运用免疫蛋白质组学方法筛选羊种布鲁氏菌免疫反应性蛋白

布鲁氏菌是布鲁氏菌病的病原体,能引起人类慢性感染,造成家畜流产和不孕.在不同种布鲁氏菌中,羊种布鲁氏菌毒力最强,在中国布鲁氏菌病流行中占主导地位.目前,还没有安全的用于预防人类布鲁氏菌感染的疫苗.用于预防家畜布鲁氏菌感染的弱毒活疫苗产生的抗体能够干扰对免疫动物感染布鲁氏菌野毒的诊断,从而对根除布鲁氏菌病的计划实施有负面影响.然而,羊种布鲁氏菌免疫蛋白质谱目前还不完善.为了研制更安全、有效且能区分野毒感染的疫苗,本研究应用免疫蛋白质组学技术筛选羊种布鲁氏菌疫苗株M5的免疫反应性蛋白.经二维电泳结合免疫杂交技术筛选到88个具有免疫反应性的蛋白质点,后经质谱鉴定其归属于61个蛋白,包括许多新的免疫反应性蛋白,如延伸因子G,F0F1ATP合成酶亚单位??,OMP1.本研究为布鲁氏菌病疫苗研制提供了许多免疫反应性候选蛋白.

HPLC法测定尿免疫化学非反应性白蛋白及其在早期诊断儿童糖尿病肾病中的意义

目的:研究尿免疫化学非反应性白蛋白的检测对早期诊断儿童糖尿病肾病的意义,探讨HPLC法测定尿白蛋白的应用价值。方法:收集58份糖尿病患儿的随机尿标本,分别用高效液相色谱法(HPLC)和免疫比浊法对其进行微量白蛋白检测。结果:标准品和尿液标本的白蛋白出峰时间均为14.3min,58例糖尿病患儿尿液中,由HPLC法和免疫比浊法测定的尿白蛋白分别为9.6-195.1mg/L和0-158.6mg/L,在每份标本中HPLC法的测定结果均高于免疫比浊法(P<0.05)。HPLC法检出的微量白蛋白尿41例(70.7%),免疫比浊法检出22例(37.9%)。结论:HPLC法能检出全部的尿白蛋白,比免疫化学法检测出更多的尿微量白蛋白,可更早期诊断糖尿病患儿是否伴有持续性白蛋白尿。

慢性荨麻疹患者血清PAF、抗-CCD IgE水平变化及临床意义分析

目的探讨慢性荨麻疹患者血清血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)、抗交叉反应性糖类决定簇免疫球蛋白E(anti-cross reactive carbohydrate determinants immunoglobulin E,抗-CCD IgE)水平变化及临床意义,为临床诊断及病情程度、预后评估提供参考依据。方法选取2021年5月—2023年5月广州市皮肤病防治所收治的100例慢性荨麻疹患者,根据荨麻疹活动评分分为轻度组(n=41)、中度组(n=35)和重度组(n=24)。采集患者空腹静脉血,通过酶联免疫吸附法测定血清PAF水平,通过斑点免疫印迹法测定抗-CCD IgE、过敏原特异性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E,sIgE)。比较不同病情程度慢性荨麻疹患者血清PAF水平,分析慢性荨麻疹患者血清PAF水平与荨麻疹活动评分相关性,比较不同临床特征慢性荨麻疹患者抗-CCD IgE阳性率。结果中度组、重度组患者血清PAF水平高于轻度组,重度组患者血清PAF水平高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,慢性荨麻疹患者血清PAF水平与荨麻疹活动评分呈正相关性(r=0.491,P<0.001)。年龄≥45岁、重度病情、sIgE阳性患者抗-CCD IgE阳性率高于年龄<45岁、轻度病情、sIgE阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。抗-CCD IgE阳性患者中过敏原阳性最高的为尘螨组合(66.67%),其次为蟑螂、螃蟹、普通豚草,分别为55.56%、44.44%和44.44%。结论慢性荨麻疹患者血清PAF水平与病情密切相关,且抗-CCD IgE水平与sIgE水平有一定关系,抗-CCD IgE阳性表达情况对sIgE试验存在一定干扰,分析试验结果时应考虑抗-CCD IgE的影响。

内皮细胞特异性分子-1、血清降钙素原、免疫炎性因子C反应蛋白、白细胞介素-6在脓毒症中的诊断价值

目的探讨内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）、血清降钙素原（PCT）、免疫炎性因子C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-6（IL-6）在脓毒症中的诊断价值。方法选取2014年7月至2016年2月收入我院重症外科患者90例，其中脓毒症32例、普通感染58例，入科时采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清ESM-1浓度；电化学发光定量法检测PCT、IL-6浓度；速率散色比浊法检测CRP浓度。采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）比较上述指标的诊断价值。结果脓毒症组中ESM-1、PCT、CRP、IL-6分别为3．93ng／ml、4．05ng／ml、83．20mg／L、61．80g／L，均高于普通感染组0．69ag／ml、0．41ng／ml、64．35mg／L、17．20ng／L，差异均有统计学意义（P=0．001、0．001、0．003、0．001）。ESM-1、PCT、CRP、IL-6的ROC曲线下面积（AUC）分别为0．911、0．893、0．667、0．760；ESM-1的AUC高于CRP，差异有统计学意义（P=0．001）；ESM-1的AUC高于IL-6，差异有统计学意义（P=0．003）；PCT的AUC高于CRP，差异有统计学意义（P=0．001）；PCT的AUC高于IL-6，差异有统计学意义（P=0．002）；ESM-1与PCT的AUC比较差异无统计学意义。当ESM-1的最佳诊断点为2．215ng／ml时，敏感度为81．3％，特异性为93．1％，约登指数为0．744，阳性预测值、阴性预测值分别为0．867、0．900，阳性似然比、阴性似然比分别为11．781、0．201。当PCT的最佳诊断点为1．875ng／ml时，敏感度为84．4％，特异性为82．8％，约登指数为0．672，阳性预测值、阴性预测值分别为0．730、0．906，阳性似然比、阴性似然比分别为4．894、0．189。结论ESM-1、PCT作为诊断脓毒症的早期指标，诊断价值优于CRP、IL-6。

