免疫微球吸附实验的建立──Ⅰ.兔抗人血清IgG检测

用免疫微球技术来检测抗原抗体是目前免疫诊断试剂研究的一个新方向．本文介绍了兔抗人血清ＩｇＧ的制备和利用彩色微球检测该抗体的检测方法；同时，探讨了影响实验敏感性的温度、浓度和ｐＨ值等主要因素．

基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究

用光刻法在普通定量滤纸上制作出了疏水图案,得到了滤纸微孔板。将表面修饰后的SiO2微球负载在滤纸表面,以提高滤纸纤维吸附蛋白质的能力,基于此建立了以间接酶联免疫吸附法测定羊抗兔免疫球蛋白的方法。以酶标兔抗羊IgG为例,负载SiO2微球后,滤纸微孔板吸附该蛋白质的量提高了20%～700%;将SiO2负载法应用于羊抗兔IgG的检测时,可使信号增强20%～150%。在本实验条件下,测定羊抗兔IgG的线性范围为3×10-12～3×10-8mmol/孔。本方法使生物免疫试剂消耗量减少至3～5μL/孔、检测时间降至20 min/板、滤纸微孔板制作成本可低至约每板1.1美元,为研制准确、快速和低成本的疾病检测设备提供了新的思路和可能性。

新型凝集技术快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌

为探求鸡白痢、鸡伤寒沙门菌快速检测的新型凝集技术，尝试用3种有机活性染料与抗体分别修饰二氧化硅活性微球制成免疫彩色二氧化硅微球（ICSN），构建快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌新型凝集技术。利用反相微乳法制备彩色二氧化硅纳米微球（CSN），用扫描电镜表征形貌特征和分散程度，通过凝集现象表征对鸡白痢、鸡伤寒沙门菌的检测效果。结果表明该新型凝集技术灵敏度好，其凝集结果醒目、直观、易于肉眼判别，且耗用抗体不到常规凝集试验的1／500，对目标菌的检测范围为10^2～10^9cfu·mL-1；重复性和稳定性好，4℃放置28d后，凝集效果与放置前无显著差异；具有较好的特异性和准确性。用ICSN构建的新型凝集技术具有灵敏、经济、稳定、简便、快速、准确等优点，不仅适用于快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌，还可为其它致病微生物快速检测提供基础模型。

快速检测阪崎肠杆菌新型凝集技术研究

为建立新型快速检测阪崎肠杆菌(E.sakazakii)的技术,本研究采用有机活性染料与抗体共修饰二氧化硅活性微球制成单分散免疫彩色二氧化硅微球(Immune colored silica nanoparticles,ICSN),建立了快速的E.sakazakii新型凝集检测技术。扫描电镜检测显示,利用反相微乳法制备彩色二氧化硅纳米微球(Colored silica nanoparticles,CSN)大小均匀(约70μm),分散程度好。通过ICSN凝集试验检测E.sakazakii结果表明,该新型凝集技术对目标菌的检测范围为6×103cfu/mL^6×109cfu/mL,其凝集结果清晰、直观、易于判别;重复性和稳定性好,而且具有良好的特异性和准确性。实验结果显示,采用ICSN建立的新型凝集技术具有灵敏、快速、稳定、简便、准确及低成本等优点,适用于快速检测E.sakazakii,并为其它病原性微生物快速检测方法的建立提供技术平台。

新型半定量精斑检测试纸条的研制及法医学应用

目的基于免疫层析技术,开发一种新型半定量精斑检测试剂条。方法采用双抗体夹心法,其中1株PSA单克隆抗体和1株羊抗小鼠IgG多克隆抗体分别包被在硝酸纤维素膜的T线(有两条线——T1和T2)和C线上;另外1株PSA单克隆抗体用彩色微球进行标记后,固定在玻璃纤维素膜上,制备成精斑检测检测卡,对其灵敏度及特异性等性能进行评估后,测试以下4个PSA内部校准品浓度(4ng/mL、40ng/mL、200ng/mL、500ng/mL),并对45份标本进行检测(其中有13份为陈旧精斑)。结果该方法的灵敏度为4ng/mL,检测的符合率为100%,检测高浓度样品(500ng/mL)时无明显的HOOK效应。能通过T1、T2线的显色情况判断检测样品的大致浓度,如当标准品浓度为4ng/mL时,仅有一条T1线及C线显色;当标准品浓度为40ng/mL时,T1、T2及C线均能显色,且T1线显色强度大于T2线;当标准品浓度为200ng/mL时,T1、T2及C线均能显色,且T2线显色强度大于T1线。结论建立了一种操作简便、灵敏度高,有良好准确性和重复性,可以有效避免HOOK效应且能对检测样品进行半定量检测的精斑试剂条检验方法。