抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用。结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM。动物实验中PYM10mg·kg-1对H22肝癌的抑制率为60·6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90·8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间。结论3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。

力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的研制一种具有高效、小型化特点的抗肿瘤单克隆抗体(单抗)免疫偶联物。方法以化学偶联法制备抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与单抗Fab'片段的偶联物Fab'-LDM。以非还原型SDS-PAGE法确定偶联物的相对分子质量;ELISA法、四氮唑蓝(MTT)法、克隆形成法及小鼠移植性结肠癌26(C26)模型观察Fab'-LDM偶联物的抗肿瘤作用。结果Fab'-LDM偶联物的相对分子质量(Mr)约为65000,Fab'与LDM的偶联分子比为1∶1;偶联物与BEL-7402及C26细胞均呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;Fab'-LDM对靶细胞BEL-7402的杀伤作用比游离LDM强13倍,对C26细胞的杀伤作用比LDM强5.5倍,但对非靶细胞KB的作用与LDM相当。动物试验结果表明,0.05mg/kg、0.1mg/kg和0.2mg/kg剂量Fab'-LDM偶联物对小鼠移植性结肠癌26的抑瘤率分别达80%、92%和94%,而0.1mg/kg剂量游离LDM的抑瘤率为77%;同时偶联物治疗组动物生存时间较对照组延长。偶联物的抑瘤作用强于等剂量游离LDM(P<0.01)。结论以高效抗肿瘤抗生素LDM为“弹头”药物,可与单抗活性片段构建成具有良好抗肿瘤作用的小型化单抗导向药物。

治疗性单克隆抗体的研究进展及其免疫偶联物的抗肿瘤应用

目前正在研究的生物技术药物有1/4是单克隆抗体类药物,治疗性抗体已成为生物制药业发展最快的领域之一,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、心血管疾病、病毒感染等。在发展初期,鼠源单克隆抗体为人类疾病的研究起到了重大的推动作用,但其存在着严重的不足,单克隆抗体人源化已逐渐成为当前研究的热点。另外,将放射性物质、化疗药物以及生物毒素等与单克隆抗体偶联得到免疫偶联物,这些偶联物被单克隆抗体特异性地导向表达相应抗原细胞的表面,并发挥抗肿瘤效应,同时也降低了药物对正常组织的损伤。文中就有关单克隆抗体人源化的研究进展和抗肿瘤应用进行综述。

苯丁酸氮芥-抗人直肠癌单抗免疫偶联物对人直肠癌细胞的特异杀伤作用

苯丁酸氮芥(CBL)的活性酯通过共价联接的方式与抗人直肠癌单克隆抗体5OH.19偶联,形成的免疫偶联物CBL一5OH.19具有较高的药物/抗体比率(25～30∶1)以及很好的导向活性。在体外30分钟试验和24小时试验中,CBL—50H.19对人直肠癌LoVo细胞均具有很强的体外杀伤活性.其效果比游离的CBL强。CBL—50H.19对人膀胱癌E—J细胞无杀伤活性;CBL与正常小鼠IgG偶联组成的免疫偶联物对LoVo细胞和E—J细胞均无杀伤作用。这表明CBL—50H.19对人直肠癌细胞不但具有较强的杀伤能力.而且具有好的杀伤特异性.

光免疫偶联物的研究进展

光敏剂与单克隆抗体交联可形成光免疫偶联物,这种偶联物具有识别肿瘤部位的能力。该方法解决了传统光动力疗法在癌症治疗中的低选择性问题。光免疫疗法的实现取决于在保证抗体活性的条件下使大量的光敏剂与抗体交联。本文回顾了光免疫疗法的发展过程,总结了目前常用的各种光免疫偶联物的制备方法和应用,并针对目前光免疫偶联物的应用现状,分析了未来的发展趋势,包括如何增强光敏剂的光敏化能力及提高靶向性的方法和途径。