高压液相色谱检测糖尿病患者尿白蛋白的应用

目的探讨高效液相色谱法(HPLC)测定糖尿病(DM)患者尿白蛋白的应用。方法收集85例DM患者及40名健康体检者(正常对照组)尿液,分别用HPLC和免疫比浊法检测尿白蛋白,并将检测结果使用回归和Bland-Altman进行一致性分析。结果 HPLC线性方程为Y=2.948 2X+38.601,r2=0.994 4;标准品和样本的保留时间(RT)均为2.42 min;尿白蛋白浓度为40.1和152.6 mg/L的样本其批内和批间变异系数(CV)分别为4.1%、4.8%和5.6%、6.5%;最低检测限为2 mg/L。DM组尿白蛋白HPLC结果为21.0(3.4～678.9)mg/L,高于免疫比浊法[8.2(2.0～442.2)mg/L](P<0.01),但偏高的倍数不一致(1.3～6.1倍);但正常对照组2种方法测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。将2种方法的测定结果用回归分析和Bland-Altman进行一致性分析,显示2种方法的一致性较差。85例DM患者中用HPLC和免疫比浊法检测达到微量蛋白尿诊断标准[尿白蛋白排泄率(AER)>30 mg/24 h]的阳性例数分别为48例(56.5%)和27例(31.8%)。结论 HPLC能检测尿中的包括免疫性和非免疫性的总的尿白蛋白,与免疫比浊法相比更能早期检出尿白蛋白。

细菌感染对川崎病预后的影响

目的:探讨合并细菌感染川崎病(KD)患儿的临床诊治及转归情况。方法:选取2015年12月至2018年6月住院治疗的川崎病患儿为研究对象,KD患儿共299例符合纳入标准,按照入院后是否合并细菌感染分为无感染组(150例)及感染组(149例),统计分析两组患儿临床资料,包括年龄、性别、热程、冠状动脉瘤、血液及生化指标等。结果:两组患儿年龄差异有统计学意义(t=3.106,P<0.05),两组患儿性别比较差异无统计学意义(P>0.05);两组患儿静脉注射人免疫球蛋白(IVIG)使用前热程比较差异无统计学意义(P>0.05),平均住院时间比较差异有统计学意义(t=2.049,P<0.05);两组患儿不完全川崎病百分比、冠状动脉瘤百分比差异无统计学意义(P>0.05)。两组患儿IVIG无反应性川崎病发生率比较差异有统计学意义(χ^2=7.153,P<0.05);两组患儿实验室指标比较,感染组患儿白细胞计数明显较高(t=2.663,P<0.05)、C反应蛋白(CRP)水平升高(t=2.059,P<0.05)、无菌性脓尿比例升高(χ^2=33.173,P<0.05),两组间血红蛋白、血小板计数、丙氨酸氨基转移酶、N末端前体脑钠肽水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:KD患儿中存在部分合并细菌感染灶,婴幼儿较多见,细菌感染可能与IVIG无反应性川崎病发生率相关,但对KD患儿冠状动脉瘤发生率无明显影响。对于这部分患儿,在大剂量IVIG治疗同时,亦应早期给予足疗程抗生素治疗。

HPLC法检测尿白蛋白在高血压肾病早期诊断中的应用价值

目的:探讨用高效液相(HPLC)法检测尿白蛋白在原发性高血压肾病早期诊断的应用。方法:对我院原发性高血压(EHT)患者222例,分别用HPLC法和放射免疫(RIA)法检测患者尿白蛋白,同时分析不同病程患者以上述方法测得Alb(mg)/Cr(mmol)值,比较两种检测方法对早期肾损伤的诊断阳性率。结果:患者尿液以抗白蛋白抗体中和后仍可用HPLC法测得一定浓度的Alb;同时,222例患者以RIA法测得尿Alb浓度分别为:Alb阴性组9.3±3.5 mg/L、微量Alb组28.1±9.1 mg/L、大量Alb组129.1±90.2 mg/L,而用HPLC法测得的上述三组尿Alb平均浓度分别为12.1±7.1 mg/L、32.9±15.3 mg/L、172.5±139.6 mg/L,两种方法测定结果均有明显差别(P<0.01);并且在85例RIA法的白蛋白阴性组中,HPLC法已有25例为微量白蛋白组,在89例RIA法的微量白蛋白组中,以HPLC法有4例为阴性组、18例为大量白蛋白组。在3组不同病程的患者中,以HPLC检测的尿液Alb(mg)/Cr(mmol)阳性率均高于RIA法测定结果(P<0.05)。结论:部分EHT患者尿液中存在免疫化学非反应性尿白蛋白,用HPLC方法检测EHT患者尿液Alb较之常规免疫学方法有更好的早期诊断价值。