新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸭、鹅及鸽免疫原性研究

本研究就反基因操作分子修饰致弱种毒株制备新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸭、鹅和鸽子的免疫原性进行了系统评估。结果表明该疫苗对水禽及鸽子具有良好免疫原性。根据实验结果,初步推荐该禽流感灭活疫苗对上述禽类的免疫程序,即鸭:2周龄0 5mL皮下注射,3月龄1 0mL肌肉注射二免,9月龄1 0mL肌肉注射三免;鹅:10日龄0 5mL皮下注射,3～4周龄1 5mL肌肉注射加强免疫,4月龄1 5mL进行第3次免疫;鸽子:2周龄以0 3mL首免,4周龄以0 5mL加强免疫,6月龄以0 5mL第3次免疫。

人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性研究

目的:探讨人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性,为神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)移植治疗神经系统损伤奠定基础。方法:取孕14周流产胚胎,无菌分离制备大脑神经细胞悬液,用CD133标记的免疫磁珠分选NSC,提取NSCRNA,进行RT-PCR探测MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录;用流式细胞术检测细胞表面MHC-I,MHC-II类分子的表达;用正常成人外周血单个核细胞与培养NSC共培养和MTT比色分析法观察淋巴细胞增殖反应;将NSC小鼠脑内接种,进行组织染色观察细胞移植部位的组织学变化。结果:新分离和传代的NSC均发生MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录,MHC-I类分子在NSC表面的表达百分率为(5.66±0.37)%,NSC在体外能诱发淋巴细胞增殖反应,A值为1.09±0.48和1.15±0.29,与阴性对照比差异有显著性意义(P<0.05)。NSC小鼠脑内移植具有修复神经损伤作用,局部无淋巴细胞浸润和炎症。结论:人胚脑源性神经干细胞具有免疫原性,但直接脑内接种未发现引起明显的移植排斥反应。

新型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗的免疫原性研究

目的 观察新型乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原中蛋白 (MHBs)核酸疫苗的免疫原性。方法 以新型人体应用载体质粒pSW 3891构建MHBs核酸疫苗 (pSW3891 /MHBs/adr) ,对照组和实验组Balb/c小鼠分别基因枪法免疫对照载体质粒 (pSW 3891 )和MHBs核酸疫苗 ,采用酶联免疫吸附试验检测抗HBs ,LDH释放测定法检测小鼠特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性。结果 MHBs核酸疫苗可在体外高效表达 ,免疫小鼠后可产生高滴度抗HBs,血清阳性终点滴度达 1∶972 0 0 ,小鼠脾细胞HBs特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性达 78 81 %。

含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究

目的 研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法 通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子优化的方法提高表位串联蛋白的真核表达效率 ,构建了含多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗。结果 多表位串联基因接入真核表达载体后 ,可在真核细胞内高效表达。多表位嵌合SARS -CoV基因疫苗免疫小鼠后 ,可诱导融合蛋白特异的体液免疫反应。结论 该基于多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗可以诱导抗体应答 ,为该疫苗的深入研究奠定了基础。

SARS-Cov M蛋白的真核表达及其免疫原性研究

目的 初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基 础。方法 以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载 体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。以Western Blot方法利用融合分子羧基段的myc表位检 测pcDNA4-his／myc-M转染的293T细胞中M蛋白的真核表达。以ELISA方法检测pVAON33-M质粒基因免 疫小鼠诱导产生特异性抗血清。结果pcDNA4-his／myc-M转染后48 h可检测到SARS-Cov M蛋白表达。 pVAON33-M基因免疫能够诱导产生M特异的体液免疫应答。结论 本研究的结果表明SARS-Cov M蛋白可 以在真核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以作为SARS-Cov疫苗研制的候选抗原之一。

基因工程乙肝疫苗的制备及动物免疫原性研究

乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是目前严重威胁我国劳动人民身体健康的传染性疾病,由于缺乏对乙肝病毒特异的病原治疗,所以用疫苗预防的意义更加重要。尽管已经有血源乙肝疫苗,但血源疫苗费用昂贵、来源紧张,且有潜在的危险,因此迫切需要用基因工程手段制备乙肝疫苗。我们前一阶段工作已经建立了能够表达HBsAg的工程细胞株MT-5细胞,

禽大肠杆菌巴氏杆菌融合二联弱毒菌株F_4安全性免疫原性研究

用禽巴氏杆菌C48-1(5∶A)禽大肠杆菌O78的原生质体融合二联弱毒株F4的37℃24h马丁肉汤培养物,以3.45×109～6.90×1010CFU/只的4种不同剂量,分别肌肉注射接种5～40日龄粤黄鸡共216只,观察14d,结果表明F4株对20日龄以上的鸡安全性达100%。F4株的培养物肌注鸡体后4h从肝脏分离,如此连续通过粤黄鸡10代的试验表明,F4株的毒力是稳定的。以F4株的培养物3.45×109CFU/只肌注免疫200只20日龄粤黄鸡,免疫后第14天起每隔2周、直至第12周分别以C48-1、O78标准强毒菌的3×LD50剂量攻击;同时分别制备O78菌的超声粉碎抗原、菌体抗原、荚膜多糖抗原,C48-1菌的超声粉碎抗原、热稳定抗原、荚膜多糖抗原,建立检测血清中抗O78、C48-1的ELISA方法;免疫后每隔1周分别检测免疫鸡血清中的O78、C48-1IgG效价,直至免疫后84d。结果表明:F4株免疫后对O78的免疫保护率为14d50%、28d70%、42d65%、56d50%、84d35%,对C48-1的免疫保护率为14d25%、28d40%、42d75%、56d50%、84d30%。免疫鸡血清中抗O78、抗C48-1的IgG消长曲线均与免疫保护曲线相一致。

