蛋白质免疫印迹技术在本科实验教学中的应用

蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点,对实验内容和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,使学生能够深入、全面、系统地理解和掌握蛋白质免疫印迹技术,提高了实验教学质量,并有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。

用蛋白印迹确认实验检查“人类免疫缺陷病毒抗体不确定”结果的分析

目的探讨蛋白印迹实验(WB)“人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体不确定”结果的特点、产生的原因、WB确认实验存在的问题及可能的改善措施。方法归纳分析本实验室2004～2005年的WB检测结果为“HIV抗体不确定”者的人群分布特点、实验检测特点、受检者随访复检及抗体转归情况。结果“HIV抗体不确定”者人员构成中相对健康的自愿咨询检测者、献血员以及孕产妇占50%,“HIV抗体不确定”者随访困难、复检率较低;WB实验存在假阳性、尤以P24带较为严重。结论“HIV抗体不确定”结果与WB实验的假阳性有关,实验室应采取应对措施尽可能减少“HIV抗体不确定”及对结果进行准确解释。

以学为中心的“免疫印迹”实验课程设计

为积极促进学生的优质学习和实践、探究、创新、合作等能力的全面发展,基于"以学为中心"这一先进的教学理念设计了"免疫印迹"实验课程。此课程设计围绕学生的自主知识构建,综合运用主动学习、合作学习、探究式学习、基于问题的学习等多项教学策略,以师生交流平台和学习资料库为前提,创建了课前、课堂、课后三位一体的学习情境,成功地将教学活动的中心由教师转移到学生。

蛋白免疫印迹法(WB)试验结果与HIV感染关系的分析

目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染的状况。方法对60份抗-HIV初筛阳性血清使用蛋白免疫印迹法(WB)进行确认实验。结果在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性54例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占1.6%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)3例,占5%;HIV-1型确认试验阳性2例,占3.3%。结论蛋白免疫印迹法(WB)试验确定个体有无HIV感染以及HIV感染情况提供依据。

免疫印迹法在实验大鼠汉坦病毒监测中的应用及与间接免疫荧光法之比较

用汉坦病毒汉滩株（７６－１１８）重组核蛋白作为免疫印迹法（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ以下简称ＷＢ）的诊断抗原，用于实验感染大鼠血清抗体效价测定。同时与用汉城株（ＳＲ－１１）感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞作抗原的间接免疫荧光法（以下简称ＩＦＡ）进行比较。ＷＢ法对３／４标本在大鼠接种病毒后第３天测得血清ＩｇＭ阳性，而ＩＦＡ法仅１／４标本出现阳性，ＩＦＡ效价为１：５１２０的血清，ＷＢ效价为１’：４０９６０，且在血清１：１０稀释时反应带亦清晰。两种方法分别测定６４份大鼠血清。甩ＩＦＡ法，４４份（６８．８％）出现类似阳性的荧光颗粒，而用ＷＢ法测定，无特异的反应带出现。非感染Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞作ＩＦＡ抗原，３０份（４６．９％）与正常细胞抗原有反应，此结果表明ＷＢ法在特异性和敏感性方面均高于ＩＦＡ法。ＩＦＡ法中的非特异性反应系血清与细胞成份之反应。

蛋白质免疫印迹技术在大学生创新实验中的应用

在生物功能研究过程中,通常需要从混合蛋白中区分、检测目标靶蛋白,而蛋白免疫印迹技术能较好的实现该目的.蛋白免疲印迹技术是一种先择性地结合被分离混合物中特异蛋白的分析技术,具有灵敏度高、特异性强、分辨率高、分析容量大,可对蛋白进行定性、定量分析,检测蛋白的时空表达变化情况,被广泛应用于蛋白定性实验技术中.为在大学生创新实验中推广该技术,本教学实验以贵州大学本科生为对象,课程的主要内容包括了解蛋白印迹法的原理、目标蛋白载体的构建、蛋白可溶性表达、PAGE胶制作,以及蛋白质免疫印迹试验.该教学可提高学生对蛋白免疫印迹技术原理和实验操作技能的认识和掌握,同时训练学生在科研中的能力.

