基于NF-κB信号通路探讨益气活血托毒方对自身免疫性前列腺炎小鼠的影响

目的 基于核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨益气活血托毒方对自身免疫性前列腺炎(EAP)小鼠的影响及作用机制。方法 50只C57BL/6小鼠采用前列腺蛋白提纯液联合弗氏完全佐剂制备EAP小鼠模型,将造模成功的40只小鼠随机分为模型组、西药组(坦索罗辛)和中药(益气活血托毒方)低、高剂量组,每组10只,另取10只小鼠作为空白组,各给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。观察小鼠一般状况,ELISA检测血清炎症因子及免疫球蛋白含量,HE染色观察前列腺组织病理变化,Western blot检测前列腺组织p-NF-κB p65、p-NF-κB抑制物激酶β(p-IKK-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量减少(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IgA、IgG、IgM含量升高(P<0.01,P<0.05),前列腺组织炎症反应明显,p-NF-κB p65、p-IKK-β、TNF-α、IL-1β蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,中药低、高剂量组和西药组小鼠体质量增加(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IgA、IgG、IgM含量明显降低(P<0.05,P<0.01),前列腺组织炎症反应明显减轻,p-NF-κB p65、p-IKK-β、TNF-α、IL-1β蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论 益气活血托毒方可有效改善EAP小鼠前列腺组织病理形态,减轻炎症反应,调节免疫功能,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路相关蛋白p-NF-κB p65、p-IKK-β、TNF-α、IL-1β表达相关。

小檗碱调节AMPK/NF-κB信号通路对自身免疫性前列腺炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的探讨小檗碱调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法将90只SD雄性大鼠随机分为对照组(正常饲养)、模型组、小檗碱低剂量组(25 mg/kg)、小檗碱高剂量组(50 mg/kg)、阳性对照组(40 mg/kg塞来昔布)、抑制剂组(50 mg/kg小檗碱+0.2 mg/kg AMPK抑制剂compound C),每组15只。除对照组外,其余组大鼠均采用盆腔区域及双侧肩胛皮下多点注射完全弗式佐剂与前列腺组织混合悬液构建EAP大鼠模型,建模成功后进行药物处理,每天灌胃给药1次,持续4周。HE染色观察各组大鼠前列腺组织病理情况;免疫组织化学法检测大鼠前列腺组织视黄酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白3(Foxp3)表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;流式细胞仪检测大鼠外周血中Th17/Treg细胞比值;通过Western blot法检测大鼠前列腺组织中AMPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,小檗碱低、高剂量组和阳性对照组大鼠前列腺组织腔内有粉色分泌物,腺上皮细胞排列整齐,炎症明显消退,血清IL-17水平、外周血Th17/Treg比值、前列腺组织RORγt和p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平降低,血清IL-10水平、前列腺组织Foxp3、p-AMPK/AMPK和IκBα表达水平升高(P<0.05);加入AMPK抑制剂compound C后,可减弱小檗碱对EAP大鼠Th17/Treg平衡的促进作用。结论小檗碱可通过调节AMPK/NF-κB信号通路促进EAP大鼠Th17/Treg平衡。

加味虎杖散对自身免疫性前列腺炎模型大鼠炎症因子MCP-1及PDGF-BB表达的影响

目的:观察加味虎杖散对自身免疫性前列腺炎模型大鼠炎症因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血小板源生长因子BB(PDGF-BB)基因及蛋白表达的影响。方法:将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组12只,除正常组外,其余5组应用大鼠前列腺蛋白提纯液辅以免疫佐剂制备实验性自身免疫性前列腺炎大鼠模型,造模60d时正常组、模型组予生理盐水,西药组予消炎痛,加味虎杖散大剂量、中剂量、小剂量组分别按生药量0.445、0.223、0.089g/kg体重予中药复方连续灌胃,各组给药30d时处死,采用免疫组化、荧光定量RT-PCR等方法检测炎症因子mRNA及蛋白的表达。结果:加味虎杖散大、中、小剂量组前列腺组织MCP-1、PDGF-BBmRNA表达水平(MCP-1:0.31±0.14、0.49±0.21、0.62±0.28;PDGF-BB:0.50±0.22、0.54±0.17、0.71±0.29)及蛋白的IA值(MCP-1:677±208、725±311、1302±884;PDGF-BB:1265±698、1347±827、1655±812)与模型组(MCP-1mRNA:1.12±0.43;MCP-1蛋白:2201±934;PDGF-BBmRNA:1.14±0.51;PDGF-BB蛋白:2754±852)比较显著降低(P<0.05),且大、中剂量组作用要优于小剂量组(P<0.05);西药组MCP-1(mRNA:0.71±0.34;蛋白:1824±1157)、PDGF-BB(mRNA:1.08±0.37;蛋白:2493±924)表达水平显著高于加味虎杖散各组(P<0.01)。结论:调控炎症因子MCP-1、PDGF-BB可能是加味虎杖散治疗慢性非细菌性前列腺炎的重要分子机制之一。

