免疫介导再生障碍性贫血的实验研究

用γ射线照射小鼠后输注胸腺、淋巴结混合细胞,成功诱导出再生障碍性贫血动物模型,其发生率96.67％,发生时间稳定,实验重复性好,推迟了死亡的时间,为开展再生障碍性贫血机制研究和观察药物作用提供了一种良好的实验研究方法。

生血合剂及其拆方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠作用的实验研究

建立免疫介导再障小鼠模型 ,观察生血合剂及其拆方对再障模型小鼠的作用。结果 :生血合剂能降低再障小鼠死亡率 ,增加外周血象、骨髓有核细胞 ;增高Th(CD4 )百分值、Th/Ts(CD4 /CD8)比值、IL 3、sIL 2R ;降低Ts(CD8)、IL2、IFN γ水平和脾细胞IFN γ基因表达 ;生血Ⅰ号的作用优于生血Ⅱ号和CsA ;单用健脾、补肾、活血方药对上述指标均有不同程度的作用 ,其中温肾药优于滋肾药和活血药 ;

地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠胸腺细胞增殖周期的影响

目的 :研究中药复方地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型胸腺淋巴细胞增殖周期的影响。方法 :选用Balb/c小鼠为实验对象 ,在接受亚致死剂量射线照射后 ,立即注射DBA/2小鼠胸腺、淋巴结混合细胞 ,形成免疫介导再障小鼠模型 ,分组处理后 ,摘取胸腺制成单细胞悬液 ,然后采用流氏细胞仪(FACS)进行分析。结果 :免疫介导再障小鼠胸腺细胞绝大部分停留在G0 /G1期 ,S期和G2 +M期细胞显著减少 ,与正常对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。两种中药复方均能促进小鼠胸腺细胞的分化增殖 ,降低细胞的凋亡率 ,但地甘口服液的效果明显优于四物口服液 (P <0 0 5)。结论 :地甘口服液可明显促进免疫介导再障小鼠的胸腺淋巴细胞分化增殖 ,延缓免疫细胞的衰老凋亡 ,效果优于四物口服液组。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3和IL-3受体变化的研究

本研究目的是为再生障碍性的贫血的临床治疗提供新的思路。建立了免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定植物血凝素 (PHA)刺激的再生障碍性贫血小鼠脾细胞培养上清液中IL 3,以点杂交法对其靶细胞受体进行半定量分析。结果表明 ,用植物血凝素 (PHA)刺激的再生障碍性小鼠脾细胞培养上清液中IL 3含量高于正常对照 ,二者之间有明显差异 (P <0 .0 0 1) ;其靶细胞IL 3受体的表达量明显低于正常对照。结论 :IL 3靶细胞的IL 3受体水平在再生障碍性贫血的治疗中起着重要的作用。

骨髓间充质干细胞对免疫介导再生障碍性贫血的治疗

背景:骨髓间充质干细胞具有免疫调节作用,可以影响淋巴细胞和其他免疫细胞的功能,同时其分泌的因子尚有支持造血的作用。而再生障碍性贫血的发生、发展与T细胞功能亢进引起的造血干、祖细胞凋亡密切相关。目的:比较骨髓间充质干细胞和全骨髓细胞治疗免疫介导再生障碍性贫血小鼠的疗效。方法:建立BALB/C小鼠免疫介导再生障碍性贫血模型。将BALB/C小鼠随机分成正常组、对照组、注射骨髓间充质干细胞和注射全骨髓细胞组。观察骨髓间充质干细胞和全骨髓细胞对实验动物的疗效及骨髓的造血组织容量、脂肪细胞和血窦结构。结果与结论:再生障碍性贫血模型小鼠至第20天,对照组全部死亡,骨髓间充质干细胞组4例死亡,全骨髓细胞组1例死亡。②骨髓间充质干细胞组和全骨髓细胞组存活小鼠,其体质量变化趋势、血细胞计数、骨髓造血功能恢复均无显著性差异。③检测骨髓间充质干细胞组和全骨髓细胞组脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+的比值示无差异,与正常小鼠相比,骨髓间充质干细胞组外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞水平有下降趋势。全骨髓细胞组CD8+T细胞水平明显下降。提示,单独使用骨髓间充质干细胞治疗能够使部分再生障碍性贫血模型小鼠症状改善、造血恢复。骨髓间充质干细胞治疗有效率不如全骨髓细胞,但两组无显著性差异。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓单个核细胞NF-κB表达变化

