免疫亲和色谱与固相微萃取联用技术研究进展

固相微萃取(SMPE)技术是近年来快速发展的一项样品前处理技术,具有操作简便、经济、快速等优点。SMPE装置由手柄和萃取头两部分组成,萃取头上的涂层是最核心的部分,萃取原理是涂层与目标组分之间的吸附作用。由于涂层的种类有限和选择性差,使其不适合萃取复杂的基质。免疫亲和色谱(IAC)具有很强的特异性。将两项技术联用(IAC-SPME),抗体或者抗体相关材料作为SMPE的涂层,既有SMPE的优点,又弥补了SMPE在选择性方面的不足,用于直接从复杂基质中萃取分析物,IAC-SPME具有很好的应用前景,是目前研究的热点。论文就IAC-SPME联用技术的研究进展进行了综述。

免疫亲和色谱-HPLC-FLD法测定动物肝脏中10种喹诺酮类药物残留

利用免疫亲和色谱净化技术建立了可同时检测动物肝脏组织中10种喹诺酮类药物(麻保沙星、环丙沙星、诺氟沙星、单诺沙星、洛美沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸和氟甲喹)的高效液相色谱检测方法。对利用喹诺酮抗体制备的免疫亲和色谱柱的性能、操作条件进行了考察和优化。抗体的偶联量为5g/L,其对10种喹诺酮药物的柱容量为3.75～6.67μmol/Lgel(1425～2135mg/Lgel),选用V(甲醇):V(PBS)=7:3作为洗脱溶液,连续使用12次后,QNs的柱容量仍能达到初始柱容量的38%～45%;IAC柱重复使用20次后,药物的回收率与样品的净化效果无明显变化。动物肝脏组织样品用PBS溶液提取,IAC柱净化,HPLC-FLD检测。方法的线性范围为0.15～200μg/L,相关系数大于0.9989,检出限为0.05～0.15μg/kg;10种喹诺酮类药物在动物肝脏的平均回收率为74.7%～94.8%,相对标准偏差为3.9%～12.1%。

免疫亲和色谱-气相色谱/质谱法(IAC-GC/MS)检测猪肝中的沙丁胺醇与克伦特罗

制备出抗沙丁胺醇的抗血清,提取、纯化IgG制备免疫亲和色谱柱,针对沙丁胺醇与克伦特罗的动态柱容量分别为400 ng/mL基质和416 ng/mL基质。猪肝样品匀浆后用稀盐酸提取,经免疫亲和色谱柱纯化,再用GC/MS检测,即为IAC-GC/MS法。对沙丁胺醇的检测限为0.5 ng/g,定量限为2 ng/g,对克伦特罗的检测限为0.8ng/g,定量限为2.5 ng/g。空白组织按照1、5、10、20 ng/g的浓度添加药物,沙丁胺醇在空白肝中的添加回收率为78.4%-106.9%,克伦特罗的添加回收率为77.1%-102.9%。本研究建立的检测猪肝中沙丁胺醇与克伦特罗的IAC-GC/MS法乃国内首次报道。

克百威的免疫亲和色谱分析研究

SepharoseCL 4B经碳酰二咪唑(CDI)活化后与纯化的克百威抗体共价偶联,合成了免疫亲和色谱 (IAC)固定相,并用其制备了对克百威具有特异性亲和力的IAC柱。对IAC条件进行了优化,选择 0 02mol/LpH7 2磷酸盐缓冲液(PB)作为吸附与平衡介质,60% (体积分数 )甲醇水溶液作为洗脱剂。结果表明:在优化条件下,IAC柱对克百威的动态柱容量达 1 58mg/L。当标样溶液中克百威质量浓度低于 2μg/L时,经IAC柱富集的效率高于167倍。在河水中按 0 1mg/L水平添加克百威标准品,经IAC柱分离富集,洗脱液采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测,5次重复测定的平均回收率为 89 8%,相对标准偏差为 4 8%。同时采用高效液相色谱(HPLC)法测定洗脱液,与ELISA法测定结果基本一致。

免疫亲和色谱特异性剔除中药方剂四逆散中的柚皮苷

为了获得剔除柚皮苷(naring in)的中药方剂四逆散样品以供其药理活性探讨时使用,制备了抗柚皮苷抗体的免疫亲和色谱柱,用于特异性地剔除四逆散中的柚皮苷。首先合成了柚皮苷的完全抗原柚皮苷与牛血清白蛋白的结合物naring in-B SA,并用naring in-B SA对新西兰兔进行免疫获得抗血清,再将其纯化后与经CNB r活化的Sepharo se4B凝胶共价偶联制成免疫亲和色谱柱。将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱,洗脱,制得特异性剔除了柚皮苷的四逆散样品。由检测结果可知,naring in-B SA被成功合成。将其用于免疫新西兰兔,获得的抗血清的效价经酶联免疫吸附法(ELISA)测定达到1∶30 000,抗体IgG的纯度达94%,交叉反应率低。在IgG与Sepha-ro se4B合成的IgG-Sepharo se免疫亲和色谱柱中,IgG的偶联率为87%。用该免疫亲和色谱柱处理四逆散后,其中所含的柚皮苷几乎完全被剔除。结果证明,利用抗柚皮苷免疫亲和色谱,能特异性地剔除四逆散或其他样品中的柚皮苷成分。