电针“三阴”穴对自身免疫性前列腺炎大鼠炎症因子的影响

目的:观察电针"三阴"穴对自身免疫性前列腺炎大鼠局部炎症因子的影响。方法:在大鼠皮内注射同种异体Wistar雄性大鼠前列腺蛋白提纯液,辅以双重免疫佐剂复制自身免疫性前列腺炎大鼠模型。将40只雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、舍尼通对照组、电针组,每组10只。除正常对照组外,其余大鼠均造模处理,45 d后,正常对照组与模型组以抓取、捆绑、固定处理,电针组和舍尼通组分别给予电针"三阴"穴治疗和舍尼通药物灌胃。连续治疗2个疗程(每个疗程7 d,间隔1 d,共15 d)后处死各组动物,检测各组动物前列腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮合酶(iNOS)、总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)水平。结果:与正常对照组比较,模型组前列腺组织中TNF-α表达显著升高[(32.20±1.65)pg/ml vs(15.31±1.36)pg/ml](P<0.01)、iNOS活性显著增强[(1.25±0.23)U/ml vs(0.81±0.33)U/ml](P<0.01),T-AOC活性显著减低[(1.11±0.15)U/ml vs(1.56±0.16)U/ml](P<0.01),MDA含量明显增高[(0.91±0.21)nmol/ml vs(0.66±0.14)nmol/ml](P<0.05);与模型组比较,电针组前列腺组织中TNF-α表达[(17.32±2.69)pg/ml]明显降低(P<0.01)、iNOS活性[(0.98±0.15)U/ml]显著减低(P<0.05),T-AOC活性[(1.44±0.26)U/ml]明显增加(P<0.05),MDA含量[(0.70±0.20)nmol/ml]明显减低(P<0.05)。结论:电针"三阴"穴能够降低促炎症细胞因子活性,降低血管通透性,减少炎症细胞侵润,并提高局部抗氧化防御系统活性,从而抑制前列腺组织形态结构的损伤,减轻炎症反应,达到治疗目的。

建立实验性自身免疫性前列腺炎湿热证病证结合小鼠模型探讨

目的：探讨建立自身免疫性前列腺炎湿热证病证结合小鼠模型的方法。方法：将40只雄性KM小鼠随机抽取10只为正常组,其余30只应用Wistar大鼠前列腺蛋白提纯液辅以免疫佐剂及高脂高糖饮食、白酒、湿热环境制备实验性自身免疫性前列腺炎（湿热证）小鼠模型。造模期间观察小鼠的饮食、精神状态、大小便、舌象等情况;造模结束后处死小鼠,观察小鼠前列腺组织的病理学改变,用免疫组化法检测小鼠前列腺组织中TGF-β1、IL-6、IL-17A、TNF-α、NF-κBp65的表达。结果：正常组小鼠精神状况、饮食、饮水、活动及大小便情况均正常;模型组小鼠精神萎靡、饮食及饮水量减少、倦卧懒动、毛发无光泽、大便时溏、小便黄臭。正常组小鼠前列腺组织结构清晰,未见明显病理改变;模型组小鼠前列腺组织显示周围带炎症细胞浸润、伴纤维增生和脓肿形成,腺间质及腺体内炎症细胞浸润,腺体囊性扩张、乳头状增生,基底细胞增生。免疫组化法显示,与正常组比较,模型组小鼠前列腺组织中TGF-β1的表达显著降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;IL-6、IL-17A、TNF-α和NF-κBp65的表达显著上升,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论：采用高脂高糖饮食、白酒、湿热环境及前列腺蛋白提纯液免疫诱导可复制了湿热证EAP小鼠模型。

