环氧合酶的免疫印迹法及操作

[目的]以环氧合酶-2(COX-2)为例,详细介绍本实验室常用的免疫印迹法,并明确实验操作中应注意的细节。[方法]总蛋白抽提及定量、SDS-PAGE、半干转印、特异性抗体结合及ECL检测。[结果]采用本法操作简便,有很好的重复性,本实验室多次成功运用于COX-2蛋白的检测。[结论]此法在本实验室多次运用,可靠、重复性强,明细实验操作细节更有利于初学者顺利地开展实验,值得应用与推广。

免疫印渍技术用于斯氏并殖吸虫病抗原检测的研究

采用免疫印渍技术分析了斯氏并殖吸虫 30、60和 90d虫体抗原组份与斯氏、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫、血吸虫、囊虫、包虫病人和健康人血清反应情况。结果发现斯氏和卫氏并殖吸虫病人血清均可识别 9条抗原多肽 ,分子量分别为 1 7、2 7、2 9、35 5、37 5、60、72和 90kDa ,其中 35 5、37 5和 39kDa三条抗原带可 1 0 0 %同 2种并殖吸虫病人血清起反应 ,特异性达 1 0 0 %。 72和 90kDa抗原多肽可与其他寄生虫病人和正常人血清发生交叉反应。不同虫龄期的抗原在反应条带上无明显区别 ,但以 30d龄虫体抗原的显色更清晰。结果提示 35 5、37 5、和

一种简便快速的蛋白质免疫印渍法介绍

一种简便快速的蛋白质免疫印渍法介绍骆爱玲，王继伟，李佳格（中国科学院植物研究所，北京１０００４４）ＡＳＩＭＰＬＥＭＥＴＨＯＤＦＯＲＰＲＯＴＥＩＮＢＬＯＴＴＩＮＧＡＮＤＬＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹＬｕｏＡｉ－ｌｉｎｇ；ＷａｎｇＪｉ－ｗｅｉ；Ｌｉｊｉａ－ｇｅ（...

免疫印渍技术诊断斯氏狸殖吸虫病的初步研究

本文在免疫印渍技术分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原成分,显示22、24、26kD抗原蛋白对该病具诊断价值的基础上,将免疫印渍技术诊断16例斯氏狸殖吸虫病人,结果全呈阳性反应;同时检测的24例对照血清中,10例日本血吸虫病人、4例华支睾吸虫病人、10例正常人均呈阴性反应。结果进一步表明22、24、26kD抗原蛋白为斯氏狸殖吸虫的特异性诊断抗原,免疫印渍技术为斯氏狸殖吸虫病的高度特异、敏感的一种新型诊断方法。

镰孢体外抗原的电泳及免疫印渍分析

用SDS-PAGE及免疫印渍法分析了三种镰孢的体外抗原(exoantigen)和菌丝体可溶性蛋白质的部分特性,并研究了培养基对体外蛋白质含量的影响。结果表明,在电泳分析中,三种镰孢体外抗原及菌丝体可溶性蛋白质均具有各自菌种的特征,可作为菌种分类鉴定的重要指标。免疫印渍分析显示,体外抗原更适于用作免疫分类鉴定的指标,因为用体外抗原免疫动物所产生的抗体的特异性比菌丝体可溶性蛋白质要好。三种镰孢的体外抗原的抗体与种间菌株均有程度不等的交叉反应,但却不与谷物发生任何交叉反应,可用于谷物中镰孢的快速检测。在镰孢体外抗原中,能刺激机体产生抗体的抗原分子量在28000以上。葡萄糖酵母膏培养基比蔗糖硫酸铵培养基更适于体外抗原的产生。

单克隆抗体J28免疫印渍与花生凝集素印渍检测胚胰腺泡蛋白的比较

20例胚胎胰腺、5例胰腺癌、4例正常胰腺提取物行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、单克隆抗体J28免疫印渍和花生凝集素印渍,结果发现考马斯亮蓝染色后胚胎胰腺和胰腺癌提取物有一相同条带,分子量约为110000,这一条带即是胚胰腺泡蛋白(FAP,它可与单克隆抗体J28和花生凝集素结合,正常胰腺无此条带。花生凝集素还可以和胰腺癌组织中分子量更小的糖蛋白结合,说明FAP分子上有单克隆抗体J28和花生凝集素的不同位点。

