不同火炬树种群的克隆分株能力比较研究

火炬树(Rhus typhina)为漆树科(Anacardiaceae)盐肤木属落叶灌木或小乔木;其水平根系发达,根蘖力强,是植被恢复与构建、环境美化和风景林营建的优良树种之一。现以北方民族大学校园内3个火炬树小种群为材料,研究了不同种群的克隆分株能力。结果表明:3个种群克隆分株产生萌条的株高、基径、复叶数和生物量积累量均有很大差异。可能是产生克隆分株的根径较小和克隆分株距离母体植株较远造成的,同时也可能与不同种群斑块环境条件的差异或不同的管理措施有关。

谷氨酰胺代谢对人甲状腺癌细胞系体外增殖能力影响的实验研究

目的:探讨谷氨酰胺(Gln)代谢对人甲状腺癌细胞系体外增殖能力的影响。方法:体外用含不同浓度Gln培养基培养人甲状腺癌细胞系C643、IHH4、8505C、8305C、K1和TPC-1。通过噻唑蓝(MTT)及平板克隆形成实验评价Gln对甲状腺癌细胞体外增殖及克隆形成能力的影响。采用流式细胞仪检测Gln对甲状腺癌细胞凋亡的影响。利用三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测不同浓度Gln培养条件下甲状腺癌细胞ATP生成能力。结果:与含有Gln的培养基相比,不含Gln培养基培养的6株甲状腺癌细胞的增殖活性、克隆形成能力、ATP生成能力明显降低,细胞凋亡明显增加(均P<0.05)。结论:甲状腺癌细胞体外生长依赖Gln,剥夺Gln后甲状腺癌细胞体外增殖能力受到抑制,细胞凋亡增加。Gln代谢可能成为甲状腺癌尤其是未分化甲状腺癌的潜在治疗靶点。

IGF-FOXO3a通路对肝癌干细胞自我更新能力的调控

目的探讨FOXO3a对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)自我更新能力的调控作用以及其相关机制。方法流式细胞仪分选获取肝癌干细胞,实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测FOXO3a在肝癌干细胞中的表达情况;利用类胰岛素生长因子(insulin-like growth factor,IGF)的抑制剂或激活剂改变IGF活性,Western blot和qRT-PCR检测FOXO3a表达的改变;包装、纯化表达和干扰FOXO3a的慢病毒并进行细胞的感染,Western blot检测其过表达和干扰效率;采用细胞克隆形成实验和细胞成球生长能力实验检测过表达或干扰FOXO3a后细胞自我更新能力的改变,以及肝癌细胞中激活IGF信号,同时过表达FOXO3a后细胞自我更新能力的改变。结果 FOXO3a在肝癌干细胞中的表达明显低于肝癌细胞(P<0.01),并且受到IGF的负向调控;构建了稳定过表达和干扰FOXO3a的细胞模型,并发现过表达FOXO3a后,细胞的克隆形成能力和成球生长能力均降低,而干扰FOXO3a后,细胞的克隆形成能力和成球生长能力均得到了提升;激活IGF信号,同时过表达FOXO3a后,细胞的克隆形成能力和成球生长能力下降。结论 FOXO3a对肝癌干细胞的自我更新能力具有负向调控作用,且可受到IGF的负调节,并介导IGF对肝癌干细胞的自我更新能力的调控。

干旱胁迫对沙棘克隆生长的影响

总结水分条件对沙棘生长、克隆繁殖能力、病虫害以及生理生化的影响:水分充足情况下,植株成活率高、个体较大、克隆繁殖能力强、子株生长倾向于"聚集型"、抗病虫害能力强;干旱胁迫环境使种群将更多的物质和能量分配于适应或抵抗干旱胁迫,表现出个体变小、克隆繁殖潜力受到抑制、子株生长倾向于"游击型"、病虫害加剧、光合速率低,导致种群寿命缩短、更新不良、早衰概率升高。但目前的研究仅限于生理或生态层次,缺乏克隆生长与干旱胁迫的因果关系探讨。建议今后加强基因表达、生理生态、内源激素、克隆行为对干旱胁迫响应规律及其因果关系方面的研究,从不同层次系统地揭示干早胁迫机制及适宜的水资源有效性范围,用以指导造林地选择、造林设计、生态恢复工作。

