包埋前免疫电镜双标技术在神经解剖学研究中的应用

目的 在超微结构水平观察两种神经递质在纤维终末内的共存或一种神经递质与其相应受体之间的关系。 方法 包埋前免疫电镜双重标记技术———酶标法和免疫金 银标记法相结合的方法。 结果 在免疫反应双重标记的纹状体切片上 ,电镜下观察到大量的SP样 (过氧化物酶免疫反应产物 )阳性终末和SP受体 (SPR ,免疫金 银标记颗粒 )样阳性神经元的胞体和树突 ,同时可见部分SP样阳性轴突终末分别与SPR样阳性神经元的胞体或树突形成对称性轴 体或轴 树突触联系。而在三叉神经脊束核尾侧亚核切片上 ,电镜下可观察到大量的两种囊泡膜谷氨酸转运体 ,即DNPI样 (过氧化物酶免疫反应产物 )和VGluT1样 (免疫金 银标记颗粒 )阳性轴突终末 ,同时还观察到DNPI样和VGluT1样双标的轴突终末与阴性树突形成非对称性突触。 结论 包埋前免疫电镜双重标记技术敏感性较高 ,组织的抗原性保存好 ,特别是在神经解剖学研究中 ,用于研究两种神经递质在同一个细胞或终末内的共存或分析神经递质与其相应受体之间的联系中有独到之处。

电针对佐剂性关节炎大鼠踝关节周围皮肤及皮下组织神经纤维上BSI-B4与IL-1RI荧光双标免疫反应性的影响

目的:研究电针对佐剂性关节炎大鼠踝关节周围皮肤及皮下组织神经纤维上BSI -B4与IL -1RI荧光双标免疫反应性的影响。方法:采用免疫荧光双标技术,观察了佐剂性关节炎大鼠致炎后第3d踝关节周围皮肤及皮下组织神经纤维上BSI- B4与IL 1RI荧光双标免疫反应性,及电针胆经“环跳”穴、“阳陵泉”穴(刺激参数为0 .5～1 .5V ,4～1 6Hz ,30min)后IL 1受体拮抗剂对其是否具有调控作用。结果:①各组大鼠炎症侧外踝关节周围皮肤及皮下组织均可见BSI B4 /IL -1RI阳性双标纤维。②致炎后第3d ,炎症组大鼠外踝关节周围皮肤及皮下组织BSI- B4阳性纤维、IL -1RI阳性纤维、IL- 1RI/BSI B4双标纤维数及双标纤维占各单标纤维的百分比较生理盐水组显著升高(P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。③IL -1受体拮抗剂组大鼠BSI B4阳性纤维、IL -1RI阳性纤维、IL -1RI/BSI B4双标纤维数及双标纤维占IL- 1RI单标纤维的百分比较炎症组显著降低(P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。④电针组大鼠BSI B4阳性纤维及IL- 1RI/BSI B4双标纤维数、双标纤维占IL -1RI单标纤维的百分比显著低于炎症组(P <0 .0 5 ) ,并高于IL -1受体拮抗剂组(P <0 .0 1 )。结论:正常大鼠踝关节周围皮肤及皮下组织C纤维上有IL- 1RI表达,完全弗氏佐剂导致的踝关节周围局部炎症组织中该表?

大鼠海马发育过程中神经元和星形胶质细胞p21Cip1的表达

目的研究大鼠海马发育过程中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21Cip1在神经元和星形胶质细胞中的表达。方法应用免疫双标技术和流式细胞术检测p21Cip1在生后1d(P1),生后11d(P11),成年和老年大鼠的海马神经元和星形胶质细胞中的表达。结果 (1)p21Cip1在各个年龄组大鼠的海马神经元和星形胶质细胞中均有表达;(2)大鼠海马神经元和星形胶质细胞中p21Cip1在不同年龄组的表达趋势类似,均在P1表达水平最高;而从P11到老年组p21Cip1的表达则逐渐增高,且各组间p21Cip1的表达有显著性差异(P<0.05)。结论 p21Cip1在大鼠海马神经元和胶质细胞中的表达随着大鼠的发育而变化,这提示p21Cip1可能在大鼠海马的发育过程中起重要作用。

抑郁模型大鼠海马神经元再生变化及加味温胆汤的干预研究

目的:探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马神经元再生变化的影响。方法:以孤养结合慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠为研究对象,在实验第7、14、21、28 d,采用免疫荧光双标技术检测各组大鼠海马神经元增殖与分化的再生变化情况。结果:在抑郁形成过程中,大鼠海马神经元NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标细胞数逐渐降低,至21、28 d时模型组NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标阳性细胞数明显减少,经中、西药治疗后,大鼠海马神经元NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标阳性细胞数下降趋势得到抑制,与模型组比较增加明显(P<0.05或P<0.01)。结论:抑郁形成过程中海马神经元增殖与分化减少的再生障碍渐次加重,加味温胆汤可逆转此现象。

激光共聚焦显微镜观察神经细胞孤啡肽受体的分布

目的 介绍激光共聚焦显微镜技术及其在观察受体细胞分布实验中的应用。 方法 采用原位杂交、免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜技术。 结果 孤啡肽受体 ORL 1在成年大鼠的皮层、海马及下丘脑区域的神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞上均有表达。 结论 激光共聚焦显微镜技术及免疫荧光双标技术在检测受体的细胞分布方面是一种实用的。

CAPON及其相关分子在大鼠创伤性脑损伤后的表达变化

目的:探讨创伤性脑损伤(TBI)后神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ配体(CAPON)及其相关分子的表达变化及定位。方法:利用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹技术研究大鼠脑损伤后CAPON及其相关分子Daxras1、nNOS的mRNA及蛋白水平表达变化,利用免疫荧光双标技术检测脑损伤后CAPON分子的细胞定位情况。结果:大鼠TBI后1 d-3 d,CAPON分子mRNA和蛋白表达增加;Dexras1及nNOS的表达变化趋势与CAPON的相一致。在损伤区CAPON主要表达于NeuN阳性的神经元;在损伤周边皮质中,CAPON与星型胶质细胞的标记物GFAP有少量共定位;此外,CAPON在OX-42阳性的小胶质细胞中也有少量的表达。结论:创伤性脑损伤后,CAPON及其相关分子(Daxras1、nNOS)可被诱导表达,损伤神经细胞内的CAPON及其相关分子可能参与了TBI的病理进程。