共抑制受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域免疫抑制机制的研究进展

恶性肿瘤的发生、发展与免疫检查点受体有紧密联系,肿瘤细胞可以通过激活免疫检查点来逃避免疫监视。T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(TIGIT)是一种在免疫细胞上表达的抑制性受体。TIGIT可以通过多种机制抑制T细胞和天然杀伤(NK)细胞等免疫细胞的功能,使肿瘤细胞逃避免疫系统的监视,本文将对TIGIT的免疫抑制机制研究进展进行系统综述。

N-甲基-D-天冬氨酸受体-丝裂原活化蛋白激酶信号通路对心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控作用及其机制

目的探究N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控作用及其机制。方法选择健康SD大鼠40只,采用随机数字表法将其分为对照组、心脏骤停/复苏组、地卓西平马来酸盐(MK801)干预组、MEK特异性抑制剂(U0126)干预组、联合干预组,每组各8只。除对照组外,其余组大鼠建立心脏骤停-心肺复苏模型,在复苏72 h取各组血样本进行血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肌酸激酶(CK)活性、丙二醛(MDA)测定,并测定各组大鼠脑梗死面积占比、心肌细胞凋亡率以及脑组织和心肌组织的N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR-1)、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达情况。结果心脏骤停/复苏组的脑梗死面积占比、心肌细胞凋亡率高于对照组、MK801干预组、U0126干预组、联合干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合干预组的脑梗死面积占比、心肌细胞凋亡率低于MK801干预组、U0126干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合干预组复苏72 h后的血清IL-1β、TNF-α、CK-MB、MDA低于MK801干预组、U0126干预组、心脏骤停/复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合干预组复苏72 h后的心肌组织、脑组织NMDAR1、p38MAPK、p-JNK、p-ERK蛋白表达低于MK801干预组、U0126干预组、心脏骤停/复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NMDA受体-MAPK信号通路可能参与介导心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控过程,其机制是通过调节机体炎症反应实现的。

免疫抑制性受体TIGIT在慢性病毒感染中的作用研究进展

T淋巴细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT)是近年来新发现的表达于活化的T淋巴细胞、NK细胞表面的免疫抑制性受体。TIGIT可通过与肿瘤细胞、病毒感染细胞表面的配体结合,激活免疫细胞内部负刺激信号,抑制免疫细胞活化、增殖以及产生细胞因子减少,导致病原体无法清除,从而发生肿瘤以及病毒感染慢性化。目前对于TIGIT介导病毒感染慢性化的具体作用机制尚未完全阐明,探讨TIGIT在慢性病毒感染中的作用有助于为慢性病毒感染的治疗提供参考。

外周血CD3^(+)T细胞上程序性死亡因子-1 T细胞免疫球蛋白及免疫受体酪氨酸抑制基序在子宫内膜异位症中的表达和价值

目的探讨外周血CD3^(+)T细胞上程序性死亡因子-1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白及免疫受体酪氨酸抑制基序(TIGIT)在子宫内膜异位症(EM)的表达和价值。方法采用前瞻性病例-对照研究,收集在复旦大学附属妇产科医院诊断为EM的患者(EM组)和相同年龄的子宫肌瘤者(对照组)的外周血。采用流式细胞术检测抗凝外周血中CD3^(+)T细胞上表面分子PD-1和TIGIT的百分含量,并比较在两组间的差异。结果两组患者的年龄、体质指数(BMI)及产次比较差异均无统计学意义(均P>0.05),子宫内膜异位症组研究对象有痛经症状的比例显著高于对照组(P<0.001)。EM患者外周血中CD3^(+)T细胞占淋巴细胞的比例为(65.73±12.10)%,与对照组组中CD3^(+)T细胞(64.98±7.22)%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PD-1^(+)CD3^(+)T细胞占CD3^(+)T细胞的比例在EM组中为(25.57±8.01)%,显著高于对照组中的(21.46±7.15)%,差异有统计学意义(P<0.05)。TIGIT^(+)CD3^(+)T细胞占CD3^(+)T细胞的比例在EM组中为(10.23±2.80)%,显著高于对照组中的(8.90±2.13)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD-1和TIGT在EM患者外周CD3^(+)T细胞中表达异常升高,提示其与EM的发生可能相关。

新型免疫检查点抑制剂T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域在抗肿瘤免疫治疗中的研究进展

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif(ITIM)domain,TIGIT]是新型T细胞或NK细胞抑制性受体,可通过与肿瘤细胞、被感染细胞表面的多种配体相结合,激活免疫细胞内部负性刺激信号,从而抑制细胞过度活化和促炎性细胞因子的过度分泌,在肿瘤、病毒感染以及多种自身免疫性疾病的免疫发病机制中发挥重要的调节功能。最近,TIGIT在癌症免疫治疗中受到了广泛关注,研究显示,TIGIT在癌症患者T细胞和NK细胞中表达升高,且与疾病进展和不良临床预后相关,研究者尝试通过阻断TIGIT与其配体的结合来增强T细胞或NK细胞的活性以进行治疗干预。目前已经有很多关于在不同小鼠肿瘤模型中使用抗TIGIT单抗治疗导致瘤体消退的相关报道,TIGIT有望成为下一代癌症免疫治疗的靶点,现在一些临床试验正在评估抗TIGIT单克隆抗体对不同类型癌症患者的疗效。最近,抗TIGIT单抗(tiragolumab)在与抗程序性死亡受体-配体1(programmed cell death ligand 1, PD-L1)药物联合治疗非小细胞肺癌时表现出显著临床疗效,然而TIGIT阻断治疗的具体作用机制还有待阐明。