细胞密度与细胞增殖关系的初步分析

目的:探讨细胞密度对细胞克隆形成能力的影响。方法:利用平板克隆形成实验检测五种细胞系BT325、786-0、293、C6和NIH3T3的克隆形成能力,分析细胞密度或细胞数量对这些细胞系的克隆形成能力及细胞周期的影响。结果:细胞密度增加时,明显降低NIH3T3和786-0细胞系中具有克隆形成能力的细胞数,更高的细胞密度才能导致293细胞系的克隆形成能力下降。细胞密度的增加对BT325和C6这两种细胞系的克隆形成能力无明显影响。细胞周期分析表明,细胞密度对于BT325、C6以及293的细胞周期无明显影响,但能明显增加786-0和NIH3T3的G1期细胞比例,减少S期细胞比例。细胞密度可影响这五种细胞系的细胞周期和克隆形成能力,且两者关系密切。结论:可能存在一种与细胞数量相关的因素能抑制干细胞(包括肿瘤干细胞)的扩增。另外,在永生化细胞系中,干细胞的扩增频率与细胞的有丝分裂频率基本一致。

miR-194对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、凋亡的影响及其机制

目的 观察微小RNA-194(miR-194)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法 取A549细胞和人正常肺上皮细胞16HBE,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-194。常规培养A549细胞,经脂质体分别转染miR-194抑制物、miR-194模拟物(mimics)、对照48h(分别计为A、B、C组),采用qRT-PCR验证转染效果,MTS法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western blotting法检测细胞JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白。结果 A549、16HBE细胞中miR-194相对表达量分别为1.00±0.10、8.17±0.14,两者比较,P<0.05。A、B、C组miR-194相对表达量分别为0.31±0.11、8.35±0.31、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组转染24、48、72h的OD值分别为0.494±0.069、0.843±0.084、1.111±0.109,B组分别为0.355±0.026、0.510±0.049、0.706±0.087,C组分别为0.427±0.022、0.664±0.068、0.906±0.060,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A、B、C组细胞克隆数目分别为(232.12±10.82)、(43.67±10.97)、(127.33±6.43)个,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。与C组比较,A组细胞凋亡现象及数目明显减少,B组细胞凋亡现象及数目明显增多;A、B、C组细胞凋亡率分别为4.58%±1.01%、21.45%±1.78%、10.23%±1.65%,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白相对表达量分别为5.97±0.24、4.52±0.18、0.11±0.04,B组分别为0.34±0.03、0.21±0.02、7.21±0.79,C组分别为1.00±0.10、1.00±0.10、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。结论 miR-194能抑制A549细胞的增殖、克隆形成能力,并诱导细胞凋亡,其机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路并促进活化的Caspase-3蛋白表达有关。

小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养及鉴定

为了探讨并完善小鼠骨骼肌卫星细胞（satellite cells,SCs）的原代分离培养技术,试验通过对SCs的取材、分离、消化、培养等步骤的改进获得SCs,并应用差速贴壁法进行纯化,从形态学、生长曲线、克隆形成能力、冻存复苏活力、SCs表面标记物的检测、成肌细胞分化能力及RT-PCR鉴定等方面对SCs进行研究。结果表明：分离获得的小鼠骨骼肌SCs呈梭形或纺锤形,细胞饱满且折光性强,生长曲线呈标准的＂S＂型,克隆形成率高达（56.11±1.73）%,冻存复苏后细胞活率为（96.67±0.87）%,表达desmin、c-Met、Myf5、Myo D等SCs表面特异性标记物,成肌细胞诱导分化后能形成多核肌管并表达成肌细胞表面特异性标记物Mylpf。说明小鼠骨骼肌SCs体外培养获得成功。

金粉蕨素抑制人胃腺癌细胞增殖作用

目的：观察金粉蕨素（Onychin）对人胃腺癌MGC－803细胞增殖及克隆形成能力的抑制作用。方法：采用MTT比色分析法测定MGC－803细胞增殖。应用琼脂扩散盒法和平皿琼脂培养克隆形成法检测MGC－803细胞体内外克隆形成能力。结果：金粉蕨素（1．25－20．00μg/ml)对MGC－803细胞增殖有明显抑制作用，IC50值是3．24μg/ml；2．50－20．00μg/ml的金粉蕨素具有显著抑制MGC－803细胞体外克隆形成能力作用，IC50值为4．98μg/ml；2．50－20．00mg/kg的金粉蕨素对MGC－803细胞体内克隆形成能力具抑制作用，呈浓度相关性（P＜0．01）。结论：金粉蕨素对MGC－803细胞增殖及克隆形成能力具有抑制作用。

