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BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究
被引量:
2
1
作者
茆春国
蒋莎莎
+4 位作者
范小青
隆谭
金花
谭群友
邓波
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第24期2366-2374,共9页
目的本研究旨在探索乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1,p130cas)在肺癌发生发展中的生物功能与互作蛋白网络。方法(1)免疫印迹实验(western blot)研究15对肺癌及癌旁组织中BCAR1表达情况,免...
目的本研究旨在探索乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1,p130cas)在肺癌发生发展中的生物功能与互作蛋白网络。方法(1)免疫印迹实验(western blot)研究15对肺癌及癌旁组织中BCAR1表达情况,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)分析54例早期肺腺癌组织芯片中BCAR1与预后的关系,并通过TCGA数据库进一步验证。(2)通过CRISPR/Cas9分别构建人肺腺癌H1975,H1299 BCAR1敲除(knock out,KO)细胞株,通过调取cDNA文库构建A549过表达(overexpression,OE)细胞株,四唑盐比色实验(MTT)检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞存活能力。(3)免疫共沉淀质谱分析(immunoprecipitation mass spectrometry,IP-MS)联合生信分析找出工具细胞即293T细胞中BCAR1的互作蛋白网络及可能的关键节点。(4)western blot验证细胞系BCAR1-KO或BCAR1-OE后关键节点基因的表达变化,并在肺癌组织芯片中予以验证基因表达的相关性。结果(1)western blot:BCAR1在肺腺癌组织较癌旁组织显著高表达(P<0.05);IHC:BCAR1高表达的早期肺癌患者预后差(HR=5.026,P=0.001),TCGA:BCAR1高表达肺腺癌患者预后差(HR=1.5,P=0.0087)。(2)成功构建BCAR1-KO与BCAR1-OE稳定细胞株,细胞增殖能力及细胞克隆形成率均随BCAR1敲除降低,过表达后升高。(3)IP-MS联合生信分析:哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8(MLST8)可能作为BCAR1的关键互作蛋白;(4)相比癌旁组织,MLST8在癌组织中高表达(P<0.05),并与BCAR1表达显著正相关(R=0.4221,P=0.0015)。细胞系中MLST8的表达在BCAR1敲除后降低,过表达后升高。结论BCAR1在肺癌中发挥重要的促瘤效应。MLST8表达与BCAR1显著相关,可能是BCAR1的关键下游蛋白。
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关键词
乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1
哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8
细胞增殖
细胞克隆形成
免疫共沉淀质谱分析
肺癌
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职称材料
题名
BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究
被引量:
2
1
作者
茆春国
蒋莎莎
范小青
隆谭
金花
谭群友
邓波
机构
陆军军医大学大坪医院全军胸外科研究所
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第24期2366-2374,共9页
基金
国家自然基金面上项目(81572285)
重庆市自然科学基金(CSTC2018jcyjAX0592)。
文摘
目的本研究旨在探索乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1,p130cas)在肺癌发生发展中的生物功能与互作蛋白网络。方法(1)免疫印迹实验(western blot)研究15对肺癌及癌旁组织中BCAR1表达情况,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)分析54例早期肺腺癌组织芯片中BCAR1与预后的关系,并通过TCGA数据库进一步验证。(2)通过CRISPR/Cas9分别构建人肺腺癌H1975,H1299 BCAR1敲除(knock out,KO)细胞株,通过调取cDNA文库构建A549过表达(overexpression,OE)细胞株,四唑盐比色实验(MTT)检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞存活能力。(3)免疫共沉淀质谱分析(immunoprecipitation mass spectrometry,IP-MS)联合生信分析找出工具细胞即293T细胞中BCAR1的互作蛋白网络及可能的关键节点。(4)western blot验证细胞系BCAR1-KO或BCAR1-OE后关键节点基因的表达变化,并在肺癌组织芯片中予以验证基因表达的相关性。结果(1)western blot:BCAR1在肺腺癌组织较癌旁组织显著高表达(P<0.05);IHC:BCAR1高表达的早期肺癌患者预后差(HR=5.026,P=0.001),TCGA:BCAR1高表达肺腺癌患者预后差(HR=1.5,P=0.0087)。(2)成功构建BCAR1-KO与BCAR1-OE稳定细胞株,细胞增殖能力及细胞克隆形成率均随BCAR1敲除降低,过表达后升高。(3)IP-MS联合生信分析:哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8(MLST8)可能作为BCAR1的关键互作蛋白;(4)相比癌旁组织,MLST8在癌组织中高表达(P<0.05),并与BCAR1表达显著正相关(R=0.4221,P=0.0015)。细胞系中MLST8的表达在BCAR1敲除后降低,过表达后升高。结论BCAR1在肺癌中发挥重要的促瘤效应。MLST8表达与BCAR1显著相关,可能是BCAR1的关键下游蛋白。
关键词
乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1
哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8
细胞增殖
细胞克隆形成
免疫共沉淀质谱分析
肺癌
Keywords
BCAR1
mammalian lethal with SEC13 protein 8
cell proliferation
cell colony formation
immunoprecipitation mass spectrometry
lung cancer
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
R394.3 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究
茆春国
蒋莎莎
范小青
隆谭
金花
谭群友
邓波
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
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职称材料
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