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在获得性再生障碍性贫血(AA)发病机制中的作用。方法:将35只BALB/C小鼠随机分为2组,其中正常对照组15只,模型组20只。复制免疫介导AA小鼠模型,采用Q-PCR、免疫组织化学等方法检测小鼠骨髓单个核细胞NF-κBmRNA水平、蛋白表达及活性变化。结果:与正常对照组相比,AA小鼠骨髓单个核细胞NF-κB mRNA水平未见明显改变(P>0.05),NF-κB/p65蛋白表达增加,而p-IκBα表达明显下降(P<0.01)。结论:NF-κB蛋白表达异常及活性改变在AA的发病机制中具有一定的意义。

生血合剂对免疫介导再生障碍性贫血小鼠作用的实验研究

为了探讨生血合剂治疗再生障碍性贫血的疗效机理，本文在成功复制免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型的基础上，观察了生血合剂对动物模型的作用。结果表明：生血合剂能降低再障小鼠的死亡率，延长死亡时间；增加外周血象、骨髓有核细胞，与康力龙对照组大致相似（Ｐ＞０．０％）；增加Ｔｈ、降低Ｔｓ百分值和ＩＦＮ－γ含量的作用明显优于康力龙对照组（Ｐ＜０．０５）；病理所见能增加骨髓造血灶，减轻脾萎缩；电镜显示能减轻骨髓造血细胞和基质细胞的线粒体肿胀变性、血窦的舒张、渗出、出血和结构破坏。提示生血合剂除了有类似康力龙促进骨髓造血细胞增殖作用外，尚能调整免疫功能、降低Ｔｓ、减少ＩＦＮ－γ等造血负调控因子释放，改善骨髓微环境，从而使造血功能恢复。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型外周血单个核细胞及脾脏干扰素-γ的表达

目的研究免疫介导再生障碍性贫血(AA)小鼠模型外周血单个核细胞(PBMC)及脾脏干扰素-γ(IFN-γ)表达,探讨免疫介导AA小鼠模型的免疫发病机制。方法①采用免疫介导方法建立(60Co-γ射线照射后输入淋巴细胞)AA小鼠模型。②用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测AA小鼠PBMC中IFN-γmRNA的表达,对结果进行半定量分析。③用免疫组织化学方法检测AA小鼠脾脏组织石蜡切片中IFN-γ蛋白表达水平,以每个视野内的阳性细胞数量作为IFN-γ蛋白的量化指标,进行阳性细胞率分析。结果①AA小鼠外周血常规及网织红细胞检测显示全血细胞减少,骨髓活检显示骨髓造血细胞明显减少,非造血细胞增多。造模成功。②RT-PCR结果显示AA小鼠PBMC中IFN-γmRNA表达(1.14±0.06)高于正常小鼠(0.73±0.11),P<0.05。③免疫组织化学结果显示AA小鼠脾脏组织中IFN-γ蛋白阳性率(4.55±0.60)%高于正常小鼠(0.82±0.25)%,P<0.01。结论 AA小鼠PBMC中IFN-γmRNA和脾脏组织中IFN-γ蛋白表达水平增高,提示IFN-γ可能参与AA动物模型免疫发病机制。

