多结节肝癌的克隆起源鉴别及临床意义

目的:探讨多指标多技术手段联合分析多结节肝癌细胞克隆来源的价值及临床意义.方法:选择44例多结节肝癌共116个结节肝癌组织,应用免疫组织化学SP法检测P53、AFP蛋白在各癌结节中的表达,银染PCR-SSCP技术结合基因测序检测P53exon7、Bcl-10基因在结节间的表达差异,PCR结合直接测序检测mtDNAD-Loop区的序列在各癌结节中的异同情况,分析多结节肝癌各癌结节的克隆起源是否相同.结果:44例多结节性肝癌经5项指标检测,联合判断为MO者22例,IM者22例.HBeAg、肿瘤分布、肝硬化、门静脉及镜下癌栓、主瘤的Edmondson病理分级等在MO组与IM组间存在显著性统计学差异(P<0.05或<0.01).MO组无瘤生存时间明显长于IM组的无瘤生存时间(20.7±4.5movs6.3±1.3mo,P<0.05);MO组生存时间明显长于IM组的生存时间(29.1±4.4movs10.1±1.5mo,P<0.01).IM/MO是无瘤生存时间和生存时间的独立影响因素.结论:联合检测多结节肝癌组织中P53、AFP蛋白,P53exon7、Bcl-10基因及线粒体DNAD-Loop区序列在各癌结节间的表达差异,有助于鉴别其细胞克隆来源;多中心性来源多结节肝癌疗效及预后较好.

多指标联合分析多结节肝癌克隆起源

目的探讨多指标联合分析多结节肝癌细胞克隆来源的价值。方法选择44例多结节肝癌共116个结节肝癌组织,以P53、AFP蛋白,P53exon7、bcl-10基因,线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区序列等5项指标作为鉴别细胞克隆起源异同的指标,判别多结节肝癌各癌结节的克隆起源是否相同。结果经5项指标检测,联合判断为多中心性克隆起源(MO)者22例,单中心性克隆起源(IM)者22例。结论联合检测多结节肝癌组织中P53蛋白、AFP蛋白,P53exon7、BCL-10基因及线粒体DNAD-Loop区序列在各癌结节间的表达差异,有助于鉴别其细胞克隆来源。

前列腺癌可能存在多克隆起源

目的 :探寻人类前列腺癌发生和多发的细胞克隆来源。方法 :采用病理切片上病灶显微切割、P5 3基因突变的PCR SSCP分析及DNA测序测定 3例患者前列腺癌根治切除术标本中癌灶和高分级PIN灶组织 ;同时还采用免疫组织化学方法检测了p2 1WAF1/CIP1蛋白的表达。结果 :在人前列腺癌灶和高分级PIN灶组织中均发现有p5 3基因的点突变 ,同 1例患者标本中癌灶和高分级PIN灶所含点突变均在不同位点上。含p5 3基因的点突变的癌灶和高分级PIN灶组织中均未见有p2 1WAF1/CIP1蛋白的表达。结论 :人前列腺癌发生和多发可能有多细胞克隆来源 ,其p2 1WAF1/CIP1蛋白的表达系P5

追溯致死性前列腺癌的克隆起源

以往的研究认为，原发前列腺肿瘤具有多灶和多克隆异质性，但大多数来自同一患者不同部位远处转移肿瘤共享大部分遗传变异，提示致死性转移癌细胞为单克隆起源。然而，近期作者应用伞基因组测序和分子病理检测，分析1例死于转移性前列腺癌患者的致死细胞克隆起源却有了一些不同的发现。

t(8;21) AML白血病干细胞克隆起源的研究

目的探讨t(8;21)白血病干细胞克隆起源时间.实验方法用LD-PCR或LDI-PCR联合序列分析确定t(8;21)断裂区基因组DNA序列,根据所得序列设计病人特异性引物,用PCR方法检测患者Guthrie cards AML1-ETO融合基因;用RT-PCR检测脐带血AML1-ETO融合基因,阳性标本进一步用Real-time PCR进行AML1-ETO融合基因阳性细胞定量并用FISH检测用MiniFACS分取的CD33+和CD19+细胞组分t(8;21)易位.结果10例t(8;21)/AML患者中5例Guthrie cards AML1-ETO融合基因阳性;520份脐带血1份AML1-ETO融合基因阳性,脐血中AML1-ETO(+)细胞为1/2×104,仅CD33+细胞组份有t(8;21)易位.结论部分t(8;21)/AML患者其白血病干细胞克隆起源于胎儿期.

