组织进行原代培养,并用有限稀释法获得单克隆细胞。光学显微镜观察细胞的形态,CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测其细胞周期,动物实验观察细胞裸鼠皮下成瘤率。结果:成功获取大鼠舌黏膜鳞癌单克隆细胞系,细胞呈梭形,群体倍增时间为23.35 h,平板克隆形成率为63.06%,CK、Vimentin和N-cadherin免疫组织化学染色均为阳性,细胞系裸鼠皮下接种成瘤率为100%(6/6)。结论:成功建立大鼠舌黏膜鳞癌单克隆细胞系Rca-T,可作为研究口腔鳞癌发生机制和诊断治疗的细胞模型。

鼠肝癌克隆细胞动物接种试验(附光、电镜观察)

目前,人肿瘤克隆形成试验正被人们用来预测临床肿瘤患者对化疗的敏感性,以选择合适的药物,提高疗效;或用于筛选和开发新的抗癌物质,以及研究肿瘤的某些生物学问题。我们用小鼠腹水型肝癌细胞进行克隆形成试验初获成功,为了确定克隆细胞的生物学特性,我们进行动物接种试验,现报告如下。