克雷伯氏菌产β-半乳糖苷酶的异源表达及低聚半乳糖合成工艺优化

β-半乳糖苷酶是低聚半乳糖制备过程中的关键酶。本文克隆生菌株克雷伯氏菌B5582Y的β-半乳糖苷酶基因lacZ,并成功构建大肠杆菌重组质粒pET28a-24。经IPTG诱导表达其酶活力比野生菌株提升近10倍。通过单因素及响应面法考察重组酶对低聚半乳糖合成的影响,得到最佳工艺条件为:加酶量130 U/mL,温度44℃,底物添加量90%,pH 7.0~7.5,反应时间10 h,低聚半乳糖的产率达44%。重组酶表现出较好的转糖苷活性,在低聚半乳糖合成领域具有较大的应用潜力。

内科、外科、儿科、重症监护病房和门诊患者分离的肺炎克雷伯氏菌耐药性分析

目的 通过对内科、外科、儿科、重症监护病房 (ICU)和门诊患者分离的肺炎克雷伯氏菌耐药性分析 ,探讨不同来源菌株间耐药率的差别。方法 药物敏感性试验采用纸片扩散法 (K- B法 ) ,用 WHONET5软件分析试验结果 ;耐药率的显著性比较用 χ2检验。结果 2 0 0 1年共分离肺炎克雷伯氏菌 2 4 0 7株。其中从内科、外科、儿科、重症监护病房和门诊患者分离的肺炎克雷伯氏菌为 1986株 ,占全部肺炎克雷伯氏菌的82 .5 %。临床分离的肺炎克雷伯氏菌的标本主要来自痰和尿 ,从门诊患者分离的肺炎克雷伯氏菌 ,有 11.1%菌株来自生殖器拭子标本。各科别产超广谱 β-内酰胺酶肺炎克雷伯氏菌检出率分别为 10 .3% (111/ 10 74 )、2 4 .2 % (10 3/ 4 2 6 )、30 .4 % (34/ 112 )、34.8% (4 9/ 14 1)和 6 .0 % (14 / 2 33) ,外科、儿科、ICU的检出率明显高于门诊和内科 (P<0 .0 0 5 )。门诊患者 (代表社区获得性感染 )分离的肺炎克雷伯氏菌对头孢唑林、哌拉西林、阿莫西林 /克拉维酸、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、氨曲南、磺胺甲口恶唑 /甲氧苄啶和四环素的耐药率明显低于外科、儿科和 ICU患者分离的菌株 ,并有统计学意义 (P<0 .0 0 5 ) ,对庆大霉素、阿米卡星、氨曲南的耐药率显著低于内科分离菌株 (P<0 .0

黄曲霉毒素B_1降解菌的筛选及鉴定

目的:在易被黄曲霉毒素B_1(AFB_1)污染的不同环境中,筛选能够降解AFB_1的菌株。方法:以香豆素为唯一碳源和能源进行AFB_1降解菌株的初筛,得到生长良好的菌株,分别与AFB_1标品(2.5μg/m L)共同作用进行复筛。对降解率最高的菌株通过形态以及16S r DNA序列分析,进行初步鉴定;并对胞外粗提液、菌细胞、胞内裂解物降解AFB_1进行研究。结果:从腐烂朽木中筛选出的菌株XY1降解AFB_1能力达71.91%。根据XY1菌株形态、16S r DNA序列同源性分析,初步确定菌株XY1为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)。胞外粗提液降解率为70.23%,菌细胞悬液降解率为8.26%,胞内裂解物的降解率为3.18%,表明菌株XY1的降解活性与胞外粗提液有关。结论:筛选到能高效降解AFB_1的克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)XY1,XY1降解毒素的活性物质主要存在于胞外粗提液。

产酸性尿酶Y2002菌株的分离与鉴定

从嘉兴豆制品厂排水沟污泥中分离到 1株产酸性脲酶的菌株 ,命名为 Y2 0 0 2 ,该菌株细胞杆形 ,大小为 0 .41μm×1 .70 μm,无鞭毛、无芽孢、G-。生长最适 p H6.8～ 7.2 ,范围为 4.0～ 8.5 ;最适温度为 3 7℃ ,可生长范围为 1 5～ 42℃ ,在p H4.0～ 5 .5发酵液中产酶稳定 ,酶活可达 0 .2 68U。根据其生理生化特性 ,鉴定为肠杆菌科克雷伯氏菌属肺炎克雷伯氏菌。

海洋异养硝化-好氧反硝化菌y6同步脱氮除碳特性

从胶州湾海底沉积物中分离筛选出一株异养硝化-好氧反硝化菌株y6,通过菌株y6的形态以及生理生化特性和16S rRNA基因序列的分析,鉴定该菌株属于克雷伯氐菌属(Klebsiella sp.).在不同的环境条件下,测定菌株y6的生长情况和脱氮能力,研究其同步脱氮除碳特性.实验结果表明,菌株y6的最佳碳源为柠檬酸三钠,最适宜pH值为7.0,最适合的C/N为17.菌株y6在以NH_4C1、KNO_3和NaNO_2为唯一氮源的反应系统中均有较好的脱氮效果,去除率分别为99.67%、100%、99.20%.菌株y6在脱氮的同时能高效地去除有机物,COD的去除率分别为82.17%、95.75%和97.83%.菌株y6在硝化过程中没有亚硝态氮和硝态氮的积累.在按不同比例混合氮源的反应系统内,首先进行的是硝态氮的好氧反硝化,随后进行的是氨氮、亚硝态氮和COD的去除.在有亚硝态氮存在时氨氮的去除率略低,亚硝态氮会影响y6的异养硝化过程,异养硝化对好氧反硝化过程没有影响.