重组HIV抗原和多表位抗原的研究

目的 研究重组 HIV病毒系列抗原 ,以满足 HIV各种抗体检测试剂研究的需要。方法 从 HIV-1 /2不同抗原中精选出优势抗原片段 ,分别用 PCR方法从编码全长 HIV- 1基因的 p BH1 OR2 /HIV质粒中扩增出 HIV- 1 /gp1 2 0、HIV- 1 /GP41及 HIV- 1 /“M”优势抗原表位 ,用基因合成法 ,合成 HIV- 1 /“0”和HIV- 2 /gp36基因 ,将获得的各基因片段插入到 p BVIL1载体 ,使其在 HB1 0 1中表达。利用载体 p BVIL1具有使小分子肽基因间可方便连接的特点 ,选择优势抗原表位进行连接和嵌合表达。结果与结论 所克隆的单片段及嵌合抗原均在大肠杆菌中获得了高效的表达 ,纯化的单片段及多表位嵌合抗原经用间接EIA法对 HIV阴性和阳性血清测定 ,表明抗原已满足抗体检测试剂盒的要求。得到的单片段抗原可用于LIA测定 ,而多表位嵌合抗原 ,可用于

重组丙型肝炎病毒表位抗原的研究

目的 :研究丙型肝炎病毒 (HCV)表位抗原 ,以满足丙肝抗体确认试剂研究的需要。方法 :构建原核融合表达载体pBVIL1,精选HCV不同区抗原 :C区 ,NS3,NS4和NS5的主要抗原表位 ,用PCR方法从不同HCV抗原表达质粒中扩增出相应抗原表位 ,构建pBVIL1表达质粒 ,并在HB10 1受体菌中表达。纯化的单片段抗原经包被测定板和用间接ELISA法对阴性及阳性血清测定其活性。结果与结论 :所克隆的单片段抗原均在表达载体pBVIL1中获得高效表达 ,单片段抗原纯品用卫生部的Panel测定 ,所得结果和进口Ortho公司RIBA3.0结果进行比较 ,其中C和NS4抗原活性略高于RIBA3.0中的相应抗原 ,NS3抗原活性则略低于RIBA3.0中的c33cr抗原。但对 4 0份阳性血清的总评价和RIBA3.0完全一致 。