兔自身免疫性干眼模型的建立及泪腺炎症因子研究

目的通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。结果与正常对照组相比,干眼模型组泪液分泌显著减少(t=115.6,P<0.05),泪膜破裂时间缩短(t=92.5,P<0.05)。荧光素钠染色显示角膜弥漫性点状着色,正常对照组基本无着色。泪腺组织HE染色显示淋巴细胞浸润,正常对照组很少。RT-PCR结果显示,干眼模型组泪腺中炎性因子IFN-γ、IL-6、IL-17 mRNA相对表达量显著升高(t=26.2、18.7、8.4;均为P<0.05),抑炎因子IL-10、TGF-βmRNA相对表达量显著降低(t=22.1、14.2;均为P<0.05)。结论经兔泪腺上皮细胞激活的自体外周血淋巴细胞静脉回输后,成功诱发干燥综合征样自身免疫泪腺炎,建立了稳定的兔自身免疫性干眼模型。泪腺组织中细胞因子IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β、IL-10参与泪腺内炎症反应的发生和发展。

髓鞘蛋白脂质蛋白多肽不同抗原决定簇对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型神经功能评分及形态学改变的影响

目的:试图观察髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(proteolipidprotein,PLP)两种不同肽段PLP193～151和PLP178～191抗原决定簇对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)模型建立的影响。方法:实验于2004-02/06在解放军总医院神经病理研究室进行。应用PLP193～151和PLP178～191免疫雌性SJL/J小鼠,制作复发缓解型实验性自身免疫性脑脊髓炎(relapseremittingEAE,RR-EAE)模型,观察其神经功能评分的变化及组织形态学改变;用不同浓度的两种肽段体外刺激经两种肽段免疫后的小鼠的淋巴细胞,并观察其增殖强度。结果:两种PLP肽段免疫的小鼠发病均具有缓解-复发的特点,并出现血管鞘形成、炎性细胞浸润及脱髓鞘等特征性改变;但是,PLP178～191诱导的模型发病时间早(P<0.01),症状较重,表现多样。不同PLP肽段及其浓度间的差异有统计学意义(P=0.000)。PLP178～191在5mg/L时A值最高(2.36±0.14),而PLP139～151在50和100mg/L的A值增高有统计学意义(P=0.000)。结论:PLP两种肽段均可诱发RR-EAE模型,但二者诱发的模型各具特点,这是由其不同抗原决定簇决定的。

卡介苗加脂多糖建立大鼠急性免疫性肝损伤模型的研究

目的 构建接近临床病毒性肝炎发病机制的肝损伤动物模型 ,以便对病毒性暴发性肝炎作进一步的研究。方法 用不同剂量的卡介苗 (BCG)及不同剂量的脂多糖 (LPS)诱导SD大鼠建立急性免疫性肝损伤模型 ,以大鼠血清转氨酶水平变化和肝脏病理学检查等指标作为肝损伤判断标准 ,并以流式细胞仪对该模型的血清中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞百分比计数 ,以ELISA法对TNFα IgG、白介素 (IL 6和IL 10 )水平进行了检测。结果 “BCG +LPS”所造免疫性急性肝损伤模型当以BCG剂量 5× 10 7个活菌 /只及LPS剂量 30 μg kg时ALT升高明显 ,达正常对照 10倍以上 ,AST也较正常对照升高两倍 ;肝脏组织病理损伤中“Ⅲ”级和“Ⅳ”级大于 70 % ,而且其细胞因子水平较正常大鼠升高。对血清中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞百分比也有影响。结论 以“BCG +LPS”所造模型比较成功 ,该模型能充分造成大鼠急性肝损伤 ,且能影响免疫系统 ,与病毒性肝炎的发病机制相似 。