前列活血汤对自身免疫性前列腺炎大鼠模型前列腺内炎性细胞因子的影响

目的观察前列活血汤对自身免疫性前列腺炎大鼠模型(EAPAM)前列腺组织内炎性细胞因子的影响,从而探讨中药治疗前列腺炎的作用机制和作用靶点。方法60只雄性Wistar大鼠选择40只,随机分成四组:正常对照组、模型组、前列泰组、前列活血汤组,每组10只;余20只制作前列腺组织抗原用。除正常组外,余三组经腹部皮下多点注射大鼠前列腺组织抗原造模(EAPAM)。免疫造模3天后,除正常组外,余三组动物分别予生理盐水、前列泰、前列活血汤灌胃8周。动物处死后光镜下观察各组大鼠前列腺组织的病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠前列腺组织中白介素8(IL-8)、白介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;聚合酶链式反应法(PCR)检测大鼠前列腺组织中TNF-αmRNA的表达水平。结果模型组前列腺组织中IL-8、IL-10、TNF-α、TNF-αmRNA表达水平较正常对照组均明显升高(P<0.05);前列腺活血汤组前列腺组织中IL-8、IL-10、TNF-α、TNF-αmRNA表达水平较模型组均有所降低(P<0.05)。结论前列活血汤能通过调节前列腺局部免疫状态从而明显减轻模型大鼠前列腺的炎症反应。

丹蒲胶囊对自身免疫性前列腺炎大鼠模型炎性因子的影响

目的观察丹蒲胶囊对自身免疫性前列腺炎大鼠模型(EAPAM)炎性细胞因子的影响,探讨中药治疗慢性前列腺炎(CP)的作用机制。方法采用腹部皮下多点注射大鼠前列腺组织抗原的方法造成EAPAM,随机分成3组,每组10只,即:丹蒲胶囊组、前列泰片组、模型组,并以10只正常动物作为正常对照组。各组动物给予灌胃治疗,给药56天后处死动物,光镜观察各组动物前列腺组织的病理改变,通过酶联免疫吸附法检测各组动物血清及前列腺组织中IL-8、IL-10、TNF-α、PGE2等的水平。结果与正常对照组比较,模型组动物血清及前列腺组织中IL-8、、IL-10、TNF-α水平及前列腺组织中PGE2水平均明显升高(P<0.05～0.01)。丹蒲胶囊组血清及前列腺组织中IL-8〔(3.07±0.61)ng/L、(7.32±2.44)ng/L〕较模型组〔(4.73±1.95)ng/L、(10.14±3.64)ng/L〕降低;丹蒲胶囊组血清及前列腺组织TNF-α〔(85.34±19.20)ng/L、(87.01±15.40)ng/L〕较模型组〔(111.48±31.57)ng/L、(119.88±14.13)ng/L〕降低;丹蒲胶囊组前列腺组织中IL-10〔(34.05±7.56)ng/L〕较模型组〔(47.20±15.97)ng/L〕明显降低;丹蒲胶囊组PGE2〔(603.97±114.62)ng/L〕较模型组〔(712.58±117.10)ng/L)〕也明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论丹蒲胶囊能够明显减轻模型大鼠前列腺炎症反应,调节局部免疫状态。

自身免疫性前列腺炎大鼠机械痛阈变化的研究

目的:建立免疫性前列腺炎大鼠模型,探讨模型大鼠机械痛阈的变化规律,为免疫性前列腺炎疼痛机制的研究及药物治疗提供动物实验依据。方法:将20只180～220 g的雄性Wistar大鼠随机均分为模型组与对照组,模型组大鼠分别于第0、30天皮下多点注射60 mg/ml大鼠前列腺蛋白提纯液,同时腹腔注射百白破疫苗及弗氏完全佐剂,建立免疫性前列腺炎大鼠模型。造模8周后处死动物,HE染色观察各组前列腺组织的病理学表现;运用Von Frey纤毛机械刺激针,于实验开始第0天起每周触压各组大鼠的后足,测定其对机械性轻压和轻触痛的反应阈值。结果:HE染色可见模型组大鼠前列腺组织出现不同程度的慢性炎症表现。与对照组[初始痛阈值为(69.33±4.99)g,第8周痛阈值为(66.53±4.48)g]相比,模型组大鼠的机械性痛阈值随造模时间的延长逐渐降低[模型组初始痛阈值为(65.52±6.27)g,第8周痛阈值为(23.67±4.09)g],差异有统计学意义(P<0.01);且两组大鼠在不同时间点机械性痛阈的变化趋势不同,此差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本研究成功建立了自身免疫性前列腺炎大鼠模型,且造模后大鼠机械痛阈值逐渐降低,出现异常痛敏表现。

