免疫刺激序列增强日本血吸虫DNA疫苗的免疫保护作用

目的 探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。 方法 将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40只雌性BALB/c小鼠随机分为 4组 ,① pcDNA3 1对照组 ;②pcDNA3 1 SjC2 3组 ;③ pcD NA3 1 CpG组 ;④ pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG组。每鼠经两侧股四头肌注射质粒DNA共 10 0 μg ,隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴 45条 /鼠 ,45d后计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前和感染前 2d分别经尾静脉采血 ,检测IgG及IgG1、IgG2a。末次免疫后 3周取小鼠脾细胞 ,检测经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后小鼠白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 4(IL 4)和γ干扰素 (IFN γ)。用51Cr释放法检测经SjC2 3重组蛋白刺激后脾细胞对小鼠淋巴瘤细胞的杀伤作用。 结果 ②组和④组减虫率分别为 2 8 1%和 3 5 1% ,减卵率分别为 2 1 6%和 2 6 5 %。④组减虫率显著高于②组 (P <0 0 5 )。这两组均检测到特异性IgG ,IgG2a/IgG1比值分别为 10 1和 12 2。脾细胞经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后的IL 2水平 ,②组较①组、④组较③组均有升高。②组脾?

通过T-A克隆技术构建含免疫刺激序列CpG基序的抗SBR DNA疫苗(英文)

目的 :构建含免疫刺激序列、能够阻止变形链球菌在牙面粘附的防龋DNA疫苗。方法 :根据原核表达质粒 pS BR CTA2 B基因序列 ,设计针对编码变形链球菌表面蛋白抗原AgⅠ /Ⅱ分子中唾液蛋白结合区段 (SBR)的特异性PCR引物 ,利用PCR技术由质粒 pSBR CTA2 B扩增目的DNA片断 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于中间载体 pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,选择插入方向正确的克隆 ,将目的DNA从中间载体释放 ,再克隆至含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 1。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 1 SBR进行酶切图谱分析和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒 pcD NA3 1 SBR构建成功、开放阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码SBR的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体 pcDNA3 1的适当部位 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA 3 1

免疫刺激序列对鼠实验性过敏性结膜炎的作用研究

目的构建豚草花粉诱导的小鼠过敏性结膜炎动物模型,观察免疫刺激序列胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(cytidine-phosphate-guanosine,CpG)DNA对过敏性结膜炎的免疫刺激作用。方法将16只BALB/c小鼠分为CpG DNA实验组和对照组,每组各8只,均于左足部局部注射豚草花粉和氢氧化铝悬浮液进行初次致敏,在注射后第14天右眼结膜囊内滴用豚草花粉溶液进行再次致敏;其中CpG DNA实验组在再次致敏前3d给予CpG DNA滴眼,对照组给予PBS滴眼。观测指标包括症状得分、眼穹隆部结膜嗜酸性粒细胞的数量及结膜IL-12p40 mRNA的表达情况。结果 CpG DNA实验组小鼠仅偶有眼睑或球结膜充血水肿等过敏反应,眼局部反应均较对照组明显减轻(均为P<0.01)。CpG DNA实验组临床症状得分为(5.50±1.60)分,明显低于对照组的(10.88±1.73)分,差异有统计学意义(t=3.560,P=0.003)。CpG DNA实验组小鼠穹隆部结膜组织中嗜酸性粒细胞每高倍视野镜下细胞计数为(16.12±9.31)个,明显少于对照组的(67.25±20.63)个,差异有统计学意义(t=6.39,P<0.01)。CpG DNA实验组结膜组织中IL-12p40 mRNA的表达上调,是对照组IL-12p40 mRNA相对表达量的9.2倍。结论在致敏初始阶段给予CpG DNA能够明显抑制小鼠过敏性结膜炎的过敏反应和晚期炎症反应,其作用可能与CpG DNA诱导IL-12p40过表达有关。

免疫刺激序列对大鼠实验性变应性鼻炎的作用研究

目的探讨免疫刺激序列(CpGDNA)对大鼠变应性鼻炎模型形成的干扰作用。方法在大鼠变应性鼻炎模型初始致敏阶段,给予CpGDNA腹腔注射,观察其对模型形成的影响。观测指标包括症状得分、鼻黏膜局部及骨髓嗜酸粒细胞表达、鼻黏膜IL-4和IFN-γmRNA表达、脾细胞培养IL-4和IFN-γ表达情况。结果与阳性对照组相比,给予CpGDNA后大鼠变应性鼻炎模型症状得分减少,鼻黏膜局部及骨髓中嗜酸性粒细胞减少,鼻黏膜IL-4mRNA产生减少,而IFN-γmRNA产生显著增多。脾细胞培养上清中IL-4明显减少,IFN-γ浓度则显著增高(均P<0.05)。结论在致敏初始阶段给予CpGDNA对大鼠变应性鼻炎模型形成具有明显的干扰作用,可抑制变应性鼻炎模型的形成。