利用鸡蛋特异性抗体IgY的免疫亲和色谱

以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为抗原，利用偶联上ＢＳＡ的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ的亲和色谱材料从鸡蛋蛋黄中一步分离特异性抗ＢＳＡ 抗体。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、双向免疫扩散检验，所洗脱的样品为电泳纯的特异性抗体。反之，将所得抗体再偶联到ＰＯＲＯＳＨＹ上可分离抗原。同时考察了母鸡免疫过程中特异性抗体随时间的变化趋势。

尿样中克仑特罗免疫亲和色谱-气/质联用检测方法的研究

以单抗为配基制备克仑特罗免疫亲和柱,建立了简单、快速、特异的样品净化技术,柱容量达到100 ng。偶联抗体量与柱容量呈线性关系,线性方程为:y=236.36x+6.6214,R2=0.9461。测定尿样中的克仑特罗,不需前处理直接用亲和柱提纯后以气质联用(GC/MS)方法检测。空白猪尿添加浓度为205、01、00 ng时,回收率分别为85%±1.3,85.9%±1.3,81.5%±2.7。同时以NY/XQ421-2003标准中净化方法为对照,回收率分别为113%±5.6,94.5%±10,78.6%±1.7,偶联非特异抗体的对照组亲和柱对样品保留值为7.03%。数据显示:免疫亲和柱作为提纯方法,与传统固相萃取提纯方法相比平行性好,提纯后样本杂质少。因此免疫亲和柱是净化样品的一个有效方法。

绿磺隆克百威三唑磷多抗体免疫亲和色谱技术研究

采用碳酰二咪唑(CDI)将Sepharose CL-4B活化并分别与纯化的抗绿磺隆、抗克百威、抗三唑磷的多克隆抗体共价偶联,合成相应的免疫亲和吸附剂,并制备了对绿磺隆、克百威和三唑磷具有特异性亲和力的多抗体免疫亲和色谱(MIAC)柱。对MIAC的条件进行优化,选择0.02mol·L-1pH7.2磷酸盐缓冲液作吸附与平衡介质,80%(体积分数)甲醇水溶液作洗脱剂。结果表明,在上述试验条件下,MIAC柱对绿磺隆、克百威和三唑磷的动态柱容量分别达1.81、2.29和1.89μg·mL-1床体积。用MIAC柱对添加有绿磺隆、克百威、三唑磷的河水与土壤提取液进行分离富集,洗脱液分别采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附(ELISA)法和高效液相色谱(HPLC)法测定,重复5次,平均回收率是89.98%～106.2%,相对标准偏差(RSD)为3.21%～14.81%,ELISA法和HPLC法的测定结果基本一致。成功建立了绿磺隆、克百威和三唑磷的多抗体免疫亲和色谱分析技术并用于河水和土壤中绿磺隆、克百威、三唑磷残留的测定。

烯唑醇免疫亲和色谱柱的制备及其在样品前处理中的应用

将四甲氧基硅烷(TMOS)水解后与烯唑醇抗体聚合,采用溶胶-凝胶法合成了烯唑醇免疫亲和色谱(IAC)柱固定相,并用其制备了对烯唑醇具有特异性亲和力的IAC柱。对IAC柱条件进行了优化,选择超纯水作为吸附与平衡介质,30%～50%(体积分数)甲醇水溶液作为洗脱剂。结果表明:在优化条件下,IAC柱对烯唑醇的动态柱容量达125.4μg/g。在河水样品和水果样品中添加烯唑醇,经IAC柱净化富集,洗脱液采用高效液相色谱检测,河水中烯唑醇的平均回收率为90.36%～100.14%,相对标准偏差(RSD)为2.03%～6.08%;水果中烯唑醇的平均回收率为85.55%～94.02%,RSD为3.38%～6.78%。本研究为烯唑醇在河水、水果等样品中的残留分析提供了一种新的高效前处理手段。

免疫亲和色谱在动物源性食品兽药残留分析检测中的应用

1 概述 免疫亲和色谱（immnuoaffinity chromatography，IAC）也叫免疫亲和层析，是色谱技术的一种，是一种利用抗原抗体特异性可逆结合的技术。主要原理是根据抗原抗体的高选择性，从复杂的待测样品中提取目标化合物。具体过程是将抗体号隋性微珠共价结合，然后装柱，将抗原溶液过免疫亲和柱，而非目标化合物则沿柱流下，最后用洗脱缓冲液洗脱抗原，从而得到纯化的抗原，用适当的缓冲液和合适的保存方法，柱可以再生备用。

