脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱的研制

利用本实验室研制的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体研制了DON单克隆抗体免疫亲和柱,柱容量为1μg。小麦样品添加DON标品(1～3μg/g),用蒸馏水提取样品中DON,经免疫亲和柱净化、甲醇洗脱,HPLC检测,回收率大于88%,变异系数4.6%～7.4%。

粮食中DON-免疫亲和层析净化高效液相色谱法的回收率方法比较

用免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,且与GB/T 23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、Romer labs实验室推荐方法、实验室优化方法进行比较。本实验方法在前两种方法的基础上优化后,在0.5mg/kg^5mg/kg的加标水平下,回收率在90.3%~100.2%,RSD在1.2%~2.0%之间,最低检出限则为44μg/kg,定量限为146μg/kg,能够很好的满足实验室分析要求。

三聚氰胺免疫亲和柱的制备和测试

制备高容量的三聚氰胺免疫亲和层析柱,以识别三聚氰胺的单克隆抗体为配体,采用硅烷化方法,对抗体进行包埋,装填小柱。采用三聚氰胺系列标准溶液进行富集试验,通过紫外光谱(三聚氰胺最大紫外吸收波长240 nm)和液相色谱-质谱测试流出液和洗脱液中三聚氰胺的浓度,确定了免疫亲和柱的柱容量为16.47μg。试验中对亲和小柱的润洗溶液、上样溶液、洗脱溶液和再生溶液进行了优化,结果表明,该免疫亲和层析柱的富集效率可达66倍。以回收率高于60%计,该柱的再生次数至少为5次。

高效液相色谱柱后衍生法检测啤酒中黄曲霉毒素的研究

现在大多数检测黄曲霉毒素的方法，如酶联免疫测试盒、免疫亲和层析净化荧光光度法等。都只能检测单一的黄曲霉毒素B1或黄曲霉毒素总量，而且检测限高，重复性和稳定性不好，难以得到理想的测试结果。本文主要研究啤酒样品经pH7．0磷酸盐缓冲溶液调节pH值后。用含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱净化富集，黄曲霉毒素交联在层析介质的抗体上，用吐温-20／PBS将免疫亲和柱上杂质除去．再以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液经C18柱分离，然后用液相色谱柱后衍生法，用荧光检测器进行检测。本方法可同时分离检测出黄曲霉毒素B1、B2、G，和G2，检测限可达0．2μg／L。

高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M_1的含量

采用高效液相色谱荧光法测定牛奶中的黄曲霉毒素M1。牛奶中的黄曲霉毒素M1用乙腈超声提取，离心，上清液浓缩后用50 mL PBS缓冲液稀释，过免疫亲和层析柱净化，10%甲醇水溶液10 mL淋洗柱，2 mL甲醇洗脱，洗脱液氮吹干后，用10%乙腈水溶液1 mL蜗旋溶解残渣，过0.22μm滤膜，上机测定。对加入乙腈比例、淋洗液及洗脱液进行了优化，结果表明：m 牛奶：V 乙腈=1：2有效的沉淀蛋白避免了过柱堵塞问题，提高了过柱效率。用10%甲醇水溶液淋洗免疫亲和柱，能有效的去除掉杂质，避免了洗脱液成浑浊现象。该方法的线性范围宽，回收率为89.1%~93.5%，相对标准偏差在6.5%~9.7%之间，检出限为0.01μg/kg，低于1/10现行食品安全国家标准对食品中黄曲霉毒素M1的限量标准，符合检测要求，适用于对牛奶中黄曲霉素素M1的检测。

LC-MS/MS测定猪尿中的黄曲霉毒素M_1

建立LC-MS/MS检测猪尿中黄曲霉毒素M1的含量。猪尿样用超纯水稀释定容,充分漩涡振荡后经免疫亲和层析柱净化,甲醇洗脱,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测(MRM)方式检测。外标法定量。采用0.1%甲酸:乙腈+甲醇溶液(1+1)为流动相,梯度洗脱。0.3mL/min的流速。在0.01μg/kg～0.50μg/kg范围内具有良好的线性关系,最低检测限为0.01μg/kg,回收率在70%～95%之间。此法操作简便、快速、灵敏、准确、样品处理简便易行,适用于测定猪尿中的黄曲霉毒素M1。

LC-MS/MS测定植物油脂中黄曲霉毒素B1

建立LC-MS/MS检测植物油脂中黄曲霉毒素B1的含量。黄曲霉毒素B1的检测通常情况下都是用液相色谱检测法带荧光检测器,柱前衍生,或是柱后衍生,操作比较繁琐,灵敏度低。本法采用LC-MS/MS检测,甲醇水提取后,经黄曲霉毒素B1免疫亲和柱,甲醇定容,LC-MS/MS检测。此法操作简便、快速、灵敏、准确。

高纯度,高活力碱性磷酸单酯酶的制备

碱性磷酸单酯酶(简称AKP)Alkaline ph-osphatase(Orthophosphoric monoester pho-sphahydrolase EC 3·1·3·1)是一种用途广泛的生物化学试剂,它能专一性地水解磷酸单酯化合物而释放出无机磷。目前主要应用于核酸研究,如在遗传工程研究中用于核苷酸顺序的分析、测定及其基因的重组,分离;在医学科研上它是酶标免疫测定技术的常用工具酶之一;添加AKP的药用化妆品,有益于皮肤细胞的再生和新陈代谢;此外,还可用于核苷酸脱磷,生产核苷等。