免疫刺激序列CpG的构-效关系

免疫刺激序列CpG是近年来研究的热点;其特征结构如CpG核心、侧翼序列及其回文、磷酸成糖骨架等都对免疫刺激特性有重要影响。本文就其构-效关系作一综述。

含CpG免疫刺激序列的乙型肝炎DNA疫苗的体液免疫效果

目的构建含CpG免疫刺激序列的乙型肝炎DNA疫苗 ,评价其体液免疫效果。方法通过PCR方法从重组真核表达质粒pcDNA S2 S扩增出含CpG免疫刺激序列的乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原中蛋白 (preS2 +S)基因片段 ,将其亚克隆于含卡那霉素抗性基因的pVAX1真核质粒表达载体中 ,构建出重组真核表达质粒pVAX S2 S ,并按不同剂量一次性肌肉注射免疫BALB c小鼠。结果pVAX S2 S高、中、低 3个剂量组均能在 2周诱导抗 HBs产生 ,抗体效价随时间延长而增加。血清抗体水平比较 ,高剂量组 [(131.2 7± 2 5 .4 9)mIU ml]较中剂量组 [(5 6 .17± 12 .0 6 )mIU ml]、低剂量组 [(2 1.38± 7.73)mIU ml]高 ,差异均具非常显著性 (P <0 .0 1) ,以后第 4周高、中剂量组间差异依然非常显著 (P <0 .0 1) ,在第 8周高、中剂量间差别缩小 ,但两者较低剂量组差异均具非常显著性 (P <0 .0 1)。结论pVAX S2

免疫刺激DNA序列对粉尘螨诱导的Th1和Th2细胞因子的调节作用

目的 研究免疫刺激DNA序列 (ISS)对螨性过敏性哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)经粉尘螨变应原 (Df)诱导的Th1和Th2细胞因子的调节效应。方法 分离螨性过敏性哮喘患者及正常人PBMC ,加入ISS和Df刺激培养 ;以酶联免疫吸附试验检测培养上清中IFN γ、IL 12及IL 5含量 ;用荧光免疫酶标法检测患者血清中Df特异性IgE ,并作统计相关性分析。 结果 无论正常人还是患者PBMC加入ISS和Df刺激培养后 ,其上清中IL 12、IFN γ的含量较Df和对照序列刺激组明显增高 ,而IL 5却明显降低。正常对照组PBMC经ISS及Df刺激后产生的IFN γ、IL 12水平明显高于患者组 ,而IL 5则相反。患者组PBMC经ISS及Df刺激后产生的IL 12与IFN γ呈明显正相关。结论 ISS对正常人及螨性变态反应患者PBMC具有显著增强尘螨变应原诱导的Th1细胞因子表达 ,并抑制Th2细胞因子产生的作用 ,在尘螨变态反应疾病的治疗中具有潜在的临床价值。

CpG免疫刺激DNA序列及其在疫苗佐剂中的应用

CpG免疫刺激DNA序列(ISS)是一种新型疫苗佐剂,可不同程度地提高多种类型疫苗的抗原特异性的免疫反应。按照结构特点的不同,可将CpGISS分为3种类型。CpGISS能够刺激B细胞和浆样树突状细胞,促进机体产生Th1和前炎症细胞因子,且促进抗原呈递细胞的激活和成熟。目前已完成的临床实验结果表明,CpG作为人用佐剂安全,且在一定程度上能够增加疫苗的免疫反应。

CpG DNA中ISS数量与免疫刺激效果间的关系初探

目的 :研究CpG免疫刺激DNA中免疫刺激序列 (ISS)的数量与免疫刺激效果间的关系。方法 :将 3种CpGODN(分别含 2 ,4,8个ISS)与甲型肝炎灭活疫苗混合 ,通过腹腔注射途径免疫小鼠 ,于免疫后 4,6 ,8w采血 ,用全自动微粒子酶联免疫测定分析检测抗HAVIgG水平。结果 :含 2个ISS的CpGODN具有较好的佐剂效应 ,能增强甲型肝炎灭活疫苗的免疫效果 ,含 4个ISS的CpGODN不具有免疫刺激作用 ,而含 8个ISS的CpGODN则抑制了甲型肝炎灭活疫苗所诱导的免疫反应。结论 :适当长度的CpGODN(含 2个ISS)可作为有效的佐剂来增强疫苗的免疫效果 ,而当其中的ISS含量过多 。