Th17T淋巴细胞浸润及相关细胞因子在免疫性前列腺炎组织中的表达水平

目的:分析Th17T淋巴细胞浸润及相关细胞因子在免疫性前列腺炎组织中的表达水平。方法:将60只小鼠分为2组,研究组和对照组,造模成功后,取前列腺组织,分别进行免疫组化和PCR检测Th17T淋巴细胞浸润及其相关细胞因子表达情况。结果:前列腺炎组小鼠前列腺组织中CD4+,CD8+,IL-17+T淋巴细胞计数显著高于对照组(P<0.01)。前列腺炎组小鼠前列腺组织中IL-17、IL-23p19、IL-23p40 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.01)。结论:免疫性前列腺炎组织Th17T淋巴细胞浸润及其相关细胞因子表达显著升高。

泽桂癃爽对实验性自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺IFN-γ和IL-4的影响

目的:探讨泽桂癃爽(Zegui Longshuang)对实验性自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织IFN-γ和IL-4表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为EAP模型阳性对照组、泽桂癃爽干预组(0.9g.kg-1)和阴性对照组。以Wistar大鼠前列腺蛋白提纯液辅以完全弗氏佐剂和百白破疫苗制作EAP模型。通过HE染色观察各组前列腺组织炎性细胞浸润情况,通过电镜观察前列腺细胞及细胞周围超微结构的变化,应用半定量RT-PCR法检测前列腺组织IFN-γ和IL-4的含量。结果:与EAP阳性对照组比,泽桂癃爽干预组大鼠的前列腺炎性细胞浸润减轻,前列腺组织的IFN-γ降低(P<0.01),IL-4升高(P<0.05),差异均有显著性。结论:泽桂癃爽可降低前列腺组织IFN-γ含量,提高IL-4的含量,减轻EAP的前列腺组织炎症浸润。

自身免疫性前列腺炎大鼠模型的建立

目的:使用前列腺蛋白提纯液建立自身免疫性前列腺炎大鼠模型。方法:选用36只Wistar大鼠,随机分为对照组、低浓度组和高浓度组,每组12只。对照组注射生理盐水,低浓度和高浓度组实验大鼠于0、14 d分别注射等剂量15 mg/ml及80 mg/ml浓度的前列腺蛋白提纯液,4周后处死大鼠,前列腺组织HE染色,取大鼠外周血检测血清炎症因子IL-8、IL-10,血清免疫球蛋白IgA、IgM,辅助性T细胞Th1/Th2等指标。结果:高浓度组有3只大鼠死亡,对照组与低浓度组均无死亡。前列腺大体观察对照组无明显变化,低浓度组大鼠前列腺体积增大,质地稍硬,高浓度组大鼠前列腺质地坚硬,与周围组织粘连。实验组病理切片显示前列腺组织腺体结构破坏,有炎性细胞浸润。大鼠血清IL-8指标低浓度组[(129.07±11.48)pg/ml]、高浓度组[(147.58±17.70)pg/ml]与对照组[(94.12±7.04)pg/ml]比明显升高(P<0.05);大鼠血清IL-10指标低浓度组[(227.14±18.19)pg/ml]、高浓度组[(187.14±16.32)pg/ml]与对照组[(252.48±21.72)pg/ml]相比显著降低(P<0.05)。大鼠血清IgA与对照组[(0.19±0.14)mg/ml]相比,低浓度组[(0.25±0.37)mg/ml]和高浓度组[(0.31±0.42)mg/ml]明显升高(P<0.05);大鼠血清IgM指标低浓度组[(0.23±0.41)mg/ml]、高浓度组[(0.34±0.58)mg/ml]与对照组[(0.17±0.33)mg/ml]相比,显著升高(P<0.05)。外周血辅助性T细胞Th1/Th2未见明显改变。结论:低、高浓度组大鼠造模均获成功。使用低浓度的前列腺蛋白提纯液造模的动物死亡率低,病理改变及血清炎症因子变化符合自身免疫性前列腺炎的表现,可作为制备自身免疫性前列腺炎的可靠模型浓度。

