重组质粒DNA-抗原-抗体复合物诱生乙型肝炎表面抗体的研究

本文研究了含编码乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）基因的重组质粒DNA（pCMV－HBS）对HBsAg、抗·HBS免疫复合物（IC）诱生抗-HBs的影响。在Balb／c小鼠中，IC加PCMV－HBS（100μg）免疫组比单独使用IC或pCMV－HBsDNA组诱生的抗-HBs效价高，虽然略低于IC加氢氧化铝组，但无明显差异。在IC中加20μgpCMV-HBsDNA。经再次免疫亦可有效地诱生高效价的抗-HBs，可达PCMV－HBSAg100μg加IC免疫一次所诱生的杭体水平。然而在IC中加入1μgpCMV－HBs，即使再次免疫也不能使小鼠抗-HBS的阳转率达100％。此外在IC中加入载体质粒DNA（pCMV），亦可增强诱生抗-HBS。当DNA用量为100μg或20μg时，pCMV－HBs加入组诱生的抗-HBs效价略高于加入相同量的载体质粒DNA组。结果提示可用HBsAg-抗HBs免疫原性复合物加重组质粒DNA组建治疗性疫苗。

消除对乙型肝炎病毒免疫耐受性的研究

乙型肝炎的治疗至今仍是世界上尚未解决的难题。我国约有10％人口感染乙型肝炎病毒(HBV)。根据我国多数患者是幼龄感染HBV,对病毒不产生有效免疫而处于免疫耐受状态,故不易清除病毒而发展为慢性肝炎或长期携带者。为研究消除免疫耐受途径,需要建立类似幼龄感染的免疫耐受动物模型。

重组乙肝病毒核心基因DNA与表面抗原-抗体共免疫应答研究

目的:了解小鼠对乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因免疫及与乙肝表面抗原-抗体复合物(HBsAg-抗HBs)联合免疫的应答。方法:用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100μg及含1μgHBsAg的重组乙肝表面抗原-鼠抗体组建的复合物(简称sIC)免疫Balb/c小鼠。用ELISA法检测血清抗体IgG和IgG1、IgG2a亚类的效价。用半定量PCR法分别检测鼠脾细胞IFN-γ及IL-4的mRNA。结果:pHBc144及sIC联合免疫鼠的抗HBs IgG、IgG1、IgG2a效价均显著高于sIC组(P＜0．05)。同时小鼠还可产生抗HBc及由HBsAg、HBcAg特异诱生的IFN-γ及IL-4。但与sIC共免疫,小鼠对HBcAg诱生的IFN-γ mRNA有所降低。结论:可用HBcAg基因与sIC共免疫,以获得针对乙肝病毒2种结构蛋白的免疫应答。

质粒DNA促进HBsAg-抗HBs复合型疫苗诱生的免疫应答的研究

目的 研究HBsAg 抗HBs 质粒DNA复合型疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的类型。方法 分别以HBsAg、HBsAg 抗 HBs(IC)、pI/AmpHBs、IC pI/AmpHBs及IC pI/Amp免疫小鼠 ,检测抗 HBs的效价 ,分析抗 HBsIgG亚类 (ELISA) ;取免疫小鼠脾细胞 ,体外抗原刺激 ,用竞争性RT PCR方法检测IFN γ及IL 4mRNA转录水平。结果 IC pI/AmpHBs诱生的抗 HBs效价明显高于IC或pI/AmpHBs单独免疫组 ,其IgG2a/IgG1比值高于IC免疫组 ,而低于pI/AmpHBs免疫组。IC pI/AmpHBs免疫小鼠脾细胞在HBsAg刺激下 ,IFN γmRNA转录水平明显高于其他免疫组 ,其IFN γmRNA的T/C(目的片段Target/竞争片段Competitor)比值为IC免疫小鼠脾细胞的 10倍 ;IC pI/AmpHBs免疫小鼠脾细胞IL 4mRNA转录水平亦高于其他免疫组 ,其IL 4mRNA的T/C比值为IC免疫小鼠脾细胞的 2倍。结论 HBsAg 抗HBs 质粒DNA复合型疫苗在增强体液免疫应答的同时可诱导脾细胞IFN γ的表达水平增高。