以Endoglin为靶点的新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果。结果等细胞毒性剂量的偶联物END-ADM与ADM对体外培养的肝癌细胞杀伤作用差异不大。动物实验中ADM 0.4mg/kg对H22肝癌的抑制率为29.33%,而等细胞毒性剂量的END-ADM偶联物的抑瘤率达到86.67%,抑制作用显著增强(P<0.05),与ADM相比,偶联物还可显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间(P<0.05)。结论 END-ADM偶联物对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的抑制作用比ADM显著增强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。

多柔比星免疫偶联物构建的研究进展

近年来,由高效的毒性药物作为"弹头"与肿瘤靶向蛋白结合形成的免疫偶联物成为靶向治疗肿瘤的研究热点。多柔比星作为经典的化疗药物,抗肿瘤机制明确,但不良反应较强,已被许多研究者用于免疫偶联物的研究中。随着偶联方式(交联剂)的不断更新,多柔比星免疫偶联物的构建方法也不断改进,对靶向治疗肿瘤的研究也取得了一定的成果。文中就多柔比星免疫偶联物构建的研究进展作一综述。

新型抗肿瘤抗生素与单克隆抗体免疫偶联物的研究

(一)抗肿瘤抗生素的研究与开发 1.抗肿瘤抗生素是微生物产生的抗肿瘤活性物质,自然界微生物种类繁多,其代谢产物极为复杂多样,是寻找新药的宝库。中国医学科学院建院41年来,我们长期从事抗肿瘤抗生素的筛选研究,近10年来得到国家自然科学基金重大项目、国家新药项目和国家“九五”攻关项目基金资助,对全国各地以及南极土壤样本分离获得的微生物进行研究。累计筛选样品超过100,000个。 2.

血卟啉-赫赛汀光敏免疫偶联物的制备及光敏免疫疗法研究

目的制备光敏剂血卟啉(HP)-单克隆抗体赫赛汀的光敏免疫偶联物,并观察偶联物对BT-474人乳腺癌细胞的杀伤及凋亡作用。方法以碳二亚胺为缩合剂,化学制备HP-赫赛汀光敏免疫偶联物。给予波长630 nm激光照射后,用MTT法、FCM检测比较免疫偶联物和游离HP对BT-474人乳腺癌细胞的杀伤及凋亡作用。结果含同剂量HP的偶联物较游离HP对BT-474细胞的杀伤及凋亡效果明显增强(P<0.05)。结论成功制备HP-赫赛汀光敏免疫偶联物,该偶联物对BT-474人乳腺癌细胞的杀伤作用强于游离HP。

免疫偶联物膀胱灌注预防膀胱癌复发的研究及进展

肿瘤的导向治疗已研究多年,但临床实验提示静脉使用免疫偶联物对实体瘤的治疗效果因多种原因并不理想。局部使用免疫偶联物在理论上有助于克服这些原因而获得成功。膀胱癌因其独特的解剖及生物学特性而成为这一思路的良好模型。

柔红霉素与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体偶联物的制备及其免疫学特性

目的 评价柔红霉素(daunorubicin,DNR)与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体免疫偶联物对兔晶状体上皮细胞的免疫特异性。方法 采用过碘酸盐氧化法将抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体LM_1与柔红霉素结合;Bradford蛋白检测法和紫外吸收光谱法检测偶联物中LM_1与DNR的克分子比;ELISA法检测LM_1与DNR偶联后抗体活性的变化;免疫组织化学法检测偶联物在兔眼组织的免疫特异性。结果 偶联物表现出单抗LM_1和DNR的生物学活性及紫外光谱特征,偶联产物中DNR与LM_1的克分子比约为12∶1,即每个抗体分子可以携带约12个药物分子。偶联后抗体的活性保持为原有活性的76.5％以上。免疫组化显示偶联物仅在兔晶状体上皮细胞呈阳性表达,在其他眼组织为阴性表现。结论 抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体与柔红霉素的免疫偶联物在体外可以选择性地结合到兔晶状体上皮细胞并保持特异的免疫活性。

