凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究

目的:鉴定凡纳滨对虾分子质量40 k D过敏原,并分析其在有壳水产食物中的免疫交叉反应。方法:运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾40 k D过敏原组分;使用软件BLAST、Clustal X2、MEGA 5.0分析该蛋白氨基酸序列的种间同源性;制备抗凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的多克隆抗体,并与17种常见有壳水生动物粗提液进行Western blotting,以分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:凡纳滨对虾40 k D过敏原为精氨酸激酶(arginine kinase,AK);其氨基酸序列同源性分析显示AK在虾类(96%~100%)、蟹类(91%~93%)、贝类(49%~52%)、蟑螂(83%)中具有很高的同源性;Western blotting结果显示抗AK多抗与17种不同虾类、蟹类、贝类的AK均能发生反应。结论:精氨酸激酶在甲壳类动物、软体动物、甚至昆虫中具有高度保守性,且能引起强免疫交叉反应,是有壳水生动物中的一种泛过敏原。

细粒棘球绦虫EgA31重组抗原与其它寄生蠕虫的免疫交叉反应

为了研究细粒棘球绦虫EgA31重组蛋白的抗原性 ,作者将细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原的cDNA克隆EgA31 3′端 5 0 0bp碱基片断亚克隆入pGEX 5X表达质粒 ,构建EgA31 GST重组蛋白原核表达系统 ,所制备的重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清 ;免疫试验表明该抗血清可识别EgA31 GST重组蛋白及细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原 ,也可与多房棘球蚴、犬复孔绦虫、犬钩虫、日本血吸虫的成虫虫体总蛋白 6 6kDa抗原分子发生交叉反应 。

凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应

目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%～100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。

结核分枝杆菌抗原分析及免疫交叉反应研究

目的 :筛选和鉴定结核分枝杆菌特异性和保护性抗原 ,研究结核杆菌的免疫反应特点 ,以探索结核病诊断和治疗的新途径。方法 :采用超声破碎和滤膜抽滤的方法分别得到菌体蛋白和滤液蛋白 ,通过Westernblot试验用结核杆菌的单克隆抗体及结核病人血清来检测蛋白样品 ,把发生阳性反应的蛋白在BECKMANLF32 0 0 多肽氨基酸序列测定仪上进行N末端序列分析 ,并用结核杆菌的单抗对自身抗原组蛋白进行了检测。结果 :结核杆菌的 31kD和 30kD蛋白与结核杆菌的单抗及病人血清反应均呈阳性 ,但与正常小鼠血清和健康人血清反应呈阴性。 31kD和 30kD蛋白的N末端序列分别为 :AlaGluValAspTrpLeuValPheAlaVal和PheSerArgProGlyLeuProValGluTyr。结核分枝杆菌的单抗与自身抗原组蛋白能发生免疫交叉反应。结论 :结核杆菌的 31kD和 30kD蛋白是免疫保护性抗原 ,对免疫交叉反应分子基础的进一步研究必将增加对结核免疫机理的了解。

西尼罗病毒与乙脑病毒免疫交叉反应的实验研究

为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况。结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6088和4305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势。无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性。在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱。WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实。

弧菌外膜蛋白OmpK免疫交叉反应性的分析

本研究旨在研究弧菌外膜蛋白（oute rmembrane protein，OMP）OmpK免疫交叉反应的特征，探讨OmpK免疫交叉反应性的分子机制．利用克隆得到5株弧菌的ompK基因，通过比对10种（22株）弧菌的OmpK基因序列发现，ompK基因在弧菌中高度保守，其核苷酸序列的相似性达77％～93％．对副溶血弧菌（V．parahaemolyticus）VPL4—90的ompK基因进行原核表达，利用纯化的OmpK重组蛋白，制备了兔抗OmpK血清．通过westernblot分析发现，OmpK抗血清能够与16种不同的弧菌发生交叉识别反应，其中V．proteolyticus、y．furnissii、V．damsela和V．metschnikovii这4种弧菌OmpK的免疫交叉反应为首次报道，并且证实弧菌OmpK的免疫交叉反应具有种属特异性．通过抗原表位预测和比对发现，弧菌的OmpK具有8个保守的抗原表位，包括7个T细胞表位以及1个T细胞和B细胞的共同表位．流式细胞术分析显示，OmpK抗体能够识别这些相同或相似的抗原表位，提示这些抗原表位可能位于细菌表面．结果表明，这些保守的且位于细胞表面的OmpK抗原表位可能是弧菌OmpK具有免疫交叉反应性的分子基础．

