阿尔茨海默病中免疫检查位点LAG3的研究

目的:探讨免疫检查位点基因LAG3在阿尔茨海默病(AD)中的作用和意义。方法:对GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)数据库中AD患者脑组织测序数据集GSE48350和血液测序数据集GSE140829进行分析,采用CIBERSORT计算脑组织中的免疫细胞评分,并观察LAG3的表达量变化;使用人源Aβ1-42淀粉样蛋白诱导小鼠海马神经元细胞系HT22作为AD细胞模型,RT-PCR检测LAG3的表达量变化。通过GSEA分析研究与LAG3直接相关的通路,String网站构建PPI网络,发现与LAG3相互作用的基因,最后通过KEGG和GO分析这些基因的生物学功能。结果:AD患者脑组织中免疫细胞与健康人存在较大差异,AD患者脑组织和血液中LAG3水平均高于健康人,AD细胞模型中LAG3的表达量也增高。结论:AD脑组织中免疫细胞构成与健康人存在差异,AD脑组织中未激活的记忆CD4^(+)T细胞和单核细胞的比例较高,激活的NK细胞偏低,且免疫检查位点LAG3的表达量增高,其可能与CD4细胞有关,也与免疫细胞的活化和调节存在联系。

缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性

目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。

狂犬病毒糖蛋白和核蛋白主要免疫活性位点的质粒载体构建

目的 为进一步研究狂犬病毒糖蛋白和核蛋白免疫活性位点的免疫特性 ,构建了大肠杆菌重组质粒载体。方法 参考有关文献及用蛋白质亲疏水性分析程序分析狂犬病毒糖蛋白、核蛋白 ,以确定目的基因 ,用分子克隆的方法将目的基因片段插入质粒载体 ,最后测定重组质粒的核酸序列。结果 在大肠杆菌质粒 PU C1 8多克隆位点 Eco R 和 Bam H 之间 ,根据其阅读框架 ,插入了含有狂犬病毒糖蛋白主要免疫活性位点的目的基因合成片段 :G 免疫活性位点的第 1 4 9～ 1 6 0位氨基酸残基及 G 免疫活性位点的第 331～ 340位氨基酸残基所对应的碱基序列。在 KS质粒多克隆位点 Eco R 和 Bam H 间 ,插入了狂犬病毒核蛋白 -免疫活性位点第 374～ 383位氨基酸残基所对应的碱基序列。

二位点酶联免疫测定血浆P-选择素方法的建立及临床意义

血小板活化与血管内皮细胞损伤在动脉血栓形成中起着重要的作用。P-选择素是血小板α-颗粒膜蛋白,它在血小板活化和释放过程中随着α-颗粒膜与血小板浆膜的融合暴露在血小板表面,成为体内血小板活化和血栓形成的特异标志。P-选择素有两种形式,其一是具有跨膜区域的整合型,另一种为缺乏跨膜区的游离型,后者在血小板活化时,释放到血浆内,成为血浆P-选择素的主要来源。因此,测定血浆内P-选择素的浓度变化,对体内血小板活化及血栓形成亦具有重要诊断价值。我们利用二株抗P-选择素的单克隆抗体,建立了双克隆抗体二位点酶联免疫测定血浆内P-选择素的方法,并测定了正常人和某些血栓性疾病病人血浆内P-选择素的浓度,为血栓性疾病的诊断提供了一个新的方法。

狂犬病毒糖蛋白主要免疫活性位点的质粒载体构建

目的 :为进一步研究狂犬病毒糖蛋白 (G蛋白 )免疫活性位点的免疫特性 ,构建其大肠杆菌重组质粒载体。方法 :参考有关文献及用蛋白质亲疏水性分析程序分析 ,确定目的基因片段 ,并用分子克隆的方法将目的基因片段插入载体质粒 ,最后测定其核酸序列。结果 :在大肠杆菌质粒 PU C18的多克隆位点 Eco R 和 Bam H 之间 ,根据其阅读框架 ,插入了人工合成的目的基因片段 ,其含有狂犬病毒 G蛋白免疫活性位点 G 表位第 149～ 16 0位氨基酸残基及 G 表位第 331～ 340位氨基酸残基所对应的核酸序列。结论 :本研究构建了狂犬病毒 G蛋白两个主要免疫活性位点的重组质粒载体 ,为深入研究其免疫活性位点的免疫特性及基因免疫打下基础。