脐带血间充质干细胞的分离培养及诱导表达IDO对免疫介导再生障碍性贫血小鼠的治疗研究

目的:从人脐带血中分离和培养脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB MSCs),探讨其吲哚胺2,3-过氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)活性对MSCs治疗再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)的影响。方法:采集足月分娩儿脐带血,淋巴细胞分离法分离培养UCB MSCs。倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物表达,成骨与成脂诱导鉴定UCB MSCs分化潜能。建立免疫介导AA小鼠模型,尾静脉输注经γ-干扰素(IFN-γ)诱导的UCBMSCs,观察对AA小鼠的治疗效果。结果:UCB MSCs培养1周可见少量贴壁梭形细胞,于3周左右细胞生长形态较均匀,成纤维样、平行排列或漩涡状;传代细胞1周即可见80%左右融合。流式检测细胞表面标志物,不表达造血标志物CD34,CD44、CD73阳性表达率分别为94.36%和92.48%。UCB MSCs经IFN-γ诱导表达IDO活性,对AA小鼠造血恢复具有治疗作用。结论:脐血分离培养的MSCs在IFN-γ诱导作用下,其IDO基因表达对于免疫介导AA小鼠模型具有治疗作用。

补肾方药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

为探讨不同补肾方药治疗再障的作用机理 ,用温肾方、滋肾方灌喂DBA/2大鼠 ,抽取、制备含中药血清 ;Ba1b/C小鼠经6 0 Co 5 .5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含补肾方药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞 ,检测培养体系中IL 3、IFN γ的浓度。结果 :液体培养体系中滋肾血清使正常小鼠的IL 3浓度升高 ,而在再障小鼠IL 3浓度则表现降低 ,温肾血清仅使正常小鼠的IL 3浓度升高 ;两组中药血清对IFN γ无影响。结论 :滋肾方对IL 3的生成有影响 ,温肾方、滋肾方对培养体系中IFN γ的生成均无影响。推测补肾方药临床治疗再障的作用是影响IL 3的生成 ,也可能影响造血组织局部IFN γ的生成进而促进造血干 /祖细胞增殖、分化有关。

健脾药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ影响的实验研究

目的:检测免疫介导再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓造血细胞在含健脾药血清的液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度,探讨健脾药治疗再障的作用机理。方法:用健脾药灌喂SD大鼠,抽取、制备含中药血清;Balb/C小鼠经60Co5.5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含健脾药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞,检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果:健脾药对再障小鼠IL-3、IFN-γ的总量无明显影响。结论:健脾药可能通过使局部IFN-γ浓度降低进而影响造血干/祖细胞增殖、分化。

活血方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

目的 检测免疫介导再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血细胞在含活血药血清液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度,探讨活血方药治疗再障的作用机制。方法 用活血方中药煎剂灌喂SD大鼠,抽取、制备含中药血清;Balb/c小鼠经60Co 5.5 Gy γ射线照射后,由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液,形成免疫介导再障模型。在含活血药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞,检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果 正常活血血清组IL-3浓度显著高于正常对照血清组(P<0.01),而再障活血血清组IL-3浓度则显著低于再障对照血清组(P<0.01),正常活血血清组、正常对照血清组IFN-γ均为0。再障活血血清组、再障对照血清组两组间IFN-γ无差异(P>0.05)。结论 活血方药临床治疗再障的作用可能是影响IL-3的生成而进一步促进造血干/祖细胞增殖、分化。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型外周血干扰素-γ与蛋白激酶-θ的表达及其意义

本研究通过建立免疫介导的再生障碍性贫血（AA）动物模型，研究小鼠外周血单个核细胞（PBMC）干扰素（IFN）-γ mRNA与蛋白激酶（PKC）-θ mRNA的表达关系．探讨AA动物模型的免疫发病机制，为AA发病机制的研究提供资料。

泻肝方药血清免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

目的 :检测免疫介导再生障碍性贫血 (简称再障 )小鼠骨髓造血细胞在含泻肝方血清的液体培养体系中IL - 3、IFN -γ的浓度 ,探讨泻肝方药治疗再障的作用机理。方法 :用泻肝方灌喂DBA/2大鼠 ,抽取、制备含中药血清 ;Balb/C小鼠经60 Co5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含泻肝方血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞 ,检测培养体系中IL - 3、IFN -γ的浓度。结果 :泻肝方药对再障小鼠IL - 3、IFN -γ的总量无明显影响。结论 :泻肝方药可能通过使局部IFN -γ浓度降低进而影响造血干 /祖细胞增殖。