以Ⅳ型胶原酶为靶点的小型化单抗免疫偶联物的抗肿瘤作用

Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭、转移以及新血管生成等过程密切相关。以Ⅳ型胶原酶为分子靶点,利用小鼠抗Ⅳ型胶原酶单抗构建了小型化的Fab′片段与高效抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)的免疫偶联物(Fab′-LDM),偶联物的分子量约为65kD,偶联分子比为1:1.以ELISA方法检测,Fab′-LDM偶联物保留了单抗Fab′片段对肝癌22(H22)细胞的免疫结合活性;以MTT法测定,Fab′-LDM偶联物对肝癌22细胞显示出更强的细胞毒性,动物体内试验观察对小鼠移植性肝癌22的疗效,小鼠皮下接种肿瘤,24h后开始给药(静脉注射2次,分别在接种后1和8天),Fab′-LDM偶联物0.025,0.O5和0.10mg/kg剂量组的抑瘤率分别为76.7％,93.3％和94.8％,而游离LDM0.05mg/kg的抑瘤率为76.1％;另一批实验于接种肿瘤96h后开始给药(静脉注射2次,分别在接种后4和11天),Fab′-LDM偶联物0.025和0.05mg/kg组的抑瘤率分别为74.2％和80.9％,而LDM0.05mg/kg组的抑瘤率为60.5％,Fab′-LDM偶联物0.05 mg/kg可显著延长荷瘤小鼠的生存时间,与同等剂量的游离LDM相比,延长生存时间的效果更强(P<0.05),以上结果表明,以Ⅳ型胶原酶为靶点的小型化单抗免疫偶联物在肿瘤的实验治疗中有显著的疗效。

抗体偶联药物及其质量控制与表征

抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADC)是一类由单克隆抗体、细胞毒性药物与连接子组成的具有靶向性的免疫偶联物,用于肿瘤的靶向治疗。该治疗手段因为单克隆抗体提供的靶向性,能精确递送ADC药物,从而提高化疗的疗效并减少药物对正常细胞的毒性[1],已逐渐在肿瘤治疗上发挥重要作用。目前,全球上市的ADC药物包括恩美曲妥珠单抗、维迪西妥单抗、戈沙妥珠单抗等10余种。同时,数百种ADC药物正处在临床研究阶段。然而,由于ADC药物相对于单独的单克隆抗体具有复杂性,因此对ADC药物进行质量控制和表征的检验显得尤为重要。

光免疫偶联物的研究进展

近年来,恶性肿瘤的发病率呈递增趋势。经过手术切除、化疗、放疗等常规的治疗手段,很多患者的病情仍未得到有效控制。因此,探寻新的治疗方式成为肿瘤防控的重点。光免疫疗法(photoimmunotherapy, PIT)在实体瘤研究中的作用越来越突出。光免疫偶联物(photoimmunoconjugate, PIC)具有肿瘤特异性识别的能力,兼具高细胞毒性。本文综述了过去10年该类新型分子靶向药物的研究进展,以卟啉、二氢卟吩e6(Ce6)、酞菁染料(IR700)等光敏剂交联单克隆抗体(monoclonal antibodies, MAbs)药物的合成及其作为光敏药物的研究结果。