NK细胞相关免疫检查位点的研究进展

自然杀伤(NK)细胞是机体内重要的免疫细胞。NK细胞的多种受体(PD-1、NKG2A、TIGIT、TIM-3等)具有充当抗肿瘤免疫检查位点的潜力;通过对这些受体的活性进行激活或抑制,使NK细胞正常发挥免疫调控作用,为肿瘤的免疫治疗提供了新的研究方向。文章主要就NK细胞受体作为肿瘤免疫治疗的免疫检查位点以及检查位点相关抑制剂的研究现状进行综述。

PD-L1和PD-1作为治疗结直肠癌的免疫检查新靶点的研究进展

免疫抗癌疗法是一种新的治疗实体肿瘤的方法。在这个新的领域,免疫系统里作为负向调节因子的免疫检查位点,在抗肿瘤免疫反应领域中起着重要的作用。因此,诸如抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序性细胞死亡蛋白(PD-1)、程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1),现在已经研发出了针对前述这三者免疫检查位点的阻断因子,用于抗肿瘤的药物,在临床前期研究和临床研究中有着可喜的成果。本文综述关于在结直肠癌中免疫检查位点阻断剂的生物背景和临床研发最新进展。关于阻断PD-1和PD-L1的临床前期试验结果的前景令人充满希望,尤其是在带有微卫星不稳定性(MSI)的结直肠癌患者中更加明显。接下来进一步深入开展的临床试验将证实这些初步结果,并且评估这二者联合治疗方法的可行性和确认这两个生物标记物作为免疫检查位点阻断剂的效应在哪些人群中更有可能受益或更加抵抗。

转录因子LMO3在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及对预后的临床意义

目的探讨转录因子LMO3在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的表达及对预后的临床意义。方法收集82例石河子大学第一附属医院经病理检查确诊为DLBCL的患者的临床资料,采用免疫组织化学染色法检测LMO3在DLBCL中的表达,分析LMO3的表达与DLBCL临床特征及预后的关系。结果纳入的82例DLBCL患者中,LMO3阳性表达19例(23.2%),阴性表达63例(76.8%)。LMO3表达患者在性别、国际预后指数(IPI)评分、乳酸脱氢酶(LDH)水平、免疫分型等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。LMO3表达与年龄、临床分期(Ann Arbor分期)、B组症状、美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分、CD5阳性有相关性(P<0.05)。LMO3阳性组的无进展生存时间和总生存时间短于LMO3阴性组,无进展生存率和总生存率均低于LMO3阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。CD5、LMO3表达双阳性患者的无进展生存率和总生存率均低于双表达阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析发现,年龄>60岁、CD5表达阳性、LMO3表达阳性、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ、B组症状、ECOG评分>1分、IPI评分>2分是影响总生存时间的风险因素;年龄>60岁、CD5表达阳性、LMO3表达阳性、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、症状为B组症状、ECOG评分>1分、IPI评分>2分、治疗方案为CHOP是影响无进展生存时间的危险因素。多因素分析结果发现,B组症状和IPI评分>2分为影响总生存时间的独立危险因素。结论LMO3在DLBCL中的表达有可能成为预测患者预后的新型免疫位点。LMO3在DLBCL中的表达与其临床特征存在相关性,CD5与LMO3在DLBCL中的表达有明显相关性,有可能存在相互联系的致病机制或信号通路,有望成为新的免疫治疗靶点。