弥漫型肝细胞癌的克隆起源研究

目的探究弥漫型肝细胞癌（D-HCC）的肿瘤克隆起源方式及其行肝移植治疗的预后。方法选取2004年8月—2012年11月天津市第一中心医院肝移植治疗的14例D-HCC患者,收集患者一般资料及术后无瘤生存资料。选取12个高频肝癌微卫星杂合性缺失（LOH）位点,通过聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）评估D-HCC的肿瘤克隆起源方式。结果 14例D-HCC患者中,有11例单中心克隆起源（IM）,3例单中心伴多中心克隆起源（IM＋MO）。术后无瘤生存时间为4.5-37.4个月,无瘤生存中位时间为8.7个月。结论 D-HCC的肿瘤克隆起源方式以IM为主,肝移植可能是较为有效的治疗手段。

分子生物学技术鉴别多结节肝癌克隆起源的研究进展

肝细胞癌(肝癌)类型不同,选择治疗的方式及预后也不同。其中,多结节肝癌按起源分为多中心起源和肝内转移,这两种类型肝癌有不同的肿瘤生物学特性,而如何确定其类型是选择治疗方式的前提。分子生物学技术可用于区分这两种类型的多结节肝癌。目前,鉴别多结节肝癌的常用分子生物学技术包括乙型肝炎病毒DNA整合方式、p53基因突变类型、甲胎蛋白基因低甲基化分析、线粒体DNA D-环区突变分析、比较基因组杂交技术、蛋白组学技术、下一代测序技术。

多发性骨髓瘤克隆起源的免疫学研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是B淋巴细胞或免疫系统恶性肿瘤。本文就骨髓瘤细胞的表型异质性,患者外周血是否存在肿瘤前体细胞以及MM克隆起源及其可能的发病途经等方面的免疫学研究进展进行了综述。

多发肺癌病灶的克隆起源及获得性体细胞基因重排

1文献来源 [1] Wang X, Wang M, Maclennan GT, et al. Evidence for common clonal origin of muhifocal lung cancers. [J]. J Natl Cancer Inst,2009,101 （8） ：560- 570.

多灶性膀胱癌克隆起源的研究进展

膀胱癌多灶性生长的发生机制还不明确。本文阐述近年来多灶性膀胱癌克隆起源的最新研究进展。

骨髓增生异常综合征病态造血细胞克隆起源的FISH研究

40％-70％的骨髓增生异常综合征（MDS）患者可以检出再现性克隆性染色体异常，其中以5q-／-5，7q-／-7，＋8，20q-和-Y等最为常见。骨髓细胞病态造血现象是MDS形态学的一个重要特征；染色体异常则是MDS恶性克隆的标志，二者均是诊断MDS的重要依据。然而，病态造血改变究竟是恶性克隆本身的表现还是正常造血细胞对恶性克隆的一种反应，目前仍有争议。为明确MDS中病态造血细胞的克隆起源问题，我们采用骨髓形态学检测结合间期荧光原位杂交技术（FISH）方法对8例伴有克隆性核型异常的MDS病例进行了研究。

多发性尿路上皮肿瘤的单克隆起源

目的 验证泌尿系上皮移行细胞癌单克隆起源学说。 方法 应用免疫组化染色方法 ,检测 10例 2 2块多发性尿路上皮移行细胞癌组织标本p5 3蛋白的表达 ,以此判断多发肿瘤灶基因的突变 ,比较多发肿瘤灶的基因型。 结果 同一患者不同部位肿瘤标本 p5 3染色阳性细胞的比例和染色强度完全一致 ,因此 ,肿瘤多克隆起源的可能性为 0 .5 1× 0 .5 1× 0 .5 2 × 0 .5 1× 0 .5 2 × 0 .5 1×0 .5 1× 0 .5 1× 0 .5 1× 0 .5 1=0 .5 12 =0 .0 0 0 12 2 (<10 -3 ) ,即同一患者多个肿瘤灶的基因型相同。