免疫抑制性受体TIGIT在病原体感染中的作用机制研究进展

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT)是主要表达于活化的T细胞、调节性T细胞(Tregs)和自然杀伤(NK)细胞表面的免疫抑制性受体。最近的研究表明TIGIT可通过与癌细胞或病原体感染细胞表面的多种配体相结合,直接抑制免疫细胞的活化、增殖或间接诱导免疫抑制性因子的产生。用TIGIT单克隆抗体干预可明显改善免疫细胞的功能,有望成为类似于PD-1的全新治疗靶点。因此,阐明TIGIT在感染性免疫应答中发挥作用的具体机制将有助于揭示多种疾病中免疫细胞功能低下的原因,并为病原体感染的治疗提供新方案。本文简要介绍TIGIT分子的结构与功能,并且就TIGIT在细菌、病毒和寄生虫感染中发挥的作用及作用机制进行了系统综述。

适应性免疫系统抗原受体祖先基因的发现与研究

由B细胞介导的体液免疫和T细胞介导的细胞免疫为动物抵抗病毒和细菌等病原微生物的感染提供了重要的适应性免疫防线。同时,适应性免疫又是动物疫苗研制的原理所在。依赖RAG重组酶的适应性免疫系统为有颌类脊椎动物所独有,其起源可追溯至大约5 亿年前:转座子侵入非重排型免疫球蛋白超家族(Immunoglobulin superfamily, IgSF) 基因,经过基因组复制和演化,形成了今天的B 细胞受体BCR (B cell receptor)和T 细胞受体(TCR)基因座。目前关于BCR/TCR 祖先基因的了解较少,而寻找新的祖先基因不仅能够拓宽关于免疫相关基因家族的认识,还能根据其响应免疫刺激的分子机制为动物疫病防治提供新的思路。

靶向TIGIT肿瘤免疫治疗的研究进展

近年来,免疫疗法在肿瘤治疗领域取得了重大突破,通过阻断免疫细胞表达的抑制性受体与肿瘤细胞表达的抑制性配体的相互作用,刺激宿主自身免疫系统对肿瘤抗原的反应能力来增强抗肿瘤活性.这种肿瘤靶向疗法又称免疫检查点靶向治疗[1].该疗法是当前肿瘤治疗领域研究的热点,如靶向程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)/程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)或细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)在肿瘤免疫治疗中取得了显著的临床疗效,但整体应答率有限[2].

复发性自然流产患者T细胞中T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序的表达

目的:探讨复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者T细胞中T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)的表达情况,为其可能作为治疗靶点提供理论依据。方法:采集21例正常早孕者及23例RSA患者的抗凝外周血,分别检测其CD3^+T细胞表面分子TIGIT的百分比及细胞因子IL-10和IFN-γ的表达情况。结果:RSA组患者TIGIT+细胞所占CD3^+T细胞的百分比为(41.52±7.17)%,高于早孕组中的该百分比[(36.09±4.03)%],差异有统计学意义(P<0.05);RSA组TIGIT+CD3^+T细胞中IL-10阳性细胞所占百分比分别为(11.68±5.90)%,低于早孕组TIGIT+CD3^+T细胞中IL-10阳性细胞所占百分比[(16.33±6.65)%],差异有统计学意义(P<0.05);而CD3^+T细胞中IFN-γ的表达在2组间差异无统计学意义。结论:负性共刺激分子TIGIT在RSA患者中异常表达,可能参与了母胎免疫的调控,与RSA的发生相关。

复发性流产患者CD4^+T细胞及调节性T细胞上T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序的表达

目的探讨CD4^+T细胞及调节性T(Treg)细胞上T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(T cell immunoglobulin and immunorecep tortyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)与复发性流产(RSA)发病的关系。方法采用前瞻性病例-对照研究收集2017年7月—2018年8月期间在复旦大学附属妇产科医院的60例RSA患者(RSA组)和68例相同孕周正常早孕者(对照组)的外周血。采用流式细胞术检测抗凝外周血中CD4^+T细胞及Treg细胞上表面分子TIGIT的百分含量。结果CD4+T细胞在外周血中的比例组间比较差异无统计学意义,且TIGIT^+CD4^+T细胞的比例组间差异也无统计学意义(P>0.05);Treg细胞在RSA组外周血中的比例低于对照组(P=0.02);但RSA组TIGIT^+FoxP3^+CD4^+T细胞所占比例为56.41%±12.36%,高于对照组中的表达(47.82%±10.53%),差异有统计学意义(P=0.03)。结论TIGIT在RSA患者外周血Treg细胞上的表达异常升高,提示其与RSA的发生可能相关。