单克隆抗体研究新进展

单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具 ,在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的作用。本文全面综述了单克隆抗体研究最新进展。通过构建真核表达载体 ,采用DNA免疫、细胞免疫、消减免疫和多位点重复免疫等现代分子免疫学方法 ,快速制备高亲合力的单克隆抗体 ,改进常规方法制备单抗费时费力且亲合力低的弱点 ,对后基因时代蛋白质组学等基础研究领域的研究具有巨大的推动作用 ;同时在生物芯片。

禽流感病毒血凝素基因突变体的构建及其在293T细胞中的表达

采用PCR定点突变技术,通过重叠延伸法3次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pcDNA3载体中,DNA测序表明在预期位点已经发生突变,HA基因裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF突变为RSSR↓GLF,通过磷酸钙共沉淀方法将HA基因突变体的重组质粒瞬时转染293T细胞,采用间接免疫荧光鉴定其表达情况。IFA证实突变后的HA在细胞膜上获得了有效表达。HA基因突变体的成功构建,为进一步研究该突变位点导致AIV进入细胞的发病机制和HA蛋白的结构和功能的关系奠定了基础。

基于TCGA数据对PVR基因在宫颈癌中的表达及其对肿瘤免疫微环境的影响分析

目的:探讨PVR及其受体TIGIT基因在宫颈癌中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系,并利用生物信息学方法初步探究PVR基因及其受体TIGIT对宫颈癌发生及肿瘤免疫微环境的作用。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)泛癌转录组测序表达矩阵,分析PVR及TIGIT在泛癌肿瘤组织中与正常组织的表达差异,及其与宫颈癌临床病理特征和预后的相关性。相关性分析得出与PVR或TIGIT表达相关的基因,并利用GSEA方法进行功能注释。计算TCGA宫颈癌免疫细胞浸润情况并探究与PVR和TIGIT表达量的相关性。免疫组化实验用于验证PVR编码的CD155和TIGIT表达量及其与CD8阳性T细胞和PD1表达量之间的相关性。结果:PVR和TIGIT mRNA在多肿瘤中表达量高于正常组,且在宫颈癌患者中,PVR基因表达水平是总体生存率的独立预测因子,高水平的PVR基因表达量与更差的总体生存率显著相关。PVR与多肿瘤发生相关的信号通路共表达,如MYC靶标、血管生成信号、TGF-β信号、TNF-α/NF-κB信号通路、PI3K/AKT/mTOR信号通路、Hedgehog信号等,且PVR表达与CD8+T细胞、滤泡辅助T细胞、调节性T细胞、静息肥大细胞和静息树突状细胞的浸润分数和免疫细胞分数呈负相关。TIGIT与免疫相关通路的信号通路共表达,且与免疫细胞和基质细胞浸润呈现正相关,免疫组化实验中TIGIT与PD1共表达。结论:PVR在宫颈癌中可能参与多肿瘤发生的作用机制,并造成宫颈癌肿瘤免疫抑制和逃逸,TIGIT表达升高可能为宫颈癌形成免疫逃逸的机制之一,CD155/TIGIT靶向药物可能是宫颈癌新的治疗研究方向。

江西省呼吸道合胞病毒G蛋白基因特征分析

目的了解江西省流行的呼吸道合胞病毒（RSV）的G蛋白基因特征。方法收集2005年-2007年流感样病例标本,进行RSV分离;对病毒G蛋白进行全基因序列测定,并与国际标准株进行比较,对G蛋白潜在的O-糖基化位点进行分析。结果从4291份标本中分离到6株RSV。各分离株与A、B型标准株的氨基酸同源性分别为85.6%-87.6%和75.9%-76.7%;其3＇端基因高变区核苷酸序列与RSV GA2亚型的同源性最高。分离株在人群免疫选择压力位点111、132、226、262、274、290、297位氨基酸上发生了变异,与A2株比较,众多的潜在的O-糖基化位点发生了改变。结论 2005年-2007年江西省RSV流行株属于GA2亚型,在G基因的人群免疫选择压力位点和糖基化位点有变异。