Nova1的两种抗体的免疫印迹实验的比较

目的探讨两个不同公司的同一种抗体神经-肿瘤腹侧抗原(Nova1)在大鼠脑组织中的表达,比较其异同.方法采用免疫组织化学法(IHC)和Western-blot(WB)进行检测.结果 IHC显示Nova1在大脑中分布广泛,在神经细胞的轴突或树突中都有表达;WB显示在55 kDa处都有很清晰的条带.结论这两种抗体的表达清晰,既可以用于IHC,也可以用于WB实验.

免疫印迹实验及麻风菌抗原血清学活性的初步研究

初步分析了自己建立的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)与免疫印迹试验(WB)及其应用于麻风菌(ML)和有关分支菌(AFB)抗原分析的结果,表明受试各菌都有自己独特的SDS—PAGE谱和WB反应谱。ML的WB反应带与有关报导大多相符,虽未能显示28KD,但发现ML有新的55KD反应带。作者认为,这些结果及特性可用于菌株鉴别和筛选血清试验用的吸收剂,对分析和寻找用于血清试验和疫苗的抗原及分离提纯这些抗原有相当的潜力。作者对实验方法及应用技巧作了详细描述,分析麻风菌(ML)抗原及其免疫活性对了解ML的抗原组成,探索麻风诊断、分型乃至发病机理都有重要意义。对此,国外已有些报道,但国内尚未见。

新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS免疫印迹试验条带与CD~+_4T淋巴细胞检测结果分析

目的 分析新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS免疫印迹试验(WB)条带与CD~+_4T淋巴细胞计数(CD4细胞数)的关系,了解不同疾病进程的WB条带特征。方法 收集新疆伊犁州2018—2022年767例新确证的HIV/AIDS基本信息、WB条带情况和确证阳性3个月内首次CD4细胞数检测结果,并根据CD4细胞数将病例分为<200、200~499、≥500个/μL 3个组,分析组间条带差异。结果 767例新诊断HIV/AIDS的WB条带中,gp160、gp120、gp41检出率分别为100%、99.48%、86.96%;p66、p51、p31检出率分别为98.83%、97.52%、92.70%;p24和p17检出率分别为99.61%和91.13%,p55和p39检出率分别为4.56%和6.39%;p24和p17条带在CD4细胞数<200个/μL组的检出率低于200~499个/μL组和≥500个/μL组(P﹤0.05);8条带型最多,占72.36%,随着CD4细胞数的上升,7条及以下带型占比呈下降趋势(χ~2_(趋势)=4.28,P=0.04),也表示随着CD4细胞数的下降,条带数量减少。结论 人体感染HIV后,随着疾病进展,WB条带会出现一定程序的缺失。综合分析WB条带特征和CD4细胞水平,可准确评估患者疾病进程。

肿瘤混合粘液核芯肽诱发小鼠免疫反应实验研究

我们采用凝胶过滤和密度梯度离心技术从胰腺癌细胞株SW1990细胞匀浆和细胞培养上清中提取了肿瘤粘液，用无水氧氟酸方法去掉糖链后获得粘液核芯肽，经PAGE和SDS-PAGE及免疫印迹分析表明．从细胞匀浆和细胞培养上清提取的粘液为同一成份。分子量为670kD，亚单位为28kD，以二硫链相连，

765份HIV-1抗体阳性吸毒者标本蛋白免疫印迹带型分析

目的:分析HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型,了解我省吸毒人群WB带型的分布特征。方法:对本实验室2001至2003年的HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型进行统计分析。结果:765份HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型中,gp160、gp120、p24、p66、p51带型的出现率都在96%以上,gp41、p31带型的出现率分别为93.86%和91.37%;WB全带型出现率为57.12%(437/765);性别与WB带型的出现率差异无统计学意义;不同年龄组与出现p24带型差异有统计学意义(Х2=19.5,P<0.01)。结论:抗env和gag基因编码蛋白的抗体gp160、gp120、gp41、p24阳性率高,是确证HIV-1感染的必备条件;我省的HIV亚型、传播途径和WB带型之间的关系有待进一步的研究。

骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用

目的探讨骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型的治疗作用及其可能机制。方法全骨髓贴壁筛选法分离培养Lewis大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测其表面分子CD34、CD44的表达。经Lewis大鼠尾静脉注射经体外培养至第3代的骨髓间充质干细胞,7d后腹腔注射抗乙酰胆碱受体单克隆抗体(mAb35)建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型,按照Lennon评分标准进行临床症状评分、Western blotting法检测肌肉组织中乙酰胆碱受体蛋白表达、流式细胞术检测外周血CD4+CD25+T细胞比率、酶联免疫吸附试验检测血清转化生长因子-β、干扰素-γ和IL-4表达变化。结果与生理盐水对照组相比,注射骨髓间充质干细胞的实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型临床评分降低(t=8.062,P=0.000),乙酰胆碱受体α蛋白表达水平升高(t=8.092,P=0.000);同时血清转化生长因子-β表达水平升高(t=9.859,P=0.000),干扰素-γ(t=9.040,P=0.000)和IL-4(t=3.320,P=0.004)表达水平降低,两组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞能够显著减轻实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型临床症状,减少乙酰胆碱受体缺失。其作用机制可能与分泌免疫抑制性细胞因子转化生长因子-β上调CD4+CD25+调节性T细胞表达水平,以及抑制炎性促进因子干扰素-γ和IL-4的分泌有关。

免疫印迹法检测肝纤维化组织基质金属蛋白酶抑制因子-1表达水平

目的 观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)蛋白表达水平的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型 ,采用免疫印迹方法 (Westernblot法 ) ,测定肝纤维化不同阶段TIMP 1的蛋白表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见TIMP 1的蛋白表达。在肝纤维化的发生、发展过程中 ,TIMP 1蛋白表达逐渐增强 ,到肝硬化阶段达到高峰。结论 TIMP 1可能是促进和影响肝纤维化。

蛋白免疫印迹法试验结果与HIV感染关系的探讨

目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染状况。方法对50份抗-HIV初筛阳性血清使用WB法进行确认实验。结果在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性45例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占2%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)2例,占4%;HIV-1型确认试验阴性2例,占4%。结论WB法试验为确定个体有无HIV感染以及HIV感染状况提供依据。

重组免疫印迹试验在HCV感染中的应用价值

随着丙型肝炎(HC)研究的逐步深入,丙肝病毒(HCV)感染的血清学检测方法不断改进和完善。近年来建立的重组免疫印迹法(RIBA)检测抗-HCV,尤其是第二代RIBA的应用表明,RI-BA具有敏感性高、特异性强的优点,是诊断HCV感染的非常有价值的方法。本文就RIBA检测抗-HCV的临床应用现状及其在诊断中的意义作一简述。

免疫印迹技术的模拟方法

目的节约实验经费，解决标本来源困难问题。方法用羊抗人IgG包被在硝酸纤维素膜（NC膜）上的不同位置代替核抗原（ENA）的电泳分离模拟免疫印迹技术实验。结果按需要可观察到7种不同阳性结果。结论本法可作为免疫印迹技术实验的模拟方法，经济、实用，又可提高教学效果。

人类免疫缺陷病毒感染的实验室检测

人类免疫缺陷病毒(HIV)是艾滋病(AIDS)的病原。人受HIV感染后,有较长时间的无症状带毒,一般为2～6年,有的带毒时间可更长。由于无症状的HIV感染者能成为重要的传染源,所以HIV感染的检测尤为重要。本文就此进行简要综述。

免疫印迹法检测血清抗Sa抗体方法的建立

目的：建立免疫印迹法检测血清抗Sa抗体，并对其敏感性、特异性和稳定性进行评价。方法：通过3组正交设计实验，确立检测方法的最佳条件；主要条件为硝酸纤维素膜应用15％小牛血清封闭2h，被测血清作1：40稀释，酶标抗体作1：800稀释。结果：抗sa抗体对类风湿性关节炎(RA)敏感性为42．7％，特异性为100％；结论：建立的免疫印迹法检测血清抗Sa抗体结果较稳定，并有较高特异性。