磁定量免疫层析法降钙素原试剂盒性能评估研究

目的:评价磁定量免疫层析法降钙素原(PCT)检测试剂盒的临床性能。方法:以梅里埃VIDAS PCT试剂盒为参比试剂,对PCT检测试剂盒进行精密度、线性范围、方法学一致性的比对研究。结果:PCT检测试剂盒批内低值和高值的变异系数(CV)分别为6.67%(0.49ng/ml)和4.39%(4.89ng/ml),总精密度为7.26%(0.48ng/ml)和4.74%(4.91ng/ml),满足精密度检测要求。试剂盒线性范围具有良好的线性梯度关系(r2=0.9989)。方法学比对试验结果显示,PCT试剂盒检测结果与VIDAS检测结果具有良好的相关性,相关系数r2=0.9668,临床参考值0.5ng/ml和2ng/ml的检测结果与VIDAS的符合率为94.5%和93.6%,表明两者具有很好的一致性。结论:PCT检测试剂盒与VIDAS试剂盒在临床应用上具有等效性,可用于临床诊断及疗效监控。

荧光免疫层析分析仪的性能验证和计量需求

荧光免疫层析分析仪在急诊抢救中的即时检测发挥的重要作用,新发布的卫生行业规范对该仪器的性能验证参数做出了要求,但同时也需要选择合适的校准指标和校准方法评价仪器的计量性能。

基于免疫层析试纸技术的食品安全检测研究

摘要：近年来，食品安全问题时有发生，对社会和谐发展产生极大的负面影响，这就要求相关部门加大监管力度，同时在检测技术方面也要不断突破，本文研究的重点就是从生物传感器检测法、免疫检测法等现代化的食品检测方法进行了分析探讨。

免疫层析法与一步酶联免疫吸附法联合检测HBsAg的应用体会

目前国内大部分实验室应用一步酶联免疫吸附法测定HBsAg,虽然操作程序较经典的二步ELISA法简单,缩短了检测时间,但当HBsAg浓度过高时,易发生钩状效应,而使HBsAg出现假阴性,造成漏检.克服钩状效应的方法可将标本做1∶10～1∶100稀释后重测或采用经典的二步ELISA法.但这2种方法操作程序复杂,时间长,给实验室带来不便.我院2003年1～7月用免疫层析法与二步法和稀释一步法做比较,发现免疫层析法可代替以上2种方法,能简便、有效地避免钩状效应的发生.

多层免疫模型的研究及其在TE过程中的应用

随着工业生产过程的不断复杂化,过程中各个变量间的关联性也越来越复杂,所以根据过程中的监控数据识别故障并判定故障所在位置对维持工业生产的高效运行有着重要的意义。针对复杂工业过程设计了多层免疫模型,在基本免疫算法的基础上设计了网络层进行特征判断,并在自适应层中完成免疫信息的更新,并将更新的信息反馈给固有层进行故障识别。仿真实验在算法进行性能测试的基础上,将该方法应用于化工生产过程的TE模型中进行故障的识别,取得了较好的效果。

基于仿生学的多层自适应容错重构阵列研究

目前传统的可重构阵列面临着故障监测可靠性低、故障修复机制不灵活、时间与资源消耗随阵列规模急剧增大等困境。为此,根据生物体内遗传物质的精确自复制、免疫监督、组织自修复等容错修复机制,提出一种多层分布式自适应可重构电子阵列。阵列逻辑上分为3层,其中可配置逻辑层根据不同的用户配置信息完成系统功能;免疫层对可配置逻辑层的细胞进行故障监控;重构层在收到故障信号后寻找替代细胞、重新布线、转移配置信息,完成修复。以4位并行乘法器为例,对可重构阵列的功能和容错能力进行了验证。实验证明此可重构阵列实现了在线分布式自测试、自重构,多重联合故障检测增加了检测的可靠性,分块并行修复机制有效控制了故障修复的时间,增加了重构灵活度。资源与时间消耗基本不随阵列规模增大而增大。

动物肠道屏障功能对肠道菌群变化的调控

动物肠道屏障系统是机体同外界环境接触并且相互作用的最大区域,也是病原体入侵的主要门户。因此,完整和高效的动物肠道屏障系统对调控肠道病原微生物的侵入至关重要。通过介绍肠道屏障系统的构成,综述了不同肠道屏障系统对肠道菌群变化的调控作用。