复方玄驹胶囊治疗自身免疫性前列腺炎大鼠的实验研究

目的:研究复方玄驹胶囊对自身免疫性前列腺炎大鼠的治疗效果。方法:健康Wistar大鼠60只,随机分为5组,对照组、低浓度蛋白免疫模型组、低浓度蛋白免疫+复方玄驹胶囊全方治疗组、高浓度蛋白免疫模型组、高浓度蛋白免疫+复方玄驹胶囊全方治疗组。除对照组外,其余4组用高低两种浓度(15 mg/ml及80 mg/ml)的同种大鼠前列腺匀浆蛋白提纯液进行注射造模。造模(30 d)成功后,对照组和模型组生理盐水[1 ml/(200 g·d)]灌胃,治疗组用生理盐水溶解的复方玄驹胶囊全方[0.068 g/(ml·d)]灌胃,随后分别于30、45、60 d分批处死大鼠。用ELISA法检测大鼠血清中的IL-8、IL-10及TNF-α的表达,并观察大鼠前列腺组织病理切片。结果:与模型组相比,经复方玄驹胶囊全方灌胃治疗的高浓度蛋白免疫大鼠血清中IL-8、TNF-α在造模45 d时由(148.54±17.23)pg/ml、(62.14±5.59)pg/ml下降到(100.77±11.08)pg/ml、(32.63±2.91)pg/ml(P<0.05);60 d时由(143.69±17.28)pg/ml、(59.38±5.50)pg/ml降到(95.77±10.53)pg/ml、(29.63±2.66)pg/ml(P<0.05)。低浓度组造模45 d时IL-8、TNF-α亦由(128.47±12.21)pg/ml、(40.43±3.64)pg/ml下降至(111.76±10.07)pg/ml、(35.44±3.17)pg/ml(P<0.05),60 d时由(131.07±10.93)pg/ml、(43.34±3.91)pg/ml降至(97.46±8.75)pg/ml、(30.44±2.75)pg/ml(P<0.05)。高浓度蛋白免疫的治疗组大鼠血清IL-10在造模45 d、60 d分别由(189.14±16.78)pg/ml、(184.14±15.89)pg/ml上升至(230.48±29.96)pg/ml、(248.48±31.03)pg/ml(P<0.05),低浓度组由(223.14±17.87)pg/ml、(224.14±17.93)pg/ml升高至(231.42±23.18)pg/ml、(249.42±24.97)pg/ml(P<0.05)。病理切片示对照组无明显变化;实验组病理切片显示大鼠前列腺组织腺体结构破坏,炎性细胞浸润;治疗组治疗15 d后光镜下观察病变逐步改善,腺腔增大,上皮细胞轻度增生,间质中无明显炎性细胞浸润,可见少量纤维组织。结论:复方玄驹胶囊能降低自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织炎性改变,并有效改善炎性因子表达,对大鼠自身免疫性前列腺炎有一定疗效。