应用免疫印渍法检测猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性

为了研究猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性，应用免疫印渍术对其抗原组分进行了检测．实验结果表明，鱼卵透明带抗原与已知具有精子受体活性的猪ＺＰ３抗原，甚至猪全ＺＰ抗原均没有交叉反应．提示鱼卵透明带不含有与猪和人等哺乳类的透明带免疫学相类似的抗原决定簇．

日本血吸虫成虫抗原等电点聚焦电泳和免疫印斑试验的初步分析

用聚丙烯酰胺凝胶等电点聚焦(PAG-IEF)电泳分离日本血吸虫成虫抗原,出现25个不同等电点(pI)的蛋白带,均在酸性区内。通过酶联免疫印斑试验,发现有6条主带可被血吸虫病人血清和重感染兔血清识别,其中有2条带与布氏姜片吸虫病人血清有交叉(起微弱的结合)反应,其余4条主带与布氏姜片吸虫、华支睾吸虫和卫氏并殖吸虫病人血清均无交叉反应。

人血清载脂蛋白（a）多态性的免疫印迹技术测定及应用

脂蛋白（ａ）是冠心病的独立危险因素，其血浆水平不同程度地受载脂蛋白（ａ）多态性影响。应用载脂蛋白（ａ）单克隆抗体建立的血清载脂蛋白（ａ）多态表型免疫印迹分析技术，特异性强，灵敏度高，在２３０例人群中初步应用，表型检出率达７９．６％，该方法有助于对冠心病易感人群进行预测预防。

免疫印渍法检测包虫病人抗体及其在临床和流行病学上应用的探讨

本文报告了用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印渍法(Western Blot,WB)检测包虫病人血清抗体以及在流行病学调查中同时使用两种血清学方法进行抗体检测的结果,WB 法主要是以肉眼观查38kDa抗原带(抗原5)来判定结果。此项试验结果表明,以38kDa 反应区带为诊断依据的免疫印渍法在敏感性和特异性上均低于 ELISA.对一个未知地区进行包虫病的流行病学调查时,使用 ELISA 方法比 WB 法更为合适,因此应当进一步探索提高 WB 诊断价值的途径.

四株抗细粒棘球蚴囊液抗原单克隆抗体的免疫印渍分析

本文报告了应用免疫印渍法(Western Blot)分析2F1、2F10、2G4和 D5四株抗细粒棘球蚴囊液抗原的单克隆抗体的实验结果。用浓缩人肝细粒棘球蚴囊液经 SDS—PAGE 电泳分离后,转印硝酸纤维膜。用4株单克隆抗体识别的结果表明。2F1识别的抗原表位存在于分子量为38kDa,28kDa、20kDa 和14kDa 的多肽链上;2F10识别的抗原表位存在于38kDa、28kDa 的肽链上,38kDa 的反应带很淡,说明这一肽链上2F10抗原表位的密度很低;2G4仅识别位于38kDa 上的抗原表位;而 D5则识别的主要是28kDa、20kDa 和14kDa肽链上的抗原表位。这一结果说明这4株单克隆抗体是针对不同抗原表位的抗体,而2F1识别的抗原表位较广泛地存在于分子量范围较广的不同肽链上,应当是细粒棘球蚴囊液的主要抗原表位。实验结果还表明同一种抗原表位存在于被划分为抗原5和抗原 B 的不同肽链上。因而对至今公认的细粒棘球蚴囊液的主要抗原为抗原5和抗原 B 的概念提出了新的看法,这对于今后细粒棘球绦虫抗原的研究可能有重要意义。

用酶联免疫印渍技术分析绵羊东毕血吸虫成虫抗原

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、电泳转印技术和固相免疫标记技术结合的酶联免疫印渍技术（ＥＴＩＢ），首次分析东毕血吸虫成虫抗原。抗原蛋白组分显示：ＳＤ－ＰＡＧＥ共将绵羊东毕血吸虫成虫抗原分离出４２条带；经ＥＴＩＢ分析，与阳性血清反应有１２条带，其中主带有４条，分子量分别为３５、８０、９２和９４ｋＤ，试验表明，这四个分子量的蛋白质具有较强的反应原性，可做为东毕血吸虫的诊断抗原。

