乳制品中三聚氰胺的免疫亲和凝胶柱检测方法

为建立用于检测乳制品中三聚氰胺的免疫亲和凝胶柱检测方法,本研究采用活化酯法制备三聚氰胺酶标抗原,将三聚氰胺抗体、HRP抗体分别与溴化氰活化的琼脂糖凝胶偶联制备相应的抗体胶作为检测层和质控层,方法检测限为200μg/L。选取牛奶、奶粉、发酵乳等乳制品进行检测,测得所检样品中三聚氰胺的检测限为1 mg/kg。该方法具有良好的特异性,除与环丙氨嗪存在一定的交叉反应外,与其他3种结构类似物和6种常用兽药没有交叉反应。该检测方法操作简便,结果判断容易,整个检测过程约15 min,可用作三聚氰胺现场快速检测的有效手段。

量子点荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱检测番茄酱中罗丹明B的研究

目的:本研究根据抗原-抗体特异性识别反应和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的原理,构建一种基于量子点(Quantum dots,QDs)的新型荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱检测番茄酱中罗丹明B(Rhodamine B,RB)残留。方法:通过罗丹明B的单克隆抗体与溴化氢活化琼脂糖凝胶-4B偶联制备分析物抗体胶,设计单检测层的凝胶检测柱。基于抗原抗体的特异性结合反应,并利用罗丹明B和量子点之间的静电引力作用,构建一种新型的荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱。通过优化抗体添加量、量子点稀释倍数、孵育时间以及上样量等参数,最终实现番茄酱样品中罗丹明B的快速灵敏检测。结果:当1.0 g溴化氢活化的琼脂糖凝胶添加2.0 mg罗丹明B单克隆抗体,量子点溶液稀释3000倍,孵育时间控制在50 s,罗丹明B上样量为3.0 mL,该荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱针对罗丹明B的方法检测限(limit of detection,LOD)能够达到最小值1.0μg/L。样品分析结果表明,该方法针对番茄酱样品中罗丹明B的检测限为5.0μg/kg,并且与HPLC方法测定的结果表现出很好的一致性。结论:该方法操作简便,灵敏度高,检测时间短,结果易于判断,可以满足番茄酱中罗丹明B的现场快速检测的要求。

食品中链霉素的可视化免疫亲和凝胶柱快速检测

基于可视化免疫亲和凝胶柱(IATC)方法,建立了一种快捷、准确的检测牛奶和肉类中链霉素残留的方法.整个检测过程在固相萃取(SPE)柱中进行,柱中包含一个结合链霉素多克隆抗体的检测层和一个结合辣根过氧化物酶(HRP)抗体的质控层.将样品处理液与酶标抗原预混合后加入到凝胶柱中,根据凝胶柱中检测层颜色的变化快速筛查牛奶和肉类中链霉素的残留.整个检测过程仅需10 min完成,检出限为10μg/kg.可视化IATC法对牛奶中链霉素的检出限为40μg/kg,对牛肉和猪肉中链霉素的检出限均为160μg/kg.取牛奶、牛肉、猪肉共12件空白样品制成盲样用于检测,其结果与高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)一致.

量子点标记免疫亲和凝胶柱快速检测动物组织中恩诺沙星

目的:建立一种检测动物组织中残留的兽药恩诺沙星(ENR)的量子点标记免疫亲和凝胶柱快速检测新方法。方法:将恩诺沙星特异性抗体偶联到溴化氢活化的琼脂糖凝胶上,制备抗体胶,将抗体胶装入标准的1mL SPE固相萃取柱制成恩诺沙星免疫亲和凝胶检测柱。采用混合酸酐法制备恩诺沙星包被抗原(ENR-OVA),采用活化酯法将ENR-OVA偶联到水溶性量子点(QDs)上制备荧光信号探针QDs-OVA-ENR。将待测样品和荧光信号探针QDs-OVA-ENR分别加入检测柱中,基于抗原抗体的竞争结合反应,样品中的恩诺沙星和荧光信号探针QDs-OVA-ENR竞争结合检测柱中抗体。通过目测检测柱体的荧光强弱,定性半定量检测恩诺沙星的含量。结果:该量子点标记恩诺沙星免疫亲和凝胶检测柱的检测限(LOD)为2μg/L,对食源性动物组织样品的检测限为20μg/kg。检测过程不超过5 min。结论:该方法操作简便,灵敏度高,检测时间短,结果易于判断,可满足食源性动物组织中恩诺沙星残留的现场快速检测要求。

亲和凝胶分离纯化人α1-抗胰蛋白酶的研究

目的探索通过免疫亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化人α1-抗胰蛋白酶浓缩物的方法。方法 24℃下,将Cohn氏法组份Ⅳ用Tris缓冲液抽提0.5 h后,离心4 750 g×15 min,上清液加入亲水型气相二氧化硅脱脂后,离心6 000 g×15 min,再用1.2μm的滤膜过滤;通过GE公司新型的Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和凝胶层析柱,对α1-抗胰蛋白酶进行纯化。用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;用SDS-PAGE鉴定α1-抗胰蛋白酶的纯度,并用Western Blot和串联质谱分析鉴定纯化的蛋白;通过发色底物法测定α1-抗胰蛋白酶活性。结果纯化的α1-抗胰蛋白酶在非还原性SDS-PAGE图谱上呈现1条54 kD左右的蛋白带和1条约140 kD的多聚体蛋白带,经过还原性SDS-PAGE多聚体条带解聚,Western Blot也可以反应相关变化;在经过前处理和亲和层析后,α1-抗胰蛋白酶活性回收率为(60.35±1.39)%,α1-抗胰蛋白酶总活性回收率为(41.88±6.98)%,纯化倍数为(71.68±1.32)倍,比活性大约(1.00～1.05)PU/mg。结论 GE公司Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和层析亲和层析可以从Cohn氏法组份Ⅳ中特异性捕获α1-抗胰蛋白酶浓缩物。