槲皮素对自身免疫性前列腺炎模型COX-2及5-LOX表达的影响

目的：建立两种慢性自身免疫性前列腺炎模型，探讨槲皮素（Quercetin）对模型大鼠前列腺组织中炎症因子环氧化酶-2活性（COX-2）、5-脂氧酶（5-LOX）活性、排尿量及尿离子浓度的影响。方法：采用两种自身免疫性前列腺炎大鼠模型：雌二醇诱导的模型（M1）及纯化大鼠前列腺蛋白联合免疫佐剂诱导的模型（M2），分别给药30d后测定大鼠0～4h排尿量及尿离子浓度（M1）；处死大鼠，取前列腺称重计算前列腺指数；取前列腺液镜下观察白细胞数及卵磷脂小体密度；HE染色制备前列腺组织病理切片并镜下观察；WesternBlot法及免疫组化法测定前列腺组织内COX-2及5-LOX的表达。结果：两个模型中，槲皮素200mg／kg给药组前列腺液内卵磷脂小体密度均明显增加，M1中槲皮素200mg／kg给药组前列腺指数降低，M2中槲皮素200mg／kg能明显降低前列腺液中的白细胞数；病理切片中均可见病变明显改善；两种模型中前列腺组织内COX-2及5-LOX表达明显被抑制；槲皮素200mg／kg组对模型大鼠尿液中的Na和cl-的排出有明显的促进作用，但对K’的影响并不十分显著（M1）；槲皮素（200mg／kg、100mg／kg）组能明显增加水负荷大鼠0～4h的排尿量，与对照组比较差别具有统计学意义（M1）。结论：槲皮素可能是通过抑制前列腺组织内COX-2及5-LOX表达从而改善慢性前列腺炎并可能通过促进Na和cl-的排出改善模型大鼠排尿困难症状。

自身免疫性前列腺炎动物模型及评价标准研究进展

慢性前列腺炎是一种发病率高且目前发病机制尚未明确的疾病。研究表明,自身免疫反应是其产生的原因之一。而建立有效的动物模型是了解自身免疫性前列腺炎发病机制、寻找其正确诊疗手段的有效途径和方法。目前与自身免疫性前列腺炎相关的动物模型主要包括年龄相关的自发性前列腺炎模型、自身免疫调节因子(AIRE)相关的自发性前列腺炎模型、自身抗原诱导的前列腺炎模型以及激素诱导的前列腺炎模型。自身免疫性前列腺炎动物模型是否造模成功主要从组织学、形态学、特异性抗原、炎症因子以及疼痛程度这5个方面进行评价。

前列消汤干预TGF-β1/Smad4、Smad 7信号通路调控实验性自身免疫性前列腺炎小鼠前列腺成纤维细胞增殖与凋亡的研究

目的:观察中药方前列消汤干预TGF-β1/Smad4、Smad 7信号转导通路对实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)小鼠前列腺成纤维细胞(PrF)增殖与凋亡的调控作用。方法:采用C57BL/6小鼠制备前列消汤含药血清,根据细胞毒性实验结果,以5%、10%、20%的含药血清分别作为低、中、高剂量组进行干预实验。采用"免疫诱导+中医病因造模法"建立湿热证EAP小鼠模型,无菌条件下取出前列腺组织,分离培养PrF,采用差速贴壁法纯化PrF,免疫荧光法检测PrF纯度,纯度达90%以上即以5 ng/ml TGF-β1浓度的培养液刺激进行建模。取建模后对数生长期的PrF随机分为空白组(无血清培养液),模型组,阳性对照组(含TGF-β1浓度5 ng/ml的培养液),前列消汤低、中、高剂量组,每组6个复孔;干预培养24 h后检测各组PrF增殖情况,采用Western印迹检测TGF-β1的表达水平和Smad4、Smad7、p-Smad4、p-Smad7的表达水平,qPCR检测TGF-β1、Smad4、Smad7 mRNA的表达,流式细胞术检测PrF细胞凋亡情况。结果:经TGF-β1诱导后,与模型组比较,阳性对照组PrF细胞增殖明显(P<0.05),前列消汤低、中剂量组PrF细胞增殖受抑制(P<0.05),前列消汤高剂量组PrF细胞增殖受明显抑制(P<0.01);与阳性对照组比较,前列消汤各剂量组PrF细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),且呈明显的量效关系。与模型组比较,阳性对照组Smad4、p-Samd7和TGF-β1蛋白表达显著增加(P<0.05);经前列消汤含药血清干预后,与阳性对照组比较,前列消汤含药血清能显著下调PrF细胞内p-Smad4,TGF-β1蛋白的表达(P<0.01),而增加p-Samd7的表达水平(P<0.01)。qPCR结果显示,与模型组相比,前列消汤高剂量组Smad4基因表达有显著差异(P<0.05),前列消汤低、中、高剂量组Smad7基因表达有显著差异(P<0.05);前列消汤低、中、高剂量组TGF-β1基因表达水平显著上调(P<0.01);与阳性对照组相比,前列消汤高剂量组Smad4基因表达有显著差异(P<0.05),模型组、前列消汤低、中、高剂量组Smad7基因表达有显著差异(P<0.01),前列消汤低、中、高剂量组TGF-β1基因表达水平显著下降(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组PrF细胞凋亡率无明显差异(P>0.05),前列消汤各剂量组凋亡率均显著提高(P<0.05),且呈明显的量效关系。结论:经TGF-β1诱导可刺激PrF细胞增殖,上调TGF-β1、p-Smad4的表达,下调p-Smad7的表达。前列消汤可以抑制PrF增殖,且呈明显的量效关系,其机制可能与其降低TGF-β1和p-Smad4的表达、提高p-Smad7的表达从而阻断TGF-β1通过Smad4途径诱导PrF细胞增殖相关。