非整倍体与肿瘤细胞增殖表型关系的初步研究

目的探讨非整倍体与肿瘤细胞增殖表型的关系.方法采用平板克隆形成实验检测人胶质瘤细胞系BT325和大鼠胶质瘤细胞系C6单个细胞的增殖能力,应用常规染色体分析方法检测这些细胞系的核型.结果 BT325和C6细胞系中具有最强增殖能力的细胞分别占8.0%和13.0%左右,具有中等增殖能力的细胞比例分别占17.0%和27.0%,不具有增殖能力或增殖能力很低的细胞分别占75.0%和60.0%.连续细胞克隆形成实验发现,只有具有最强增殖能力的细胞能够连续传代.核型分析结果表明这些细胞系都是非整倍体核型,细胞系BT325的众数范围是47～57,C6的众数范围是32～41,众数范围的细胞比例分别是72.6%和73.4%.结论单纯从非整倍体出发不可能合理解释肿瘤细胞增殖表型的异质性现象,提示有其它机制参与癌变过程.

ASPM对肝癌细胞恶性表型的影响

目的:探讨人类异常纺锤体样小头畸形相关蛋白基因(ASPM)对肝癌细胞恶性表型的影响。方法:将人肝癌细胞株QGY-7703培养于RPMI1640培养液,放置在5%CO_(2)、37℃培养箱中培养。用0.02%EDTA配制的0.1%胰酶消化细胞,取对数生长期细胞进行转染,收集细胞检测目的基因的沉默效率。以ASPM基因沉默的QGY-7703细胞为试验组,以转染空质粒的QGY-7703细胞为对照组。比较两组细胞生长速度、克隆形成能力、细胞周期分布、细胞凋亡比例、细胞迁移数目与侵袭数目。结果:试验组与对照组相比,QGY-7703肝癌细胞的生长速度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);试验组细胞克隆形成数目为(165.12±10.45)个低于对照组(264.21±12.59)个,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组G1/G0期细胞比例高于对照组,S期细胞比例低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组G2/M期细胞比例相比差异无统计学意义(P>0.05)。试验组QGY-7703的凋亡水平为(8.10±0.16)%高于对照组的(0.65±0.11)%,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组细胞迁移数目与侵袭数目均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默ASPM基因可抑制QGY-7703的增殖能力和克隆形成能力,增加G1期细胞比例、减少S期比例,促进其凋亡,并可抑制肝癌细胞QGY-7703的迁移能力,可作为肝癌治疗的新的分子靶点。

GHGKHKNK八肽抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-F10转移及其机制的实验研究

目的：探讨GHGKHKNK八肽抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-FIO细胞转移及其机制。结果：1．不同剂量的GHGKHKNK八肽对小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-FIO的克隆形成均有抑制作用，与对照组相比较均有显著性差异（P〈0．05）2．不同剂量的GHGKHKNK八肽在体外作用24h后可以显著抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-FIO细胞的侵袭，穿膜细胞数与对照组比较具有显著性差异（P〈0．05）。3．GHGKHKNK八肽在24h时5．5×10^-4mol／L、5．5×10^-5mol／L、5．5×10^-6mol／L对小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-F10黏附抑制率与对照组相比较均有显著性差异（P〈0．05）。4．经GHGKHKNK八肽作用后，小鼠恶性黑色素瘤细胞ICAM-1、LN—R表达降低表达降低，E-cadhesion表达增强。与对照组比较明显差异P〈0．05．5．GHGKHKNK八肽对B16一F10人工肺转移的抑制作用的实验结果显示：GHGKHKNK八肽各剂量组和环磷酰胺组肺转移灶的平均数目与生理盐水组照组相比较有明显差异（P〈0．05）：GHGKHKNK八肽500ug／kg／d、50ug／kg／d剂量组与环磷酰胺组对比有显著性差异（P〈0．05）。结论：i．GHGKHKNK八肽在体外能抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞的体外克隆形成能力，能显著抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-F10细胞的侵袭。提示HGKHKNK八肽可能通过抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞的侵袭和增殖而抗肿瘤细胞的转移。2．GHGKHKNK八肽抑制小鼠小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-FIO与人工基底膜的黏附，提示GFIGKHKNK八肽可能通过抑制细胞与基底膜的黏附来抑制肿瘤细胞的转移。3．GHGKHKNK八肽能够下调细胞间黏附因子1（ICAM-1）和层黏连蛋白受体（LN—R）在细胞内的表达，提示GHGKHKNK八肽可能通过抑制细胞间黏附因子的表达而抑制肿瘤细胞的转移。4．GHGKHKNK八肽能显著抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-F10在小鼠体内的肺转移。