水蛭热刺激分泌物与日本血吸虫成虫可溶性物质的免疫交叉反应性分析

目的分析水蛭热刺激分泌物（Wp—hs）与日本血吸虫成虫可溶性物质（Sj-Ds）间的共同组分，探讨两者之间免疫交叉反应的物质基础。方法通过升高温度刺激水蛭虫体产生Wp—hs，同时收集室温放置的水蛭分泌物作为对照，用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳分析Wphs与Sj—Ds之间的共同蛋白组分；将这些共同蛋白组分分别与日本血吸虫病患者混合血清、兔抗Wp—hs免疫血清、健康人混合血清进行斑点酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验，找出具有免疫交叉反应活性的共同蛋白组分。结果Wp—hs与Sj-Ds之间存在着分子量（12．6～85．4kDa）相近的蛋白条带。Wphs抗原在21．6～95．4kDa分子量范围内与日本l皿吸虫病患者混合血清反应尤为明显，且不与正常人血清反应；Sj-Ds（40．1～89．0kDa）与兔抗Wp—hs免疫血清能较好的结合。结论Wphs与Sj—Ds之间至少存在3种具有免疫活性的共同蛋白组分。

应用免疫印渍法检测猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性

为了研究猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性，应用免疫印渍术对其抗原组分进行了检测．实验结果表明，鱼卵透明带抗原与已知具有精子受体活性的猪ＺＰ３抗原，甚至猪全ＺＰ抗原均没有交叉反应．提示鱼卵透明带不含有与猪和人等哺乳类的透明带免疫学相类似的抗原决定簇．

蚯蚓与日本血吸虫免疫交叉反应分子机制的初步探讨

目的初步探讨蚯蚓与日本血吸虫免疫交叉反应的分子机制,为研究和解决临床常见寄生蠕虫病相互间免疫交叉反应现象提供理论和实验依据.方法采用噬菌体展示技术（PDT）、饱和硫酸铵溶液梯度盐析法、SDS-PAGE和Western blot,对经12肽库筛选所获蚯蚓与日本血吸虫共同模拟表位以及蚯蚓的盐析沉淀蛋白、蚓激酶和热刺激分泌物的分子成分及免疫活性进行研究.结果获得了3个蚯蚓与日本血吸虫的共同模拟表位,分别包含NSIL、LAET和HT-HI氨基酸序列.蚯蚓与日本血吸虫的共同模拟表位以及蚯蚓的盐析沉淀蛋白、蚓激酶及热刺激分泌物均存在分子量为28.3～97.8 kDa的蛋白带,其中能被日本血吸虫病患者血清识别的反应带对应分子量在61.2～95.1 kDa.结论蚯蚓与日本血吸虫间存在分子量为61.2～95.1 kDa的共同分子成分,该成分中可能部分属于酶类,氨基酸序列可能包含NSIL、LAET和HT-HI片段,该类物质是蚯蚓与日本血吸虫免疫交叉反应的重要分子基础,由此推测,这也许是蠕虫病相互间免疫交叉反应的重要分子基础.

免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应的实验研究

目的:研究免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应。方法:采用水痘病毒、巨细胞病毒、Ⅰ与Ⅱ单纯疱疹病毒、狂犬病毒、破伤风类毒素IgGELISA试剂盒及乙肝病毒表面抗原RIA试剂盒分别检测水痘、巨细胞、狂犬、乙肝、破伤风5种特免球蛋白及肌注、静注免疫球蛋白中所含靶抗体效价。结果:由疫苗免疫献血员制备的狂犬、破伤风与乙肝人免疫球蛋白有较高的特异性抗体效价,由筛选高效价血浆制备的巨细胞病毒人免疫球蛋白与其它免疫球蛋白比较,其特异性抗体效价差距较小,人群中也普遍存在水痘病毒与单纯疱疹Ⅰ型病毒感染,其强度较巨细胞病毒弱、较单纯疱疹Ⅱ型病毒强。结论:免疫球蛋白受试品均能检测到7种抗原的靶抗体,其抗体效价水平与主动、被动免疫有关,水痘疫苗能诱导出高效价的抗巨细胞病毒交叉反应抗体,肌注与静注IgG之间存在值得注意的抗体效价差别。

水痘人免疫球蛋白与疱疹相关病毒免疫交叉反应的试验

由单纯疱疹病毒（HSV）引起的单纯疱疹病毒性角膜炎（HSK）的发病率和致盲率居感染性角膜病的首位，常规抗病毒药物治疗HSK的效果较差，受血清滴眼治疗HSK的启发，临床上使用抗HSV人免疫球蛋白治疗HSK的设想有必要进行试验。但目前市场上没有HSV免疫球蛋白制品。

鲤鱼小清蛋白多克隆抗体的制备及免疫交叉反应的研究

小清蛋白是鱼类的主要过敏原,对小清蛋白的抗原性研究将有助于进一步深入理解淡水鱼过敏原在致敏过程中的免疫学意义。以鲤鱼为原材料,首先纯化出鲤鱼小清蛋白,再制备兔抗鲤鱼小清蛋白多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗体效价和抑制性ELISA法测定其特异性,然后采用免疫印迹法及抑制性ELISA法研究鲤鱼与青鱼、草鱼、鲢鱼之间的免疫交叉反应。结果表明,实验兔对鲤鱼类小清蛋白发生了高强度的免疫应答,应答多克隆抗体效价可高达720000,并且4种鱼类小清蛋白在12ku处发生了强烈的免疫交叉反应。