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域介导的T细胞耗竭在慢性感染性疾病中的研究进展

肿瘤和慢性感染中存在着T细胞耗竭现象。耗竭T细胞是一群持续高表达抑制性受体而免疫效应功能和增殖能力降低的T细胞。阻断耗竭T细胞表面抑制性受体可一定程度逆转其耗竭程度,恢复部分免疫功能,为肿瘤和慢性感染的免疫治疗提供新思路。T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)是近年新发现的抑制性受体,与配体结合后可通过多种机制对T细胞效应功能进行负性调控,与T细胞耗竭密切相关。本研究就TIGIT及其相关受体、配体的分布、功能,TIGIT介导T细胞免疫负性调控的作用机制,以及TIGIT在慢性感染性疾病中的研究进展进行综述。

共抑制受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序与自身免疫病

共抑制受体又称免疫检查点受体,在调节免疫应答、维持机体免疫稳态中发挥着重要的作用。以共抑制受体所在通路为治疗靶点的生物制剂已被研发并推广至临床应用。作为近年发现的新的共抑制受体之一,业有研究证实T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(TIGIT)的异常表达与肿瘤、感染等疾病的发生、发展密切相关。本综述拟对TIGIT的分子结构特点、作用机制及其在自身免疫病中的研究进展进行小结。

嵌合型抗原受体基因修饰的T细胞研究进展

肿瘤免疫治疗在肿瘤治疗中发挥的作用日益受到重视，而作为肿瘤免疫治疗重要组成部分的过继性细胞治疗（ Adoptive cellular therapy ，ACT），因其可在短时间内扩增和活化具有抗瘤活性的效应细胞，治疗副作用轻微等优点而在临床研究中备受关注。TIL、CIK、NK、NKT和γδT这些用于ACT的细胞在临床应用研究中取得一定的疗效，但是肿瘤抗原特异性强、亲和力好的免疫细胞来源困难、数量较少，以及杀瘤活性、体内持续时间未能达到临床应用的需求，在一定程度上制约了ACT的发展［1］。于是，研究者尝试使用基因修饰T细胞来解决这个问题，用来修饰 T 细胞的基因有 TCR、CAR （ Chimeric antigen receptor ，嵌合型抗原受体）、促进免疫细胞增殖的细胞因子（如IL-2、IL-15）等［2］。其中，嵌合型抗原受体基因修饰的 T 细胞（ Chimeric antigen receptor-modified T cells，CART）是以能编码单链抗体-共刺激分子-免疫受体酪氨酸活化基序的嵌合分子的融合基因修饰T细胞而产生的一种基因修饰T细胞。因其具有肿瘤抗原识别特异性强、亲和力高、非MHC限制性及可在体内外大量扩增的优点而受到较多的关注，本文将对 CART 的研究进展予以综述。

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序功能的研究

汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1ITAM样基序多肽，应用体外蛋白激酶共沉淀实验，分别从Jur—kat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5～9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶；然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析，进一步确证了G1ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶（PTK）Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用，而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。上述研究表明，HTNVG1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序，该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用，为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热（HFRS）免疫信号传递中的作用奠定了基础。

双磷酸化His-PZR蛋白的表达与分离纯化

目的获得纯化的双磷酸化His-PZR蛋白。方法本试验采用His-PZR与C-Src重组原核表达载体共同转化E.coliBL21菌株的方法,通过IPTG诱导表达,Ni-NTA纯化及HPLC分离纯化等技术,获得双磷酸化的His-PZR蛋白。结果成功表达了His-PZR蛋白,约占全菌体蛋白的8.5%,相对分子质量约为10 000;并分离纯化出双磷酸化的His-PZR蛋白。结论双磷酸化His-PZR蛋白的表达和纯化,为进一步研究His-PZR与SHP蛋白间的作用机制及其在信号转导过程中的功能奠定了基础。

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用

目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分析证实G1 ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用;而突变体分析表明,这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论:HTNV G1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用,为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础.

抗IgA Fc受体抗体的作用机制

体外实验和动物实验证实,抗IgAFc受体I(FcαRI)单抗具有抑制炎症信号通路,治疗感染性疾病、改善免疫及非免疫相关肾脏疾病肾组织病变等作用。虽然早有研究证实抗FcαRI单抗的疗效与FcαRI中抑制性免疫受体酪氨酸激活基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs,ITAM)介导的抑制性信号(ITAMi)有关,但直到近期ITAMi的分子机制才被阐明,即低亲和性配体或单克隆抗体与FcαRI结合后可促使FcαRI移位及含Src同源结构域2(Src homology 2,SH2)的酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)在细胞膜脂质结构中募集,激活性受体与FcαRI等受体及SHP-1在细胞脂筏上的共区域化促进了大分子抑制体的形成,在SHP-1的作用下激活信号被抑制。这一机制的明确为IgAFcαRI单抗治疗肾脏疾病提供了新的理论依据。

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用

目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以与Syk相互作用。结论HTNVGI蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。