靶向纳米级免疫偶联物诱导检查点抑制剂抗体治疗颅内胶质瘤的可行性实验研究

目的探讨靶向纳米级免疫偶联物(Nanoscale immunoconjugates, NCI)诱导检查点抑制剂抗体治疗颅内胶质瘤的可行性。方法无特定病原体级(Specific pathogen free, SPF)级、雌性大鼠168只,随机分为磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline, PBS)组(24只),游离组(72只)及NIC组(72只);所有大鼠均进行颅内胶质瘤细胞植入,构建颅内胶质瘤大鼠模型;PBS组不进行治疗;游离组给予T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,a-CTLA-4)和程序性细胞死亡1(Anti programmed cell death protein-1,a-PD-1)及两者联合注射,每种各24只;NCI组给予纳米级免疫偶联物诱导检查点抑制剂抗体[分别为聚苹果酸/T淋巴细胞相关抗原4(Polymalic malic acid/Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,P/a-CTLA-4)、聚苹果酸/程序性细胞死亡1(Polymalic malic acid/Anti programmed cell death protein-1,P/a-PD-1)及两盒联合注射]注射,每种各24只;使用荧光素标记法观察不同组大鼠药物血脑屏障穿透效率,比较不同治疗方式大鼠治疗后CD3^(+)T细胞(CD3^(+)Pan T Cells, CD3^(+))、CD4^(+),CD8^(+)、调节性T细胞(Regulatory T cells, Treg)、巨噬细胞(MΦ)、自然杀伤细胞(Natural killer cell, NK)细胞、自然杀伤T细胞(Natural killer T cell, NKT)细胞、干扰素γ(Interferon-γ,IFNγ)水平及大鼠CD4^(+),CD8^(+)增殖活跃程度、生存期。结果荧光实验显示,NIC组各治疗方式大鼠脑部荧光面积均显著高于游离组及PBS组;NCI各组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、Treg、CD4^(+)ki67、CD8^(+)ki67、MΦ、M1MΦ、M2MΦ、NK细胞、NKT细胞、IFNγ每孔计数及总体生存期显著高于游离组及PBS组(P<0.05)。结论 NCI诱导检查点抑制剂抗体能促进药物透过血脑屏障,刺激大脑驻留的免疫系统,促使CD8^(+)T细胞增殖并触发多种免疫细胞因子的释放,增加M1型巨噬细胞的产生,从而协调针对GBM的免疫反应,提高颅内胶质瘤大鼠存活时间。

单克隆抗体与平阳霉素偶联物对肿瘤的区域性导向实验治疗

以小鼠Ｈ２２肝癌腹腔内移植和胸腔内移植肿瘤为模型，观察３Ａ５ＰＹＭ偶联物对腔内肿瘤的治疗作用，并以裸鼠移植结肠癌为模型，观察局部注射的治疗作用。结果表明，于小鼠肝癌Ｈ２２皮下肿瘤局部给药，３Ａ５ＰＹＭ在肿瘤的浓度较游离ＰＹＭ高，滞留时间也较长。对小鼠腹腔内或胸腔内移植的肿瘤，腔内注射３Ａ５ＰＹＭ比游离ＰＹＭ具有更显著的延长动物生存期的作用。裸鼠皮下移植ＨＴ２９人结肠癌，在肿瘤周围注射３Ａ５ＰＹＭ比ｉｖ或ｉｐ给予３Ａ５ＰＹＭ显示更高的抑瘤率。提示单抗与平阳霉素偶联物在肿瘤的区域性导向治疗中有较好的疗效。

不同力达霉素与抗VI型胶原酶单抗偶联物的抗肿瘤作用

研究不同偶联方法制备的力达霉素(LDM)与抗IV型胶原酶单抗3G11免疫偶联物的选择性抗肿瘤作用。采用SPDP和SMBS作为偶联剂,将LDM辅基蛋白69位赖氨酸与2-亚氨基四氢噻吩修饰的单抗3G11连接,制备免疫偶联物;ELISA法测定偶联物的免疫活性,克隆形成法及人HT-1080细胞免疫缺陷小鼠移植模型观察两种偶联物的抗肿瘤作用。偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,3G11-SMBS-LDM对体外培养的HT-1080细胞的杀伤作用强于LDM和3G11-SPDP-LDM。动物实验显示,LDM在等摩尔剂量条件下3G11-SMBS-LDM的抑瘤率为86.1%,游离的LDM组为71.2%,3G11-SPDP-LDM组为77.1%,3G11-SMBS-LDM的抑制作用显著增强。3G11-SMBS-LDM组动物的平均生存时间延长为163.7%,3G11-SPDP-LDM组为125.3%,LDM组为71.9%,3G11-SMBS-LDM能显著延长荷瘤鼠的生存期,两个偶联物之间有显著性差异。3G11-SMBS-LDM偶联物更具有选择性抗肿瘤作用,疗效显著提高,荷瘤动物生存期延长,毒性明显降低,可能成为新的肿瘤治疗药物。

抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素偶联物的抗肿瘤作用

目的 观察抗IV型胶原酶单抗 3G11与力达霉素 (LDM)偶联物的抗肿瘤作用。方法 用MTT法测定其对肿瘤细胞的增殖抑制作用 ;用小鼠移植性肝癌H2 2观察体内抗肿瘤作用。结果 3G11 LDM偶联物保留了单抗3G11与IV型胶原酶和靶细胞H2 2细胞的结合能力 ,体外试验H2 2细胞显示比游离LDM更强的细胞增殖抑制作用。体内 3G11 LDM偶联物 0 0 5和 0 10mg·kg- 1 对小鼠移植性肝癌H2 2的抑瘤率分别为 87 8%和 97 2 % ,而游离LDM0 0 5mg·kg- 1 的抑瘤率为 6 7 1% ,且 3G11 LDM偶联物组小鼠的中位生存时间比LDM组明显延长。结论 3G11 LDM偶联物对小鼠移植性肝癌H2 2的抑瘤作用比LDM强 ,可能成为抗肿瘤靶向药物。

平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物的抗肿瘤作用

目的 研制一种以单抗Fab′片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法 制备单抗 3A5Fab′片段及其与平阳霉素 (PYM )偶联物Fab′ PYM后 ,测定Fab′ PYM与肿瘤细胞的免疫反应性、偶联物中PYM的抑菌活性、对肿瘤细胞的杀伤作用和体内抑瘤作用。结果 Fab′及Fab′ PYM保持了与靶细胞C2 6的免疫反应性 ;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的 15 % ;Fab′ PYM对C2 6细胞的杀伤作用强于PYM ;对非靶细胞KB的杀伤作用与PYM相似 ;ip和iv给药 ,Fab′ PYM对小鼠皮下接种的肠癌 2 6生长抑制作用均强于 3A5 PYM和PYM。结论 Fab′ PYM具有比PYM及 3A5

去甲斑蝥素与单克隆抗体偶联物治疗肝癌实验研究

用大鼠单克隆抗体３Ａ５与去甲斑蝥素（ＮＣＴＤ）制备偶联物。ＥＬＩＳＡ检测结果表明：３Ａ５ＮＣＴＤ偶联物保持对人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞和小鼠肝癌Ｈ２２细胞的免疫反应性。克隆生成法测定结果显示：３Ａ５ＮＣＴＤ具有比ＮＣＴＤ更强的细胞毒性。小鼠腹腔内移植肿瘤，ｉｐ给药，３Ａ５ＮＣＴＤ（３ｍｇ／ｋｇ）和ＮＣＴＤ的ＩＬＳ值分别为１１１％和３７％。结果说明在对腹腔肿瘤的治疗方面３Ａ５ＮＣＴＤ具有比游离ＮＣＴＤ更强的治疗作用。裸鼠移植ＢＥＬ７４０２人肝癌，ｉｖ给药，ＮＣＴＤ肿瘤抑制率为１５％（Ｐ＞００５），３Ａ５ＮＣＴＤ为６２％（Ｐ＜００１）；ｐｔ给药，ＮＣＴＤ肿瘤抑制率为４７％（Ｐ＜００５），３Ａ５ＮＣＴＤ为７８％（Ｐ＜００１）。与ＮＣＴＤ相比３Ａ５ＮＣＴＤ对裸鼠移植人肝癌具有更强的治疗作用。在给药途径方面，治疗效果ｐｔ强于ｉｖ。以上结果提示单克隆抗体与ＮＣＴＤ偶联物在肿瘤的导向治疗中有较好的疗效。