中医药干预实验性自身免疫性前列腺炎的研究进展

慢性前列腺炎(CP)是以发病缓慢、病情复杂、反复发作、病情缠绵难愈为特点的一种男性泌尿生殖系统疾病。有研究表明异常的自身免疫反应是CP产生的原因之一。目前,现代医学对CP的异常自身免疫反应尚无特异性的干预方法,但已有许多学者的研究表明中医药对实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)有较好的调控作用。文章就近年来中药复方、中药有效成分以及中医针灸在干预EAP的研究进展进行综述。

清热活血类中药对自身免疫性前列腺炎(EAP)模型相关炎症因子干预作用的系统评价

目的:系统评价清热活血类中药对自身免疫性前列腺炎(EAP)模型相关炎症因子干预作用的有效性。方法:检索中国知网、中国生物医学文献数据库、维普中文科技期刊数据等,筛选清热活血类中药对EAP模型干预实验研究,制作文献资料筛选路径并实行资料提取,采用SYRCLE动物实验偏倚风险评估工具对纳入文献研究进行偏倚风险评估,并用Rev Man 5.3软件对结局指标进行Meta分析。结果:共纳入10个研究,研究对象为Wistar大鼠或昆明(KM)小鼠,均为随机对照实验。Meta分析结果显示:与模型组相比,清热活血类中药可降低炎性因子IL-1水平(SMD=-2.52,95%CI[-3.27,-1.77])、IL-6水平(SMD=-1.54,95%CI[-2.30,-0.78])、IL-8(SMD=-1.45,95%CI[-1.94,-0.97)、IL-17水平(SMD=-3.52,95%CI[-4.61,-2.44]),抑制TNF-α表达(SMD=-3.78,95%CI[-5.53,-2.02]),P<0.000 01;对IFN-γ水平无明显影响(SMD=-0.47,95%CI[-1.09,0.15],P=0.14)。异质性分析显示,P<0.000 01,I2=92%,显示两组异质性较大。结论:清热活血类中药能够有效抑制EAP模型动物前列腺内炎症因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α的表达,存在一定的量效关系,但对IFN-γ无明显影响。

土茯苓总黄酮治疗自身免疫性前列腺炎模型大鼠作用机制研究

目的探讨土茯苓总黄酮治疗自身免疫性前列腺炎模型大鼠作用机制。方法60只SD大鼠按照随机数字表法分成空白组、模型组、阿司匹林组(100 mg/kg)和土茯苓总黄酮低(100 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高剂量组(500 mg/kg),每组10只。除空白组注射等体积生理盐水外,其余各组大鼠均利用腹腔注射百白破疫苗(0.5 mL)+皮下多点注射前列腺蛋白提纯稀释液与完全弗氏佐剂混合乳剂(1 mL),建立自身免疫性前列腺炎大鼠模型。造模成功后土茯苓总黄酮低、中、高剂量组按100、300及500 mg/kg土茯苓总黄酮灌胃,空白组、模型组给予相同体积生理盐水,阿司匹林组给予100 mg/kg阿司匹林混悬液,每天1次,连续给药15 d。HE染色观察前列腺组织形态学变化;ELISA法测定大鼠前列腺组织白细胞介素1β(IL-1β),白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果与空白组比较,模型组大鼠前列腺组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达明显增加[IL-1β:(68.37±3.74)ng/L比(4.16±0.72)ng/L,IL-6:(285.87±41.37)ng/L比(119.18±32.18)ng/L,TNF-α:(356.16±51.64)ng/L比(97.18±16.59)ng/L,P均<0.05]。与模型组比较,阿司匹林组和土茯苓总黄酮低、中、高剂量组IL-1β水平均明显下降[(16.67±1.53)ng/L、(56.23±7.19)ng/L、(40.74±2.68)ng/L、(22.39±1.72)ng/L比(68.37±3.74)ng/L,P均<0.05];TNF-α明显降低[(105.61±27.98)ng/L、(284.71±17.39)ng/L、(227.24±6.97)ng/L、(188.67±17.17)ng/L比(356.16±51.64)ng/L,P均<0.05];IL-6除土茯苓总黄酮低剂量组降低不明显以外[(281.34±20.81)ng/L比(285.87±41.37)ng/L,P>0.05],阿司匹林组和土茯苓总黄酮中、高剂量组均明显下降[(120.37±42.02)ng/L、(158.37±34.21)ng/L、(112.94±16.46)ng/L比(285.87±41.37)ng/L,P均<0.05]。病理结果显示,各组大鼠前列腺组织病理表现与其炎症因子表达程度相一致。结论土茯苓总黄酮能降低自身免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺组织IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平,改善前列腺病理形态,减轻前列腺组织炎症反应。