幽门螺杆菌粘附素基因保守区的克隆及免疫原性研究

目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp) 4种粘附素 (BabA2 、AlpA、AlpB和HopZ)保守区蛋白质的候选菌株 ,并研究其免疫原性。方法 利用PCR技术扩增粘附素保守区 (命名为CB)基因 ,将其定向插入pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ;表达产物经亲和层析纯化和免疫印迹鉴定 ,ELISA法测定Hp感染者血清中抗CB抗体。结果 构建了 4种粘附素保守区的重组质粒 ,测序显示CB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸。SDS PAGE和凝胶扫描分析 ,CB基因表达的蛋白质相对分子质量约为 2 2 5 0 0 ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9%。经免疫印迹证实该重组蛋白质可以被Hp阳性患者血清所识别 ,ELISA法共检测了 5 5份血清 ,以快速尿素酶实验 (RUT)作为平行对照 ,两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为 0 .76。结论 CB有可能成为一种有效的疫苗 ,用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。

结核分枝杆菌保护性肽表位KLIANNTRV多聚体的免疫原性研究

抗结核病的保护性免疫机制目前仍不清楚，细胞免疫尤其是循环及感染部位的T淋巴细胞应答被认为起着重要作用。我们采用分子生物学的方法重组表达了结核分枝杆菌保护性肽表位KLIANNTRV二聚体、四聚体和八聚体，并采用结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）试验阳性健康个体的外周血单个核细胞验证其免疫原性，为设计新型结核疫苗奠定良好的基础。

Nogo-66蛋白的免疫原性研究

慢性高眼压导致的视网膜神经节细胞的损伤与中枢神经系统慢性变性的典型损伤反应过程相同，即损伤的视网膜神经节细胞介导了细胞内环境免疫损伤过程，导致进一步的神经细胞损伤。通过增强T淋巴细胞介导的免疫反应能够保护处于“边缘性损伤”的视网膜神经节细胞。

国产冻干水痘减毒活疫苗2剂法安全性及免疫原性研究

水痘是以发热和全身散发瘙痒性疱疹为主要特征的急性、高传染性疾病,由水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）引起的原发性感染,患水痘后病毒潜伏于脊神经后跟神经节等处,潜伏病毒复活导致带状疱疹[1]。并发症包括肺炎、继发性细菌感染、出血性合并症和脑炎,甚至引起死亡[2]。接种疫苗是预防水痘和带状疱疹的有效手段。

重组SARS冠状病毒棘突蛋白S1区基因片段的克隆、表达及免疫原性研究

目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)棘突(spike)蛋白(S蛋白)S1区基因(40～2001bp)分段表达载体,并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增S1区基因,将其定向插入pQE30质粒,在pQE30质粒上将S1切成3段(40～751、746～1344、746～2001bp),均插入pQE30质粒,构建质粒在大肠埃希菌M15中表达,表达产物经亲和层析纯化及WesternBlot和ELISA鉴定。结果构建的3种重组质粒(pQE30/S1a、pQE30/S1b、pQE30/S1c)均高效表达,重组蛋白相对分子质量分别为26700、22500和46000,表达量分别占菌体总蛋白质的35%、35%和30%。3种重组蛋白经Ni亲和层析树脂得到成功纯化。经Western-Blot及ELISA证实,重组蛋白片段S1c(746～2001bp)可以被SARS患者血清所识别。结论成功构建了SARS-CoVS蛋白S1区基因分段表达载体,重组蛋白S1c具有较强的免疫原性,它的获得为下一步疫苗的研制奠定了基础。

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究

为确定猪捷申病毒(Porcine Teschovirus,PTV)Swine/CH/IMH/03株免疫原性,本研究将该PTV分离株灭活后分别与氢氧化铝佐剂和Montanide ISA 50V2佐剂混合,制成油佐剂疫苗,并采用不同免疫程序接种实验猪后对病毒抗体进行检测。抗体检测结果表明:PTV Swine/CH/IMH/03分离株能够诱导实验动物产生较高抗体水平,并显著高于对照组;与氢氧化铝佐剂混合制成的佐剂疫苗免疫效果优于Montanide ISA 50V2佐剂;而且一次免疫组与二次免疫组没有明显差异。通过PTV Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究,为后续猪捷申病的预防工作提供技术支持。

结核杆菌Rv0309重组蛋白的免疫原性研究

Rv0309重组蛋白可引导重组蛋白进入抗原提呈细胞，本文进行了免疫原性的观察。

新型冠状病毒灭活疫苗在18岁以下人群中的安全性和免疫原性研究:随机、双盲对照的Ⅰ、Ⅱ期临床试验

虽然新型冠状病毒感染在儿童和青少年中引起较轻的症状,但仍需要有效的手段控制新型冠状病毒在这类人群中的传播,以达到控制传染病的目的。2020年8—9月,河南省疾病预防控制中心开展了新型冠状病毒灭活疫苗在3~17岁人群中的随机、双盲对照的Ⅰ、Ⅱ期临床试验。按3~5、6~12和13~17岁区分3个年龄层,每个年龄层的受试者按1∶1:1∶1比例被随机分为4组。