海洛因依赖者尿检转阴时间监测探讨

目的 监测海洛因依赖者尿检转阴时间 ,为评判海洛因依赖者近期吸食状况提供依据。方法 应用中美合作上海美康生物工程有限公司生产的试剂盒 ,根据抗原与抗体特异性反应的原理 ,应用胶体金免疫层折技术快速定性检测人尿液中的吗啡类物质 ,灵敏度达 3 0 0 μg/L。结果 连续检测 87例被强制戒毒者每日尿吗啡含量 ,在不继续吸食的情况下尿检转阴时间为 (3 .652± 0 .517)d。结论 根据尿检追踪监测结果可判断海洛因依赖者近期吸食状况 。

肠神经元性发育不良病理学特征临床意义的探讨

目的探讨肠神经发育不良(IND)病理学特征的临床意义。方法回顾分析我院1990年～2002年间269例临床诊断为“HD”(小儿258例,成人11例)病人的临床和病理资料。选取HD病变段和近端各12例,节细胞减少症3例,IND8例,以及对照21例的全层结肠标本行SY免疫组化染色。光镜下观察肠神经丛的分布,肠壁肌层SY免疫活性纤维的分布。结果269例中单纯IND15例(6%),HD+IND6例(2%),两者各有1例因近端肠壁IND病变症状复发而再手术。对照中2例见纵肌异位神经丛,1例同时见粘膜下巨大神经丛;先天性肛门闭锁的横结肠和结肠肿瘤各2例,肠肌间见丰富的巨大神经丛。肠壁SY免疫活性在HD和节细胞减少症的病变段,有不同程度的明显减低;对照组和HD近端功能正常的肠壁多表现丰富;IND病变段表现正常和轻度减低的各一半。结论IND的病理特征缺乏特异性,是IND研究结果不一致的重要原因之一。IND与“具有IND特征改变的继发性现象”可能仅是组织学现象上的相似,应有不同的病理基础。IND的诊断应结合病人的年龄、合并的其它病理因素及临床症状的情况,量化IND的病变更有诊断意义。

猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备猪细小病毒(PPV)杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)对其分泌的单克隆抗体进行效价测定、亚型鉴定和特异性鉴定。结果得到2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H9、1F9,染色体数目介于90～110之间。细胞上清效价均达1∶1×104,腹水效价均达1∶1×107,其亚型分别为IgG1、IgM,均为kappa链。2H9、1F9单抗与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒I型(PCV-1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、乙脑病毒(JEV)等均无交叉反应。IPMA和IFA检测结果显示2H9、1F9单抗均能与接种于PK-15细胞的PPV发生特异性反应。结论成功制备了2株抗PPV杂交瘤细胞株,证实其产生的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。

化脓性中耳炎血清及耳分泌物总IgE的测定

本文通过16例急性化脓性中耳炎(急性组),28例间歇性发作慢性化脓性中耳炎(间歇性发作流脓组)及42例慢性化脓性中耳炎长期流脓(长期流脓组)患者血清及耳分泌物的总IgE进行检测。测定分泌物中总IgE几何平均值±标准差,急性组为7.65±5.1iu/ml,间歇性发作流脓组为9.89±6.3iu/ml及长期流脓组为41.12±18.56iu/ml。长期流脓组分泌物中的总IgE明显高于其它两组(P<0.01),而三组血清的IgE无明显差异。本结果表明中耳局部存在IgE,并提示慢性化脓性中耳炎长期流脓与变态反应有关。

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以纯化的PRRSV全病毒抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,并测定其免疫球蛋白亚类、效价和特异性。结果成功获得2株能稳定分泌抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为3C3、3D2,经鉴定亚类均为IgG2a、kappa链。2株单克隆抗体腹水ELISA效价达105～107,IPMA效价达1:2560～1:10240,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒等无交叉反应。结论获得特异性针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的单克隆抗体,为研究该病的快速诊断技术奠定基础。