有三种免疫球蛋白分泌的多发性骨髓瘤细胞的克隆起源

目的 用 1例有 3种免疫球蛋白分泌的多发性骨髓瘤 (MM)患者免疫球蛋白重链 (IgH)基因标志探讨MM究竟是由几个克隆组成。方法 患者血清蛋白电泳发现 3个单克隆免疫球蛋白峰 ;RT PCR采用IgHV 6个家族 (VH1～VH6)正向引物 ,通用J区反向引物 ,IgH恒区Cμ、Cδ、Cγ、Cα和Cε 5种特异性反向引物。采用不同的引物组合进行PCR。获得的免疫球蛋白重排基因经克隆后 ,进行测序分析。结果 患者用VH3家族引物和通用J区引物获得一条边缘清晰的浓染条带 ,表明患者骨髓瘤细胞是由IgVH3片段组成可变区。用IgVH3和恒区Cμ、Cγ、Cα特异性引物也可获得相应的PCR产物条带 ,但是不能用引物VH1、VH2、VH4、VH5和J以及VH3和Cδ、Cε获得 ,表明患者有IgM、IgG、IgA基因重排 ,因此外周血血清有相应免疫球蛋白产物。克隆用Cμ、Cγ、Cα引物获得的PCR产物并扩增 ,然后测序比较 ,3种产物除恒区片段不同外 ,其重链基因的VH J重排序列完全一致。表明该MM患者血清出现的 3种免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的可变区是完全一致的。结论 尽管从蛋白角度分析该MM细胞似乎是寡克隆性的 ,但是基因序列分析的结果表明其恶性克隆仍然是单克隆性起源。

多结节肝细胞癌克隆起源与肝移植后肿瘤复发的相关性研究

【摘要】目的探讨多结节肝细胞癌的肿瘤克隆起源方式与肝移植术后肝癌复发的相关性。方法选取2005年8月至2010年8月经肝移植治疗的符合美国加州大学旧金山分校（UCSF）标准的多结节型肝细胞癌患者60例，采用纤维切割技术，获取肝癌组织后提取基因组DNA。SSCP-PCR法检测12个高频肝细胞癌微卫星杂合性缺失（LOH）的发生状态，判定肿瘤克隆起源方式为单中心肝内转移型（intrahepatic metastasis，IM型）、多中心发生型（multicentric occurrence，MO型）及复合型（IM＋MO型）。分析各型克隆起源方式与患者无瘤存活率、肿瘤病理学特征及血清AFP水平之间的相关性。结果60例多结节肝细胞癌患者中，45例有2个肿瘤结节，占多结节肝细胞癌患者的75％（45／60），15例有3个肿瘤结节者，占25％（／60）；剔除2例不能判定肿瘤克隆起源分型病例，共58例纳人分析，其中IM型组、MO型组和IM＋MO型组，分别占34．48oA（20／58）、56．90％（33／58）和8．62％（5／58）；三组患者的3年累积无瘤存活率分别为50．00％、78．79％和40％，微血管侵犯（Micro Vascular Invasion，MVI）发生率为100％、18．18％和100％，肿瘤低分化率（Ⅲ级～Ⅳ级）为80％、51．52％和80％，血清AFP浓度为231．25μg／L（2．78~9736．27μ／L）、24．59μg／L（1．16~2674．50μg／L）和122．58μg／L（16．20～1608．03μg／L）。结论MO型肝细胞癌患者肝移植术后3年无瘤存活率明显高于IM型和IM＋MO型，考虑与其镜下癌栓发生率低，病理分化程度高、术前AFP低等密切相关。肿瘤克隆起源方式可能作为多结节HCC的病期评判要素及预测肝移植术后肿瘤复发风险的重要参考指标。

通过线粒体DNA D-Loop区序列分析鉴别多结节性肝细胞性肝癌细胞克隆起源

目的探讨通过线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区序列分析鉴别多结节性肝细胞性肝癌(肝癌)细胞克隆起源的可行性。方法实验组为多结节肝癌组,标本来自广西医科大学第一附属医院肝胆外科2004年4月至2007年8月期间连续收治的42例共112个结节性HCC行根治性手术切除的肿瘤组织。对照组来自同期单结节HCC手术切除组织共20例40个样本,分2个亚组,对照组Ⅰ为16例单结节肝癌的2块不相邻的癌组织;对照组Ⅱ为4例伴有肉眼门静脉癌栓的肝癌患者,取癌组织和癌栓各1块;正常对照组来自同期肝移植供肝或肝外伤切除的肝组织共5例。用PCR结合直接测序的方法检测各样本组织mtDNA D-Loop区的序列,并分析各例癌结节中序列异同情况。结果在42例实验组标本中,共有131个位点发生碱基变异,其中15个位点为点突变,9个位点发生插入,16个位点发生缺失,共出现98个多态性变化,位点总变异率为11.7%(131/1122,1122为mtDNAD-Loop区全长);实验组中有20例各结节的mtDNA D-Loop区序列存在差异,可能为多中心(MO)起源,22例各结节的mtDNA D-Loop区序列完全相同,可能为单中心(即肝内转移,I M)起源。对照组20例中各样本的mtDNAD-Loop区序列完全相同,为相同细胞克隆起源。正常对照组中共有14个位点发生碱基变异,均为多态性,其中NT479A>G为新的多态性。结论 mtDNA D-Loop区序列具有较高的变异率,应用PCR结合直接测序的方法检测该区序列并比较各个癌结节的DNA序列异同,可以快速、简单、有效地为区分I M和MO起源提供参考。

