免标准曲线定量PCR技术的探讨

目的实际应用发现,传统的定量PCR方法误差较大不能满足科学研究以及临床精确定量的需要,本文拟探讨如何选择分析使用的技术资料以降低分析误差以及分析判断误差的主要来源。方法使用PCR动力学模型模拟实时定量PCR仪器跟踪测定资料,使用不同扩增时期的荧光数值资料计算起始模板数、分析误差,并根据仪器的荧光信号测定误差随机对资料加入误差后,分析结果的误差与研究误差的分布。结果使用指数扩增期内后期的5个资料点分析,可以获得当前仪器误差水平下,相对误差最小的结果。使用的资料点一旦包含有一个线性扩增期资料,结果的误差即显著增加。该文亦给出了一般性最后一次指数扩增循环的判定方法。结论免标准曲线的定量PCR方法将成为今后定量PCR的主要技术手段。