补肾生血汤联合免疫抑制治疗慢性再生障碍性贫血患者疗效及改善疾病相关指标研究

目的探讨补肾生血汤联合免疫抑制在慢性再生障碍性贫血患者中的应用。方法该研究纳入了76例慢性再生障碍性贫血患者作为研究对象,均为临汾市人民医院2019年3月—2022年3月期间收治的患者。依据随机数字表法将患者随机分为对照组和观察组,每组各38例。对照组采用常规治疗联合免疫抑制,观察组在对照组基础上加用补肾生血汤,均连续治疗3个月。对比两组治疗后临床疗效,治疗期间不良反应发生情况,治疗前后T淋巴细胞亚群水平、骨髓碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、外周血象指标水平。结果治疗后观察组患者的临床总有效率为97.37%,明显高于对照组的84.21%;相较于治疗前,治疗后两组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、骨髓bFGF、MVD、VEGF、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)水平均升高,CD8+水平则降低,且观察组优于对照组;治疗期间,观察组患者的不良反应总发生率10.53%较对照组的28.95%相比更低(均P<0.05)。结论补肾生血汤联合免疫抑制治疗慢性再生障碍性贫血患者具有较好的临床疗效,能够改善患者机体内的免疫功能以及骨髓造血微环境,提升其造血功能,且安全性较高。

自拟健脾养肾补血汤辅助治疗再生障碍性贫血的疗效及对免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b的的影响

目的:探究自拟健脾养肾补血汤辅助治疗再生障碍性贫血(AA)的疗效及对免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b的影响。方法:选取我院2017年6月至2022年1月收治的104例无移植指征的AA患者。按照随机数字表法分为对照组[n=52,免疫抑制(IST)治疗]和观察组[n=52,自拟健脾养肾补血汤辅助IST治疗]。对比两组患者临床疗效,治疗前后中医证候积分、外周血象、免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b水平及治疗期间不良反应情况。结果:观察组治疗总体有效率96.15%高于对照组84.62%(P<0.05);两组患者治疗后中医证候积分均明显下降,且观察组低于对照组(P<0.05);两组治疗后血红蛋白(Hb)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、铁蛋白(SF)及网织红细胞计数(ReT)水平均升高,且观察组高于对照组(P<0.05);两组治疗后NK细胞、CD4+百分比及CD4+/CD8+值均升高,CD8+百分比均下降,且观察组NK细胞、CD4+百分比及CD4+/CD8+值高于对照组,CD8+百分比低于对照组(P<0.05);两组治疗后清miR-155-5p及miR-1260b mRNA均下降,且观察组低于对照组(P<0.05);两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾养肾补血汤辅助IST治疗AA可明显提升患者免疫功能,促进骨髓造血功能恢复,下调血清miR-155-5p和miR-1260b水平,且药物毒性较小,具有一定安全性。

补肾中药结合抗淋巴细胞球蛋白/抗胸腺细胞球蛋白治疗重型再生障碍性贫血的免疫作用及预测机制研究

目的:探讨补肾中药结合抗淋巴细胞球蛋白(ALG)/抗胸腺细胞球蛋白(ATG)治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的免疫作用及预测机制。方法:选取2018年1月—2023年6月在甘肃省中医院被诊断为SAA的140例患者,依据随机1∶1分配原则,分为常规治疗组和联合补肾中药治疗组,每组70例。常规治疗组给予ALG/ATG进行免疫治疗,联合补肾中药治疗组在常规治疗组常规免疫治疗的基础上联合补肾中药进行治疗。观察并比较两组患者的临床总有效率、免疫指标(血红蛋白、网织红细胞、血小板以及中性粒细胞)水平、生存率预测效果以及不良反应的发生情况。结果:联合补肾中药治疗组患者的治疗总有效率高于常规治疗组的治疗总有效率,差异有统计学意义(P<0.05)。联合补肾中药治疗组免疫指标血红蛋白、网织红细胞、血小板以及中性粒细胞的水平均高于常规治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察结束时,两组患者的整体生存率为83.58%。联合补肾中药治疗组5年、10年的预计生存率(83.11%、80.27%)高于常规治疗组5年、10年的预计生存率(77.82%、75.37%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,联合补肾中药治疗组的不良反应发生率与常规治疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采取抗淋巴细胞球蛋白/抗胸腺细胞球蛋白结合补肾中药联合治疗SAA,治疗总有效率更高,且治疗早期疗效的预测准确率高,同时还具备提高免疫能力的效果,可以在临床进行一定范围的推广与应用。