肾透明细胞癌多中心病灶单克隆、多克隆起源并存的研究论证

目的:探讨多中心灶肾透明细胞癌各癌灶间的克隆起源关系。方法:提取20例多中心灶性肾透明细胞癌患者的共计42枚癌灶及对应正常组织的DNA后,10个微卫星多态性标志物D3s1038、D3s1234、D3s1300、D3s1317、D3s1540、D3s1597、D7s522、D8s261、D9s171、TP53作为引物对提取的DNA进行PCR扩增。用Labworks 3.0凝胶分析软件对PCR产物进行分析。在某一位点的信息性病例中若肿瘤组织的某一条等位基因条带消失或相对密度减少>50%,则记录为杂合性缺失(LOH)。观察各癌灶DNA的LOH类型。多中心病灶与原发灶显示相同的等位基因图谱示为共同克隆来源,否则为独立克隆起源。结果:在20例多中心灶性肾透明细胞癌中,17例(85%)在上述10位点中的至少1个位点检测到LOH,其中14例(14/17)检测到原发灶与相应的多中心灶有相同的LOH类型。在该14例中,有3例仅多中心癌灶在某一位点检测到LOH,另外有2例仅原发癌灶在某一位点检测到LOH。有3例(3/17)检测到原发灶与相应并发癌灶有不相同的LOH类型。结论:实验研究结果表明似乎大多数多中心灶性肾透明细胞癌为同一克隆起源,即由原发癌灶肾内转移而来。但是我们也发现了多克隆起源的证据。结合以往国内外相关研究,我们认为多中心灶性肾透明细胞癌同时存在单克隆起源和多克隆起源两种发生机制。

心脏黏液瘤克隆起源的研究

心脏肿瘤的发生率在0．001％-0．030％，其中以黏液瘤居多，文献报道约占心脏肿瘤的50％。我们通过检测人类雄激素受体基因（HUMARA）多态性，对心脏黏液瘤以及正常心脏组织进行x染色体失活类型分析，从而判断心脏黏液瘤的克隆起源。

多灶性复发性表浅性膀胱移行细胞癌的克隆起源

目的探究多灶性、复发性、表浅性膀胱移行细胞癌的克隆起源。方法收集山西医科大学第一医院2000年1月至2004年12月经手术切除或膀胱镜活检并经病理证实的20例患者的多灶性膀胱癌、原发癌及复发癌,病理分级G1或G2的以10%甲醛液固定后石蜡包埋的组织标本66块。采用免疫组织化学染色SP法检测p16,Rb,cyclin D1基因表达。采用二项式分布法对结果进行统计分析。结果16例患者多发、原发和复发膀胱癌p16,Rb,cyclin D1表达完全一致;4例表达不一致。二项式分布计算分析认为,此16例膀胱移行细胞癌均为单克隆起源,其余4例为多克隆起源。结论多灶性、复发性、表浅性膀胱癌以单克隆起源为主,也可为多克隆起源。

多灶性甲状腺乳头状癌克隆起源分析

目的探讨多灶性甲状腺乳头状癌(MPTC)的生物学特性及起源。方法回顾性分析2007年1月至2013年7月间美国匹兹堡大学医学中心收治的1510例甲状腺乳头状癌病人的临床资料,采用7基因面板测序对甲状腺癌样本进行分子学检测,比较突变相同与否的MPTC病人的临床和病理学特征。结果 776(51.4%)例为MPTC病人,且其与单灶性甲状腺乳头状癌(SPTC)病人相比,具有更高的恶性程度。MPTC病人中检测到突变相同病人(SAME)78例(41%),突变不同病人(DIFF)113例(59%)。SAME组病人中央区淋巴结转移发生率和中央区淋巴结转移百分数均显著高于DIFF组(P<0.05)。结论 41%的MPTC病人具有相同的克隆起源,且其可能具有更高的恶性程度,强烈推荐行预防性中央区淋巴结清扫。

多结节肝癌的克隆起源鉴别及治疗进展

肝癌作为常见的消化系统恶行肿瘤,严重威胁着我国人民的健康安全,且多数肝癌患者就诊时已出现2个或2个以上肿瘤结节。根据克隆起源的不同,可分为肝内转移和多中心起源,两者具有不同的生物学特征,其治疗及预后亦有差异。通过影像、病理和分子生物学等多种方式可鉴别其克隆起源。多结节肝癌治疗方式包括手术切除、化疗、免疫、靶向或联合治疗。