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BPHL与PML-C间相互作用的胞内、外验证
1
作者
初晨
刘北忠
+3 位作者
钟梁
吴秀娟
朱丹
吴燕
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期6-9,共4页
目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证人联苯样水解酶(BPHL)与缺失核定位信号的人急性早幼粒细胞白血病(PML)基因的coiled-coil的结构域(PML-C)蛋白之间的相互作用。方法将表达PML-C诱饵蛋白及BPHL靶蛋白的重组质粒pGBKT7-PML-C...
目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证人联苯样水解酶(BPHL)与缺失核定位信号的人急性早幼粒细胞白血病(PML)基因的coiled-coil的结构域(PML-C)蛋白之间的相互作用。方法将表达PML-C诱饵蛋白及BPHL靶蛋白的重组质粒pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交实验验证两者在活细胞内的相互作用。构建能在人胚肾293细胞中表达带HA标签的PML-C融合蛋白的重组载体pCMV-HA-PML-C,经酶切鉴定正确后,和表达带myc标签的BPHL融合蛋白的重组真核表达载体pCMV-myc-BPHL,共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证BPHL与PML-C间的相互作用。结果 pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆。构建的重组表达载体pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL经双酶切鉴定正确后共转染HEK293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-PML-C相互作用蛋白复合物后,用抗c-myc单克隆抗体进行Western blot检测,可以检测到myc-BPHL的表达蛋白。结论成功构建了pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL融合蛋白真核表达重组载体,利用酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术证实BPHL与PML-C之间存在着相互作用。
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关键词
人联苯样水解酶
早幼粒细胞白血病螺旋coiled—coil结构域
蛋白质相互作用
酵母双杂交
免疫共沉淀载体构建
原文传递
题名
BPHL与PML-C间相互作用的胞内、外验证
1
作者
初晨
刘北忠
钟梁
吴秀娟
朱丹
吴燕
机构
重庆医科大学附属永川医院中心实验室
重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室
出处
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期6-9,共4页
基金
国家自然科学基金(No.81171658)
重庆市自然科学基金计划重点项目(No.20011BA5037)资助
文摘
目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证人联苯样水解酶(BPHL)与缺失核定位信号的人急性早幼粒细胞白血病(PML)基因的coiled-coil的结构域(PML-C)蛋白之间的相互作用。方法将表达PML-C诱饵蛋白及BPHL靶蛋白的重组质粒pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交实验验证两者在活细胞内的相互作用。构建能在人胚肾293细胞中表达带HA标签的PML-C融合蛋白的重组载体pCMV-HA-PML-C,经酶切鉴定正确后,和表达带myc标签的BPHL融合蛋白的重组真核表达载体pCMV-myc-BPHL,共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证BPHL与PML-C间的相互作用。结果 pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆。构建的重组表达载体pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL经双酶切鉴定正确后共转染HEK293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-PML-C相互作用蛋白复合物后,用抗c-myc单克隆抗体进行Western blot检测,可以检测到myc-BPHL的表达蛋白。结论成功构建了pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL融合蛋白真核表达重组载体,利用酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术证实BPHL与PML-C之间存在着相互作用。
关键词
人联苯样水解酶
早幼粒细胞白血病螺旋coiled—coil结构域
蛋白质相互作用
酵母双杂交
免疫共沉淀载体构建
Keywords
BPHL PML-C Protein-protein interaction Yeast two-hybrid system Co-immu- noprecipitation Vector construction
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
BPHL与PML-C间相互作用的胞内、外验证
初晨
刘北忠
钟梁
吴秀娟
朱丹
吴燕
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
原文传递
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参考文献
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