FATE/BJ-HCC-2基因表达促进细胞增殖及肿瘤形成

FATE/BJ-HCC-2是本实验室鉴定的一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,定位于Xq28染色体.为探讨FATE/BJ-HCC-2对细胞生物学行为的影响及裸鼠体内肿瘤形成能力的改变,分别采用脂质体转染真核表达载体及逆转录病毒感染两种方式,获得了FATE/BJ-HCC-2表达的Bel-7402单克隆细胞株及NIH-3T3细胞克隆,并通过RT-PCR和Western印迹在基因和蛋白水平鉴定了FATE/BJ-HCC-2表达情况.通过3H-TdR参入法,检测细胞的增殖能力;通过稀释铺板集落形成率测定和软琼脂集落形成实验,检测细胞的集落形成能力;通过裸鼠体内细胞注射成瘤,检测细胞成瘤性和肿瘤生长速度.结果表明,FATE/BJ-HCC-2基因表达能明显提高细胞体外增殖、克隆形成能力和成瘤性.提示其对肿瘤的发生发展起到促进作用.

精氨酸甲基转移酶5在甲硫腺苷磷酸化酶缺陷型恶性胸膜间皮瘤中的作用研究

目的探讨抑制精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)基因表达对甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)缺陷型恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞的联合杀伤作用。方法将MPM细胞分为MTAP阳性组(REN、H28、MPP89)和MTAP缺陷组(H2591、2452、H2052),以Hap-1 MTAP KO/WT为对照。采用PRMT5 siRNA、奎纳克林(0、0.5、1.0μmol/L)处理2组细胞,72 h后采用Western blot检测PRMT5蛋白表达水平及H4R3me2s甲基化蛋白水平。结晶紫染色法测定细胞克隆增殖能力。结果PRMT5 siRNA可下调MTAP阳性细胞株及MTAP缺陷细胞株PRMT5蛋白水平,引起MTAP缺陷型MPM细胞的H4R3me2s甲基化水平明显下降,而对MTAP阳性细胞的H4R3me2s甲基化水平无明显抑制。PRMT5 siRNA抑制MTAP缺陷型细胞的克隆增殖能力,而对MTAP阳性细胞克隆无明显抑制作用,差异有统计学意义(P=0.023,n=3)。奎纳克林可下调MTAP缺陷型细胞系(H2591、H2052)中PRMT5蛋白质表达水平,引起H4R3me2s甲基化水平降低及细胞克隆增殖能力下降,而对MTAP阳性细胞系(MPP89)中PRMT5和H4R3me2s均无下调作用,对细胞增殖无抑制,差异有统计学意义(P=0.018,n=3)。结论抑制PMRT5能联合杀伤MTAP缺陷型MPM,奎纳克林对部分MTAP缺陷型MPM可产生联合杀伤作用。

鼻腔未分化鳞癌的新治疗靶点:人表皮生长因子受体2/neu

鼻腔未分化鳞癌（SNUC）较少发生,但进展迅速。虽然治疗方法很多,预后仍然不佳,急需新的治疗方法。该文旨在研究针对SNUC的靶向治疗。使用人源性SNUC细胞系MDA8788-6进行全基因组单核苷酸（SNP）分析,通过蛋白免疫印迹评估蛋白水平的变化,甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞生长变化及克隆形成能力,同时以裸鼠为模型进行体内试验。结果：ERBB2基因被高度放大,细胞中的人表皮生长因子受体2（HER2）高表达,

成釉细胞瘤发病机制的最新概念

成釉细胞瘤是一个可造成局部破坏和侵袭的肿瘤,尽管手术切除范围足够大,但复发率仍较高。分子学研究提供了许多关于成釉细胞瘤发病机制的有趣发现。该文在以下方面讨论成釉细胞瘤的分子性质，包括克隆形成能力、细胞增殖、凋亡、肿瘤抑制基因、免疫组化、釉基质蛋白、破骨机制、基质金属蛋白酶以及一些信号分子。

Toll样受体激动剂可激活牙髓干细胞、牙囊干细胞的免疫调节特性

成体间充质干细胞已广泛应用于再生医学研究中。由于直接获取骨髓间充质干细胞有一定困难，人们便试图寻找其他组织来源的间充质干细胞，以替代骨髓间充质干细胞。本研究中，间充质干细胞取材于同一牙齿的牙髓和牙囊组织，并探讨这两种细胞在表型特征、分化潜能和免疫调节方面的不同。结果显示，这两种细胞都表现出相同的克隆形成能力，