前列消汤通过IL-6/JAK2/STAT3通路调控自身免疫性前列腺炎炎症反应的机制

目的:探讨前列消汤通过白细胞介素6(IL-6)/Janus激活激酶2(JAK2)/信号转导激活因子3(STAT3)通路调控自身免疫性前列腺炎(EAP)炎症反应的机制。方法:将雄性SPF级C57BL/6小鼠180只按随机数表法分为空白组,模型组,阳性对照组(AG490抑制剂),前列消汤低、中、高剂量组;采用复合因素制备EAP湿热证小鼠模型,以前列腺湿重指数、HE评估模型,Western Blot、RT-PCR检测EAP小鼠前列腺组织IL-6、糖蛋白130(gp130)、JAK2、STAT3、信号转导抑制因子3(SOCS3)、视黄酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17A(IL-17A)、叉头样转录因子3(Foxp3)蛋白及mRNA表达水平。结果:模型组前列腺湿重指数较空白组升高(P<0.05);与空白组比较,模型组单核、炎症细胞浸润及腺泡细胞壁增厚、腺腔结构紊乱,各药物组不同程度改善模型小鼠前列腺的炎症浸润程度,前列消各剂量组干预效果以高剂量组最为显著;与EAP组比较,除前列消汤低剂量组RORγt蛋白外,前列消汤各剂量组显著下调IL-6、gp130、JAK2、STAT3、SOCS3、RORγt、IL-17A、Foxp3蛋白及mRNA表达(P<0.01,P<0.05)。结论:前列消汤通过IL-6/JAK2/STAT3通路抑制EAP炎症反应,进而改善EAP小鼠前列腺病理结构及自身免疫反应功能。

免疫性非细菌性前列腺炎大鼠内环境因素关联性研究

目的:探讨前列腺组织蛋白结合免疫佐剂法诱导的SD大鼠非细菌性前列腺炎的炎症反应与内环境因素之间的关系。方法:30只大鼠随机分成3组,其中一组为阴性对照组,其它两组为试验组,第0、7天多点皮内注射浓度分别为20、40mg/mL的大鼠前列腺蛋白提纯液联合完全弗氏佐剂(1∶1的混悬液)1.0mL,腹腔注射百白破疫苗0.5mL,第21天皮内注射大鼠前列腺蛋白提纯液0.5mL,阴性对照组在相同时间和部位注射同等剂量的生理盐水,造模后第55天处死大鼠。结果:前列腺蛋白提纯液联合完全弗氏佐剂制作诱导SD大鼠前列腺炎后,可见前列腺间质有大量炎细胞浸润,以淋巴细胞为主,呈现明显的慢性炎症表现。免疫因素引起的慢性非细菌性前列腺炎可导致免疫球蛋白G(IgG)浓度明显升高(P<0.05),免疫球蛋白M(IgM)浓度明显降低(P<0.05),C-反应蛋白(CRP)和前列腺特异抗原(PSA)含量明显增加(P<0.05)。结论:根据本实验的结果,免疫性非细菌性前列腺炎大鼠体内IgG、IgM、CRP和PSA含量呈现关联性变化。