人αA干扰素在克鲁氏乳酸酵母中的表达和分泌

pE1是由酵母天然质粒pKD1衍生出来的重组穿梭质粒,在克鲁氏乳酸酵母中具有高拷贝,高稳定性等特点。把人αA干扰素分泌表达单元克隆到pE1载体中,得到分泌型表达质粒pE-IFN1。pE-IFN1在克鲁氏乳酸酵母中相当稳定,在非选择性培养基中生长50世代后,大多数酵母细胞仍带有质粒。结果表明,分泌表达单元中的酿酒酵母α因子的分泌信号肽能被克鲁氏乳酸酵母的蛋白质分泌系统所识别,人αA干扰素被分泌到细胞外。在摇瓶培养条件下每升发酵液中含有1—2毫克αA干扰素。

乳酸克鲁维斯酵母乳糖酶基因的克隆及原核表达

从乳酸克鲁维斯酵母(Kluyveromyceslactis)菌株k538中克隆获得乳糖酶基因klac,并将其插入到表达载体pET-30a(+)上构建重组表达质粒pETlac4。将pETlac4电击转化到大肠杆菌BL21中,分别研究了阳性转化子在28℃,37℃下经IPTG诱导3h后的蛋白表达情况。表达产物的SDS-PAGE分析和酶活性测定表明,klac基因在大肠杆菌中获得活性表达,其中低温条件28℃下的表达水平明显高于37℃,28℃诱导的细胞经超声波破碎所测酶活力为0.475U/mL,37℃仅为0.134U/mL。