实验性自身免疫性葡萄膜炎模型的研究进展

葡萄膜炎是眼科常见的致盲性眼病之一。实验性自身免疫性葡萄膜炎模型(EAU)是研究人类葡萄膜炎乃至全身自身免疫性疾病的一种实验动物模型。EAU模型通过视网膜抗原诱导造模,以眼部视网膜及周围相关组织为靶器官,是研究葡萄膜炎机制以及检验新型抗感染及免疫抑制类药物的重要工具。文章就实验性自身免疫性葡萄膜炎模型的造模方法、基本病程、评价方法、模型机制以及研究前景等方面进行综述。

转化医学理念指导下的芍药甘草汤对实验性免疫性葡萄膜炎模型大鼠作用机制研究

目的 ：观察不同配比的芍药甘草汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠眼部体征、血清、脾脏及腹股沟淋巴结IL-17的影响,探讨芍药甘草汤干预葡萄膜炎的机制。方法：采用光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）混合完全弗氏佐剂（CFA）及结核杆菌反复3次皮下注射建立EAU大鼠模型,不同配比的芍药甘草汤灌胃干预;采用数码裂隙灯动态观察免疫后各组大鼠的眼部炎症表现;ELISA法检测白细胞介素-17（IL-17）表达量的变化。结果：不同配比的芍药甘草汤均可减轻EAU大鼠眼部炎性病变,不同程度的恢复大鼠体内IL-17表达,且以3∶1组效果佳。结论：芍药甘草汤以3∶1配比可以有效减轻葡萄膜炎眼部的炎症改变,其机制可能与下调致炎因子IL-17表达有关。

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立的关键性问题

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型是国际公认的多发性硬化(MS)的经典动物模型,被广泛用于MS发病机制和评价免疫调节药物的实验研究。实验操作中仍有较多缺陷导致发病率不能达到100%和死亡率偏高,需要对造模的关键技术不断完善。加强该模型免疫前准备工作、免疫操作和免疫后护理3个方面的研究,分析EAE模型成功建立的关键性问题,并根据实验操作过程提出解决办法,完善EAE模型的规范化造模流程,可以使EAE模型具备发病率高、死亡率低、模型稳定的特点。

Anti-DNP IgE联合DNFB诱导免疫性接触性荨麻疹小鼠模型的建立

目的:利用抗-二硝基苯酚(anti-DNP)Ig E单克隆抗体和2,4-二硝基氟苯(DNFB)建立免疫性接触性荨麻疹小鼠模型。方法:将36只BALB/c小鼠随机分成3组,每组12只:造模组小鼠尾静脉注射anti-DNP Ig E单克隆抗体,24 h后在小鼠双耳涂DNFB进行激发;单纯Ig E组仅注射anti-DNP Ig E单克隆抗体,空白对照组小鼠注射生理盐水,均在24 h后在小鼠双耳涂生理盐水。观察小鼠在14 d内的风团、瘙痒、耳朵肿胀度情况,并检测血清中Ig E、IL-4、IFN-γ、组胺水平和皮肤病理。结果:造模组全部小鼠产生风团;与其它两组相比,造模组小鼠搔抓次数、耳朵肿胀度及组胺血清水平均明显升高(P值均<0.01),但三组间Ig E、IL-4、IFN-γ水平无明显差异(P>0.05)。结论:静脉注射anti-DNP Ig E单克隆抗体联合外用DNFB可快速、可靠地建立免疫性接触性小鼠荨麻疹模型。

IL-18抗体对急性免疫性肝坏死动物模型的影响

目的探讨白细胞介素(IL) 18 抗体干预,了解IL 18 抗体对急性免疫性肝坏死动物模型的影响。方法取BALB/c 小鼠18 只,随机平分为三组A组(正常对照组);采用结核菌苗(BCG)加脂多糖(LPS)诱导法建立急性免疫性肝损伤模型B组(单纯病理组);抗体治疗组(C组)在模型形成前用IL 18抗体干预。实验结束取所有BALB/c小鼠肝组织,行病理学肝组织炎症活动度计分(HAI),血清IL 18由ELISA法检测,肝组织IL 18、肿瘤坏死因子α(INF α)、干扰素γ(IFN γ)由RT PCR检测。结果C组HAI 3 333±1 633,明显低于B组19 000±0 548(P<0 05);B组血清IL 18明显较C组增高(P<0 05);B组肝组织IL 18、IFN γ、INF αmRNA表达水平明显较C组增高(P<0 05)。结论IL 18、IFN γ、TNF α在急性免疫性肝坏死动物模型的形成中发挥重要作用,IL 18抗体可干预其形成。

