LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

分别从幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增1tB和hpaA基因，构建1tB-hpaA融合基因厦其原核表达系统，鉴定其表达产物的免疫原性、佐荆活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用．采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和1tB基因片段，构建1tB-hpaA融合基因，T—A克隆后测定核苷酸序列．采用质粒pOE32和宿主菌E．coliM15构建1tB-hpaA融合基因表达系统，并用不同浓度的IPTG诱导表达．采用western blot和GM1—ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐荆活性．建立HP SS1株感染BALB／e小鼠模型，检测rLTB-HpaA的免疫保护效果．采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况．与Gen Bank登录的相关序列比较，所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94．25％～99．71％和95．38％～99．19％．所构建的表达系统pQE32-1tB-hpaA—M15的目的重组蛋白（rLTB-HpaA）表达量高达细菌总蛋白的1／3左右．rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应，免疫家兔能产生特异性抗体．GM3-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合．rHpaA免瘦小鼠的保护率仅为66．7％，rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83．3％.81．6％患者血清（102／125）HpaA抗体检测结果阳性，所有菌株均含有HpaA．本文成功地构建了ltB-hpaA融合基因高效原核表达系统，所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性，并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用．