免疫亲和色谱-高效液相色谱法测定河水和土壤中克百威、三唑磷和绿磺隆残留量

将河水或土壤样品的丙酮提取液通过串联的分别装有克百威、三唑磷和绿磺隆免疫亲和吸着剂的3支免疫亲和色谱柱(IAC)或同时装有上述3种吸着剂的多抗体IAC,对样品中克百威、三唑磷及绿磺隆3种农药进行分离。采用串联IAC分离时,在样品溶液过柱后,将串联的IAC柱分开,并用不同配比的甲醇-水溶液分别从3支IAC柱上洗脱农药,用ELISA和HPLC分别测得农药的含量。采用多抗体IAC分离时,用甲醇-水溶液洗脱后,用上述两种方法测得洗脱液中3种农药的含量。对2种分离方法作回收和精密度试验,两方法的回收率和重复性基本一致。

免疫亲和色谱在纯化核糖核蛋白中的应用

生化提纯高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作。生物大分子蛋白质的生产中收得率低和纯度低是急需解决的关键问题。此文叙述了免疫亲和色谱技术生化提纯可溶性核糖核蛋白SSA抗原、SSB抗原的特点 。

浅谈免疫亲和色谱技术的应用

免疫亲合色谱作为一种高效、简便的样品前处理技术,能够大大提高日常分析检测工作的效能。通过对文献、资料中的实验与研究进行分析和总结,概述免疫亲和色谱技术的原理和特点,阐述了这种先进、高效的技术在食品科学、中药学、环境科学等领域的应用,显示出免疫亲和色谱技术高效、快速、简便的特点。

免疫亲和色谱及其在兽药残留检测中的应用

随着对兽药残留检测领域研究的不断深入,免疫亲和色谱技术得到了越来越多的广泛应用。本文详细阐述了免疫亲和色谱的原理和关键技术,介绍了其在动物性食品中兽药及饲料药物添加剂残留检测中的应用与进展。

免疫亲和色谱的原理及其在食品安全检测中的应用

本文主要对免疫亲和色谱的原理,工作平台的建立,操作条件及其在食品安全检测方面的应用进行了阐述,以促进免疫亲和色谱在食品安全检测方面的普及和应用。

免疫亲和色谱及其在生物样本分析中的应用

免疫亲和色谱是一种将免疫技术与色谱方法相结合的分析手段 ,近年来 ,深受分析工作者的重视。本文介绍了该方法的基本原理。

掺铜（Ⅱ）聚合物的制备及其在免疫亲和色谱中的应用

过渡金属离子Cu（Ⅱ）、Ni（Ⅱ）、Zn（Ⅱ）等与氨基酸残基如组氨酸、半胱氨酸、色氨酸等的咪唑基、硫醇基和吲哚基具有配位作用，因此对蛋白质具有较强的亲和力。其中，Cu（Ⅱ）半径最小、配位化合物稳定化能最低，对蛋白质具有最强的亲和力。本文采用分子印迹聚合物制备中最常用的本体聚合方法（但不如入模板分子），加入适量醋酸铜，制备了掺有Cu（Ⅱ）的聚合物。

氧氟沙星免疫亲和色谱柱的研制

本试验将氧氟沙星与载体蛋白偶联成人工抗原,用合成的免疫原免疫家兔,制备出高效价抗OFL血清。经纯化后研制出针对OFL特异性吸附的免疫亲和色谱柱,并对色谱柱进行了评价,偶联率为93%,动态柱容量为2204ng/mL,分别添加5mL200ng/mL、300ng/mL和400ng/mL氧氟沙星标准工作液,5mL甲醇洗脱,高效毛细管电泳检测,连续测定6次,测得其回收率为94%、92.67%、95.5%,变异系数为5.32%、3.17%、3.84%。

牛肌肉中阿维菌素类药物残留的免疫亲和色谱—高效液相色谱荧光检测方法的研究

本研究旨在建立以免疫亲和色谱（IAC）柱为净化手段的高效液相色谱荧光检测方法（HPLC-FLD），可同时检测牛肌肉组织中的阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和埃普里诺菌素残留。样品用甲醇提取，IAC柱净化，以乙酸酐—甲基咪唑的乙腈溶液作衍生化试剂，96 ℃条件下，完全衍生化100 min。在5、10、50和100 ng/g添加水平下，牛肌肉组织中4种药物添加回收率为77.3%～119.5％，变异系数为1.5%～18.9％，方法的检测限为0.8 ng/g。该方法可用于检测牛肌肉组织中的阿维菌素类药物残留。