紫癜颗粒对免疫性血小板减少性紫癜模型小鼠骨髓细胞白介素-6及其蛋白表达的影响

目的通过观察免疫性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠骨髓细胞白介素-6(IL-6)含量及其蛋白表达的变化,探讨IL-6含量及其蛋白表达变化与ITP发病之间的内在联系。方法采用酶联免疫方法检测ITP模型小鼠骨髓细胞IL-6含量变化;实时定量PCR法检测骨髓细胞IL-6mRNA表达。结果模型组小鼠骨髓细胞IL-6含量及其蛋白表达明显升高,均有统计学意义(P<0.05)。结论调节巨核细胞的作用因子IL-6参与了ITP的发病过程并发挥重要作用,紫癜颗粒通过调控骨髓细胞IL-6含量变化而达到有效治疗ITP的目的 。

补中益气颗粒对自身免疫性甲状腺炎模型大鼠小肠肠黏膜超微结构的影响

目的通过观察补中益气颗粒对实验性自身免疫性甲状腺炎(Experimental autoimmune thyroiditis,EAT)模型大鼠小肠肠黏膜超微结构的影响,探讨其改善桥本氏甲状腺炎的作用机制。方法36只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为4组,分别为空白组、模型组、补中益气组、硒酵母组4组。除空白组外,其余组大鼠采用高碘喂养法,联合猪免疫球蛋白和弗氏佐剂混合免疫注射法建立EAT大鼠模型。造模后,补中益气组和硒酵母组大鼠分别灌胃补中益气颗粒和硒酵母片。56 d后检测各组大鼠甲状腺过氧化物酶抗体(Thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(Thyro⁃globulin antibody,TGAb)、血清连蛋白(Zonulin)含量,分离大鼠甲状腺与小肠,在光镜(Light microscope,LM)下观察空白组与模型组甲状腺组织病理变化、各组大鼠小肠组织病理变化,在透射电镜(Transmission electron microscope,TEM)下观察大鼠小肠肠黏膜上皮细胞(Intestinal mucosal epithelial cells,IPC)超微结构变化。结果与空白组比较,模型组血清TPOAb、TGAb、Zonulin含量明显上调(P<0.05)。与模型组比较,补中益气组、硒酵母组血清TPOAb、TGAb、Zonulin含量明显下降(P<0.05)。与空白组比较,LM下模型组大鼠甲状腺组织中有大量淋巴细胞浸润,甲状腺滤泡萎缩、消失,上皮细胞嗜酸性变,小叶间隔增宽,间质纤维化,提示造模成功。EAT大鼠肠绒毛结构紊乱,上皮细胞脱落,固有层裸露,杯状细胞减少,炎性细胞浸润,TEM下IPC微绒毛变短而厚,细胞间隙扩大,紧密连接受损,线粒体肿胀、嵴断裂、基质变淡,细胞器超微结构明显受损。与模型组比较,补中益气组肠绒毛、细胞间紧密连接、细胞器结构受损减轻。结论补中益气汤可以减轻EAT大鼠小肠肠黏膜超微结构损害。

MOG抗原诱导的自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及组织蛋白酶抑制剂cystatin F的表达