基于SodC单克隆抗体的胞内劳森菌IPMA抗原检测方法的建立及应用

【目的】胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)是引起猪增生性肠炎(porcine proliferative enteritis,PPE)的肠道病原菌,主要表现为动物福利下降,给世界养猪业造成严重的经济损失。研究通过制备鼠抗LI SodC的单克隆抗体,建立一种针对LI的免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)抗原检测方法,检验其在临床上的应用性,从而为LI的病原诊断提供一种科学有效的手段。【方法】选取胞内劳森菌弱毒疫苗为研究对象,通过PCR扩增其sodc片段,将其克隆至原核表达载体pGex-6p-1上,成功构建出pGex-6p-1-sodc重组质粒,诱导表达重组蛋白SodC。Western Blot分析重组蛋白的反应原性,一抗使用鼠抗GST标签的抗体。以该重组蛋白为免疫原,免疫4—6周龄BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA技术筛选阳性杂交瘤细胞,并制备腹水。通过间接免疫荧光(IFA)鉴定该单抗的特异性。以该单抗为一抗,摸索并建立了LI IPMA抗原检测方法,并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。用优化后的IPMA方法对来自江苏周边地区猪场回肠组织样品进行检测,评价该方法的临床价值。【结果】纯化后SodC蛋白浓度较高,与鼠抗GST标签的抗体发生特异性结合,表明该蛋白反应原性较好。经3次亚克隆后最终共筛选获得2株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1D6和1F7。单抗亚型鉴定结果显示:1D6亚型为IgA,1F7亚型为IgG3;ELISA检测1D6单抗效价为1﹕1024000;1F7单抗效价为1﹕1024000;间接免疫荧光(IFA)结果表明2株单抗均与LI菌株发生特异性反应,与猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Cholerasuis,S.Cholerasuis)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪常见病原无交叉反应。优化后IPMA反应条件为:一抗稀释倍数为1﹕800,作用45min;二抗稀释倍数为1﹕2500,作用1h,此时IPMA检测效果最佳。用该方法检测S.Cholerasuis、PEDV、TGEV、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2(PCV2)均为阴性;最低检测限为103个/mL,说明该方法特异性强、敏感性高。临床样品检测结果显示146份病料中共检测出92份阳性样品,3个不同猪场的阳性样品检出率分别为65.6%、68.2%和53.7%,总体阳性率为63.0%。普通PCR方法检测出82份阳性样品,两种方法的阳性符合率为94.6%。【结论】成功制备了鼠抗LI SodC蛋白的单克隆抗体,建立了针对LI抗原的IPMA检测方法,并对临床样品进行了检测。该方法具有良好的特异性和敏感性,并具有一定的临床价值,为实验室LI的分离鉴定、在感染细胞中的定位以及流行病学调查和相关检疫提供一种有效的技术手段。

胶体金标记蛋白及应用

胶体金做为标记物用于免疫标记技术的时间不长 ,但发展迅速 ,在免疫组织 (或细胞 )化学检测和免疫学检验领域中都得到了广泛的应用。本文将介绍胶体金。

抗传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

选取传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)M41毒株S1蛋白的重要抗原区,RT-PCR扩增选定的S1基因并构建pET-28a-S1重组表达载体,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE以及Western blot结果显示重组S1蛋白表达正确。以纯化的S1蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备并获得了抗IBV M41 S1蛋白的单克隆抗体3D9。免疫过氧化酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay, IPMA)结果显示,单克隆抗体3D9可与IBV M41毒株反应。成功表达了截短的IBV S1蛋白并获得了能识别IBV M41毒株的单克隆抗体,为IBV检测方法的建立奠定了基础。

山东省某地区牛、羊肠道病毒感染的流行病学调查

牛、羊肠道病毒感染为国内新近报道的动物传染病,其流行病学本底在国内缺乏。为了解牛、羊肠道病毒感染的情况,本研究应用双抗体夹心ELISA方法对采集于山东省某地区的奶牛、肉牛、绵羊和山羊粪便样品进行了肠道病毒的检测。同时对ELISA检测为阳性的部分样品进行了病毒分离,并以免疫过氧化物酶单层试验对分离毒株进行了鉴定。结果发现,奶牛的肠道病毒感染率为25.0%,肉牛群的感染率为7.6%,绵羊的肠道病毒感染率58.6%,山羊的肠道病毒感染率为48.5%,该结果为肠道病毒感染的防制提供流行病学的理论依据。

宁夏地区牛场E种肠道病毒的分离与鉴定

牛肠道病毒感染是近年来国内新报道的一种传染病,其病原体为微RNA病毒科肠道病毒属中的肠道病毒。本研究应用双抗体夹心ELISA方法对宁夏地区的部分牛群肠道病毒感染进行了调查,其感染率为9.85%、27%、28.2%。应用Vero细胞从采自宁夏牛群的粪便样品中分离出2株病毒,采用病毒学技术、过氧化物酶单层细胞试验和分子生物学技术对分离毒鉴定发现,2株病毒均为肠道病毒。应用PCR技术扩增分离毒的部分核苷酸序列,并对其进行比对分析发现,分离的2株病毒均为E种肠道病毒。该结果将为宁夏地区肠道病毒感染的防控提供依据。