中华硬蜱和二棘血蜱的交叉免疫反应

本文首次比较了经中华硬蜱(Ixodes sinensis)叮咬三次后再经二棘血蜱(Haemaphysalisbispinosa)叮咬的家兔与仅经二棘血蜱叮咬的家兔的交叉免疫抗性。二棘血蜱叮咬被中华硬蜱致敏的家兔时,吸血增重为:143.12±32.67mg,但二棘血蜱在正常家兔体上寄生,初次吸血增重为:181.30±44.35mg,两者之间有显著性差异(P<0.01)。中华硬蜱和二棘血蜱唾液腺提取物(SGE)经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),显示两者分别有24条和22条电泳带,中华硬蜱主带有6条,分子量分别为142、105、94、66/65、64和56kD,而二棘血蜱主带有5条,分子量分别为:215、114、105、66/65和58kD,经中华硬蜱叮咬致敏的家兔血清和经二棘血蜱叮咬致敏的家兔血清作免疫印渍,均显示出105kD这一电泳带。该实验表明中华硬蜱和二棘血蜱叮咬家兔两者之间存在着交叉免疫反应,提示105kD蛋白质抗原可能是两者的共同抗原。

结核分枝杆菌单克隆抗体与自身抗原组蛋自的免疫交叉反应研究

WesternBlot实验证实了结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）H37Ra的单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫交叉反应．利用计算机软件对交叉反应的分子生物学基础进行了分析，发现结核分枝杆菌H37Ra的蛋白与组蛋白H1，H2A，H2B，H3，H4各有一个包含3个或4个氨基酸的序列同源区域．

重组早孕因子与天然早孕因子的免疫交叉反应

目的:探讨细胞表达的重组早孕因子(CHO-EPF)、大肠杆菌表达的重组早孕因子(BL21-EPF)和天然早孕因子(Native Early Pregnancy Factor,nEPF)之间的免疫交叉反应,寻找制备EPF抗体比较理想的免疫原。方法:采用CHO-EPF、nEPF作为免疫原分别免疫BALB/c小鼠,制备CHO-EPF多抗和nEPF多抗;结合本实验室储备的BL21-EPF鼠单克隆抗体,运用SDS-PAGE、Western blotting及ELISA等方法对nEPF、CHO-EPF、BL21-EPF之间的免疫交叉反应进行检测。结果:三种来源的EPF诱导抗体的效价比较无显著性差异。原核表达BL21-EPF与nEPF诱导的抗体中BL21-EPF单抗能识别nEPF中26 ku和52 ku组分,且抗nEPF多抗也能与BL21-EPF中10 ku组分反应;真核表达CHO-EPF与nEPF诱导的抗体中CHO-EPF多抗能识别nEPF中10 ku和26 ku组分,而nEPF抗体不能与CHO-EPF反应;原核表达BL21-EPF与真核表达CHO-EPF诱导的抗体中CHO-EPF多抗能识别BL21-EPF中10 ku片段,而BL21-EPF单抗不能与CHO-EPF反应。结论:真核源性CHO-EPF、原核源性BL21-EPF、人源性nEPF之间存在一定的交叉反应,在抗体制备过程中用rEPF替代nEPF作为免疫原是可行的。

二棘血蜱叮咬中华硬蜱纯化抗原免疫接种宿主后的交叉免疫反应

选用中华硬蜱105kD柱层析纯化抗原对新西兰兔进行免疫接种,再用二棘血蜱进行叮咬,并与单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组进行对比,以探讨不同种属硬蜱之间的交叉免疫抗性。结果显示:单纯二棘血蜱叮咬组吸血量为181 3±44 3mg,而二棘血蜱叮咬由中华硬蜱105kD纯化抗原免疫接种组和佐剂对照组新西兰兔后其吸血量分别为102 1±25 3mg和168 5±40 9mg,纯化抗原免疫接种组较单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组吸血量分别下降43 7%和39 4%(P<0 01)。同时,纯化抗原免疫接种组也较单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组产卵量有显著下降。该研究结果表明中华硬蜱和二棘血蜱之间存在着交叉免疫反应。

钩端螺旋体外膜蛋白Loa22免疫血清与不同血清型钩端螺旋体的交叉免疫反应

目的探讨钩端螺旋体(钩体)外膜蛋白Loa22免疫血清与不同血清型钩体间的交叉免疫反应作用,为筛选钩体候选疫苗分子提供依据。方法制备钩体重组Loa22蛋白、LipL32蛋白豚鼠免疫血清,以LipL32免疫血清为阳性对照,未免疫豚鼠为阴性对照,ELISA测定与我国常见的各血清型钩体株的交叉反应的Loa22蛋白免疫血清效价。结果与钩体犬群犬型56603株、致热群致热型56605株、澳洲群澳洲型56607株、波摩那群波摩那型56608株、流感伤寒群临海型56609株、七日群七日热型56610株及明尼群明尼型56655株反应的钩体Loa22蛋白免疫血清效价分别为1∶81 920、1∶20 480、1∶40 960、1∶40 960、1∶40 960、1∶10 240和1∶10 240。结论Loa22蛋白免疫血清与不同血清型钩体有良好的交叉免疫反应性。