[目的]研究组织蛋白酶抑制剂cystatin F在少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55诱导的自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中的表达。[方法]利用MOG 35-55建立EAE模型,通过行为学观察对其进行神经功能评分;利用免疫组织化学方法证明髓鞘脱失情况;通过连续切片分析,及原位杂交和免疫组化技术对小胶质细胞活化和cystatinF的表达进行研究。[结果]利用MOG35-55可成功制备EAE模型;cystatin F在正常小鼠中枢神经系统内没有表达,但在脱髓斑块周围可见其表达。通过系列连续切片分析,其表达与在脱髓斑块周围积聚的小胶质细胞具有高度的一致性。[结论]cystatin F在MOG诱导的EAE中具有表达,其表达与积聚的小胶质细胞具有高度的一致性。

黄芩苷对卡介苗加脂多糖诱导免疫性肝损伤小鼠的作用

目的研究黄芩苷对免疫性肝损伤小鼠的作用.方法采用卡介苗加脂多糖(BCG+LPS)诱导小鼠免疫性肝损伤模型,通过检测血清谷丙转氨酶(ALT)的活性,计算脾脏等脏器指数并检查肝组织的病理损伤程度,研究黄芩苷的护肝作用.结果黄芩苷对BCG+LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤有明显保护作用,可降低肝损伤小鼠血清ALT的活性和肝脏、胸腺指数,与模型对照组比较有显著差异(P<0.05～0.01),且可不同程度减轻肝脏病理损伤. 结论黄芩苷对小鼠免疫性肝损伤有保护作用,对小鼠的免疫功能有调节作用.

黄芪注射液对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的 :探讨黄芪注射液对免疫性肝损伤的预防保护作用。方法 :采用静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPs)复制免疫性肝损伤模型 ,观察黄芪注射液对肝损伤的影响。结果 :黄芪注射液显著降低了肝损伤小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)的含量和脾脏系数。结论 :提示黄芪注射液具有预防保护免疫性肝损伤的作用。

九味肝泰对刀豆蛋白A诱导的C57BL/6J小鼠急性免疫性肝损伤的干预研究

目的:建立C57BL/6Jd小鼠急性免疫性肝损伤模型,观察九味肝泰对其免疫损伤及肝功能的影响。方法:按随机原则将30只接种乙型肝炎病毒(HBV)的C57BL/6J品系转基因雄性小鼠分为对照组、模型组和九味肝泰组。采用尾静脉注射12mg/kg刀豆蛋白A(ConA)的方法诱导C57BL/6J小鼠急性免疫性肝损伤模型;成模8 h后九味肝泰组小鼠按(0.5mL/10g·d)灌10%九味肝泰混悬液干预性治疗7d,对照组及模型组小鼠灌胃等量生理盐水。检测干预前和干预7 d后小鼠肝功能[总胆红素(TBil)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)]、还原型谷胱甘肽(GSH)、血清中超氧化物歧化酶(S0D)和肝组织中丙二醛(MDA)。结果:九味肝泰组小鼠在干预治疗7d后,TBil、AST、GGT、TBA、ALT与对照组比较,差异无显著性意义;GSH和SOD升高、MDA明显降低,与同组干预前及模型组比较,P<0.05,差异有统计学意义。结论:九味肝泰可抑制ConA诱导急性免疫性肝损伤小鼠的脂质过氧化反应,促进其肝功能恢复。

参芪扶正注射剂预防由抗PD-1抗体致免疫性心肌炎损伤的保护作用

目的探讨参芪扶正注射剂通过减少炎症因子的产生以及降低心肌损伤标志物的表达,预防由抗PD-1抗体药物诱导的免疫性心肌炎。方法将32只遗传背景为C57BL/6的雄性PD-1人源化小鼠随机分为对照组、心肌炎模型组、抗PD-1抗体组、参芪扶正注射剂治疗组(n=8)。除对照组外,其余组各组小鼠在第1、7天腹腔注射小鼠心肌肌球蛋白重链肽(5 mg·kg^(-1))构建免疫性心肌炎模型;第8-22天参芪扶正注射剂组每天灌胃给药0.8 mL,其余组给予生理盐水;抗PD-1抗体组、参芪扶正注射剂治疗组在第16、18、20、22天总共注射4次抗PD-1抗体(0.04 mg·kg^(-1))。通过Western blot和RT-qPCR检测相关炎症和凋亡指标蛋白和mRNA水平变化;HE染色检测心脏病理学特征变化;ELISA检测血清中心肌损伤的标志物表达水平。结果与对照组相比,心肌炎组的炎症和凋亡水平明显上升;给予抗PD-1抗体干预免疫性心肌炎,明显加重了心肌损伤,通过预先给予参芪扶正注射剂治疗,可以有效改善损伤。结论参芪扶正注射剂可以预防由抗PD-1抗体加重的心肌炎损伤。