免疫印渍试验在斯氏肺吸虫病血清学诊断中的意义

应用免疫印渍试验（Immunoblottingtest）分析斯氏肺吸虫成虫、幼虫和囊蚴期的虫体可溶性抗原．结果显示感染斯氏肺吸虫的人和动物血清可识别22、24和26KD抗原蛋白带．依据病人血清对上述抗原组仿的识别，用免疫印渍试验诊断24例斯氏肺吸虫病人，皆为阳性，而对照组显阴性．与Dot－ELISA比较试验的敏感性和特异性，两试验的阳性检出事无显著性差异（P＞0．05）．Dot-ELISA的交叉反应率为18．75％（6／32），而免疫印渍试验无交叉反应．表明斯氏肺吸虫的22、24和26KD蛋白带为特异性诊断抗原，免疫印渍试验为斯氏肺吸虫病的高度敏感和特异的血清学诊断方法．

尘螨变应原的免疫印渍法分析

尽管粉尘螨浸液中的许多蛋白具有变应原性,但进一步用免疫印渍法分析,它们又分成若干能和哮喘患者的IgE结合的较小组分,这些组分是异质的并显示出不同的图谱。与皮肤挑刺试验、ELISA比较:免疫印渍法中IgE抗F_1和皮肤挑刺试验阳性、阳性符合率达91%,免疫印渍法和ELISA法测IgE结果在统计上显著相关(r=0.7029 p<0.01)。因此本文提出:具有小分子量的变应原组分可形成众多的分子量较大的变应原,其中F_1(MW1800 OD)是主要变应原组分。

免疫印渍技术诊断耕牛血吸虫病

酶联免疫印渍技术(下称EITB)是近几年发展起来的新技术,它结合了SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)的高分辨力和酶联免疫反应的高敏感性和特异性,已成为生物化学、免疫化学和分子生物学等研究领域中的一项十分有用的分析手段。这几年该技术已被应用于分析寄生虫抗原及寄生虫病的免疫诊断。本文应用SDS-PAGE分析了血吸虫尾蚴、成虫、虫卵抗原及肝片吸虫成虫抗原,并对EITB在耕牛血吸虫病免疫诊断上的应用价值作了初步的探索。

免疫印斑试验对兔日本血吸虫病疗效考核实验研究

采用以日本血吸虫成虫表膜31／32KG蛋白为抗原的免疫印斑试验（enzymeimmuno－transferblotting．EITB）对兔日本血吸虫病，经吡喹酮治疗后的疗效考核实验结果表明，该试验具有优于粪检、IHA、COPPT方法的特点，对疗效考核和诊断具有一定的价值。

酶联免疫印渍法检测脑囊虫病人循环抗原

用猪囊尾蚴抗原免疫纯系家兔制备免疫兔血清，以酶联免疫印渍法检测脑囊虫病人血清中循环抗原。４０例脑囊虫病人分别出现１～４条特异反应带，分子量为５３、２３、１９、１７．５ＫＤ；各带出现率分别为９０％、７５％、６７．５％和８７．５％。２０例单纯绦虫病患者和２０例正常人，除１例绦虫病人呈交叉反应（１９ＫＤ）外均为阴性。结果表明来源广、制备方便的免疫兔血清检测诊断脑囊虫病具有较高的特异性和敏感性。

用免疫印渍法对北海道人类泡球蚴病流行程度的评价

最近几年从多房棘球绦虫(E.m)地方性流行区的居民中采集了许多血清样品,用以监测人类泡球蚴病。1987和1988年,总共来集了154636份血清,然后主要根据

免疫印渍法检测寄生虫抗原的研究

寄生虫病的诊断包括病原学诊断和免疫学诊断,病原学诊断虽具有确诊疾病的优点,但容易漏诊.免疫学诊断包括皮内反应和血清学诊断,皮内反应特异性较低,只供初次筛选患者用;血清学诊断包括应用不同的反应方法检测特异性抗体或抗原.检测血清中抗体时,由于存在假阴性、假阳性或交叉反应等缺点,且治愈后患者也可出现抗体阳性反应,因而其诊断的可靠性受到影响.