增强CpG免疫刺激作用途径的研究进展

CpG基序（CpG motifs）是指含有非甲基化的胞嘧啶（C）和鸟嘌呤（G）核苷酸核心的寡聚脱氧核苷酸（ODN）序列，又称为免疫刺激序列，一般为6个寡聚核苷酸。

人工合成免疫刺激DNA联合HBsAg DNA疫苗在HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 :探讨免疫刺激DNA序列联合基因免疫在HBV转基因鼠的免疫应答。方法 :用人工合成硫代修饰的免疫刺激DNA寡核苷酸 (CpGODN)与HBVS区基因真核表达载体 (V HBs)联合免疫HBsAg转基因鼠 ,通过ELISA观察小鼠血清HBsAg及抗 HBs抗体水平 ,并用免疫组化 (SP法 )及病理HE染色观察小鼠肝组织HBsAg表达量的改变及肝组织炎症活动度。结果 :V HBs联合CpGODN组 6只免疫鼠中有 2只血清抗 HBs抗体阳性 ,其平均效价为 (5 6 2 1± 15 16 )mU ml,血清HBsAg浓度在免疫后第 8周时有 2只转阴 ,而单用V HBs组及V 10 12对照组小鼠血清抗 HBs抗体均阴性、HBsAg含量无明显降低。V HBs +CpGODN组肝组织HBsAg的表达量低于V HBs组及对照组 ,并可见大量炎细胞浸润 ,炎症组织活动度积分明显高于V HBs组及对照组。结论 :CpGODN联合V HBs可增强其免疫应答及抗病毒效应。

日本血吸虫SjC23 DNA疫苗基因枪免疫小鼠诱导免疫保护作用的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 DNA疫苗基因枪免疫诱导 BAL B/ c小鼠产生的抗血吸虫感染作用。方法 6 0只雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 6组 :pc DNA3.1组 (对照组 ) ,每只小鼠用基因枪经腹部皮肤免疫 pc DNA3.1质粒 DNA2次 ,共 2 μg;Sj C2 3基因枪 (gg)组 ,每鼠用基因枪免疫 pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA2 μg;Sj C2 3肌注 (im)组 ,每鼠肌注 10 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA;Sj C2 3/ Cp G(gg)组 ,每鼠用基因枪免疫 pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA2 μg;Sj C2 3/Cp G(im)组 ,每鼠肌注 10 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA;联合免疫组 ,每只小鼠先肌注 10 0μg pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA,第 2天用基因枪免疫 2 μg。各组小鼠隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周每鼠经腹部皮肤攻击感染 (45± 1)条日本血吸虫尾蚴 ,4 5 d后剖杀 ,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前 2天及感染前 2天经尾静脉采血检测 Ig G抗体水平及抗体亚类 Ig G1 、Ig G2 a。末次免疫后 3周检测脾细胞经 Con A和 r Sj C2 3- HD刺激后培养上清中鼠 IL- 2、IL- 4和 IFN- γ的水平。结果 Sj C2 3(gg)组、Sj C2 3/ Cp G(gg)组及联合免疫组小鼠所检成虫数均低于对照组 (P均 <0 .0 1) 。

CpG DNA在寄生虫感染免疫中的作用

近年研究发现,细菌胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpGDNA)和合成的含CpG序列的寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)具有强烈的非特异性的免疫刺激作用,其共同特征为都含有一些具有免疫学活性的短核苷酸序列.

增强DNA疫苗免疫应答的新进展

DNA疫苗为编码抗原蛋白的真核表达载体,注入体内后在原位表达所编码的抗原并诱导免疫应答,在预防感染、治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病和肿瘤等疫病中有着很好的应用前景。但与灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低。有多种策略能够增强或调节DNA疫苗诱导的免疫应答,其中,作为外源基因载体的质粒的组成及插入的有关基因均可直接或间接地影响免疫反应的效果,在构建DNA疫苗质粒时,加入细胞因子、融合信号、泛素等基因以及ISS序列,另外还可以通过设计一些对抗原提成细胞有影响的分子共注射,以及加入转移分子,都可以明显增强DNA疫苗的免疫效果,从而有利于研制更有效的DNA疫苗。