肌萎缩侧索硬化的动物模型

肌萎缩侧索硬化的动物模型对研究该病的细胞与分子机制及评估治疗药物的有效性具关键作用。本文介绍5种自发性动物模型及3种实验诱发性模型,后者包括兴奋性氨基酸模型,自身免疫性模型及当今研究与使用较多的转基因模型。最后介绍38种用于实验模型的治疗药物。

祛风活血丸对EAU大鼠模型TGF-β2表达的影响

目的通过观察祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠模型葡萄膜TGF-β2表达的影响,探讨祛风活血丸对EAU模型大鼠的治疗效果。方法将60只Lewis大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、祛风活血丸低、中及高剂量组,每组10只。空白对照组不作处理,其余均予以右后足垫注射光感受器间维生素A类结合蛋白多肽片断(IRBP),建立EAU大鼠模型,造模成功后进行灌胃。空白对照组与模型对照组予以蒸馏水灌胃,祛风活血丸低、中、高剂量组分别予以不同剂量祛风活血丸灌胃,阳性对照组予以熊胆开明片灌胃。分别于灌胃后第7、14、21、28 d分批处死大鼠,取眼球做免疫组化,检测TGF-β2的表达。结果 TGF-β2免疫组化:各时间点模型对照组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);祛风活血丸各组大鼠与空白对照组相比,葡萄膜TGF-β2含量明显降低,各时间点差异均有统计学意义(P<0.01),其中以中、高剂量组最为明显;低剂量组于给药后第7及21 d差异有统计学意义(P7<0.01;P21<0.05);第14及第28 d差异无统计学意义(P>0.05);阳性对照组于给药后各时间点差异均有统计学意义(P14,21<0.01;P7,28<0.05)。结论祛风活血丸能通过调节免疫因子TGF-β2的状态,对大鼠葡萄膜炎发挥一定程度的治疗作用。

1型糖尿病动物模型研究进展

1型糖尿病(T1DM)是以胰岛素极度缺乏为主要特征的自身免疫性疾病,其发病率和死亡率在全球范围内正在快速的增长,已被列为医学界三大疑难病之一,严重的威胁着人类的健康。目前,糖尿病发病的主要机制依然不明,研究者只能通过构建动物模型的方式来探求其主要的发病机理,但现有动物模型不能很好的模拟人类疾病的自然过程,相信实验性自身免疫性T1DM动物模型的提出,将为T1DM的治疗带来曙光。本文对国内外现有的T1DM动物模型进行了综述。

紫癜颗粒对ITP模型小鼠骨髓细胞因子IL-3 TPO的影响

目的:通过观察ITP模型小鼠骨髓细胞白介素-3(IL-3)、血小板生成素(TPO)含量的变化,探讨IL-3、TPO含量变化与免疫性血小板减少性紫癜(ITP)发病之间的内在联系。方法:采用酶联免疫方法检测ITP模型小鼠骨髓细胞IL-3、TPO含量变化。结果:模型组小鼠骨髓细胞IL-3明显降低、TPO含量明显升高,均有统计学意义(P<0.05)。结论:调节巨核细胞的正性作用因IL-3与正性作用因子TPO参与了ITP的发病过程并发挥重要作用,紫癜颗粒通过调控骨髓细胞IL-3、TPO的含量变化而达到有效治疗ITP的目的。