血清HMGB1、IFN-γ水平与再生障碍性贫血患儿细胞免疫障碍的相关性分析

目的:探讨血清高迁移率族蛋B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)、干扰素-γ(Interferonγ,IFN-γ)水平与再生障碍性贫血患儿细胞免疫障碍的相关性。方法:回顾性选取我院2022年6月至2023年6月的再生障碍性贫血患儿115例作为研究组,其中重型再生障碍性贫血患儿48例,轻型再生障碍性贫血患儿67例。按照患儿接受治疗后的预后情况分为发生组和未发生组,其中发生组45例,未发生组70例;另选取在我院进行体检的100例健康儿童作为参照组。检测并对比各组血清HMGB1、IFN-γ水平,并对比轻型、重型再生障碍性贫血患儿血清HMGB1、IFN-γ、血小板计数(Platelet count,PLT)、巨核细胞计数(Megakaryocyte,MK)水平,分析再生障碍性贫血患儿血清HMGB1、IFN-γ水平和PLT、MK之间的关系,对比预后不同状况两组的血清HMGB1、IFN-γ水平,采用ROC曲线分析血清HMGB1、IFN-γ预测再生障碍性贫血患儿细胞免疫障碍的临床价值。结果:研究组血清HMGB1、IFN-γ水平均比参照组高(P<0.05);重型再生障碍性贫血组血清HMGB1、IFN-γ水平均相较于轻型组明显上升,而重型再生障碍性贫血组PLT、MK均相较于轻型组下降(P<0.05);再生障碍性贫血患儿的血清HMGB1和PLT、MK均呈负相关(P<0.05);血清IFN-γ与PLT、MK均呈负相关(P<0.05);发生组血清HMGB1、IFN-γ水平相较于未发生组升高(P<0.05);血清HMGB1、IFN-γ联合预测再生障碍性贫血患儿细胞免疫障碍AUC值为0.911,比单独采用HMGB1、IFN-γ预测的AUC值高。结论:再生障碍贫血患儿血清HMGB1、IFN-γ水平异常上升,且上述指标和细胞免疫障碍之间有着密不可分的关系,可将其作为再生障碍性贫血患儿细胞免疫障碍评估的主要指标。

熟萸养血汤对非重型再生障碍性贫血患者的免疫功能的影响

目的探讨熟萸养血汤对非重型再生障碍性贫血患者免疫功能的影响。方法将81例非重型再生障碍性贫血患者分为对照组40例和治疗组41例。对照组37例患者(脱落3例)进行常规基础治疗。治疗组37例患者(脱落4例)在对照组上,运用熟萸养血汤。患者在治疗6个月后分析疗效。比较患者肾阴阳两虚证的中医证型评分。检测患者的血红蛋白(hemoglobin,HGB)、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、血小板计数(platelet count,PLT)、网织红细胞绝对数(reticulocyte,RET)、CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgM、IgG的水平。结果经6个月治疗,治疗组患者的整体总有效率达89.19%(33/37),对照组为70.27%(26/37),组间差异显著(P<0.05)。治疗6个月后,两组患者中医证型评分均显著减小(P<0.05);治疗组患者的中医证型评分比对照组患者更低(P<0.05)。治疗6个月后,两组的HGB、WBC、PLT、RET高于治疗前(P<0.05);治疗6个月后,治疗组的HGB、WBC、PLT、RET高于对照组(P<0.05)。治疗个月后,治疗组的CD8^(+)显著减小,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著增大(P<0.05);治疗组的CD8^(+)小于对照组,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)大于对照组(P<0.05)。治疗6个月后,治疗组的IgA、IgM、IgG高于治疗前,且比对照组治疗后的水平更高(P<0.05)。结论熟萸养血汤可提高非重型再生障碍性贫血的常规治疗效果,改善患者的血象及免疫功能。