山羊GOLA-DQA2基因多态性与血液免疫性状的相关分析

文章采用PCR-RFLP技术对莱芜黑山羊、波尔山羊、鲁波山羊3个山羊种群的GOLA-DQA2基因外显子2进行遗传多态性研究,并对其血液免疫指标的效应进行分析。结果表明,3个山羊种群共检测到4种基因型,由3个等位基因控制;GOLA-DQA2基因外显子2的第77、79、80和169位的碱基表现出多态性;多数血液免疫指标品种效应是主要效应;鲁波山羊中,AB基因型的红细胞计数、白细胞计数分别显著高于BB基因型、BC基因型(P<0.05);AB基因型的红细胞压积显著高于BB、BC基因型(P<0.05);BC基因型的噬中性粒细胞比率显著高于BB基因型(P<0.05);波尔山羊和莱芜黑山羊中,基因型与血液免疫指标之间也有一定的相关性,但没有达到显著水平。由上述结果初步推测,在鲁波山羊中,AB、BC基因型是影响红细胞计数、白细胞总数、噬中性粒细胞比率等血液免疫指标的重要因素。研究结果揭示GOLA-DQA2基因与血液免疫指标之间有一定的相关性,可为山羊的抗病育种提供一定的参考。

山羊GOLA-DQB1基因外显子2多态性与免疫性状的相关分析

利用PCR-RFLP技术,对莱芜黑山羊、鲁波山羊和波尔山羊3个山羊种群共175只个体的GOLA-DQB1基因外显子2进行遗传多态性研究,并对山羊种群的血液免疫指标的效应进行了分析。结果表明:3个山羊种群共检测到(AA、BB、CC、AB、AC、BC、DD)7种基因型,GOLA-DQB1基因外显子2的第24、151位的碱基表现出多态性。多数指标品种效应是主要效应。莱芜黑山羊中,BC基因型的淋巴细胞百分比(W-SCR)显著高于AC、CC基因型(P<0.05),中性球比例(W-LCR)显著低于CC基因型(P<0.05),大型白细胞数(W-LCC)低于AC、CC基因型,但差异不显著(P>0.05)。波尔山羊中,BC基因型的W-LCC低于AA、AB、BB基因型,但差异不显著(P>0.05)。鲁波山羊中,BC、AC基因型的W-LCC显著低于AA基因型(P<0.05)。揭示GOLA-DQB1基因与血液免疫性状有一定的相关性。

通城猪及其杂种猪若干免疫性状的研究

通过对通城猪、长大通、大长通杂种猪红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均血细胞容积(MCV)、平均血细胞血红蛋白量(MCH)、平均血细胞血红蛋白浓度(MCHC)、IgG含量、ANAE阳性率(ANAE+)、迟发型皮肤超敏反应(DTH)的测定,发现通城猪DTH、WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC性状的平均值均高于长大通和大长通杂种绪。对影响各性状的因素进行了分析,结果表明DTH、WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC性状与品种有关,WBC、MCHC与性别有关。对各免疫性状间的相关关系进行了分析,探讨了所测免疫性状指标对机体免疫力的代表性。

中国北京油鸡和引进白来航蛋鸡免疫性状的比较

选取同期孵化出雏的中国地方鸡种北京油鸡(Beijng-You Chicken,BYC)和引进蛋鸡品种白来航鸡(WhiteLeghorn,WL)各250只母雏,在相同饲养条件和免疫程序下饲养,测定和对比异嗜性粒细胞(Heterophil)数量、淋巴细胞(Lymphocyte)数量和异嗜性粒细胞/淋巴细胞比率(Heterophil/Lymphocyte,H/L)、白细胞总数(Bloodwhite cell count,BWCC)、绵羊红细胞(Sheep blood red cell,SRBC)免疫抗体滴度和不同日龄的禽流感(Avian Influ-enze,AI)、新城疫(Newcastle disease,ND)的免疫抗体滴度等免疫性状的差异。试验结果表明:①北京油鸡的H/L值为0.36±0.21,白来航蛋鸡为0.52±0.51,二者呈极显著差异(P<0.001);北京油鸡的白细胞总数明显高于白来航蛋鸡(P<0.001);②SRBC抗体滴度在两品种之间差异不显著(P>0.05);③14、28日龄两次免疫禽流感疫苗(H5N1毒株)后,在免疫后21、41、71、105天的4个测定日中,两个品种的禽流感免疫抗体滴度值均呈现先升高后降低的变化趋势,北京油鸡在4个测定日龄的AI免疫滴度值都均高于白来航蛋鸡,差异均达到极显著水平(P<0.001);④同期免疫新城疫疫苗(LaSota毒株),在免疫后21、41、71和105天测定ND抗体滴度,北京油鸡在免疫后21天时达到最高,之后随日龄的增长而呈逐渐降低趋势;白来航蛋鸡在免疫后41天时抗体滴度水平达到最高,以后随日龄增长而下降。4个测定日龄的ND滴度水平北京油鸡均高于白来航蛋鸡。该研究结果初步显示,中国地方鸡种北京油鸡和引进白来航蛋鸡品种的免疫性状具有明显的遗传差异,北京油鸡的综合免疫性能和抗应激能力优于白来航蛋鸡。

猪部分免疫性状与生产性状间的相关关系研究

对通城、瑞典长白(下称长白)、英国大白(下称大白)纯种以及长大通和大长通三元杂种猪的161头个体的部分免疫性状与其生产性状(生长、胴体、肉质性状)进行相关分析,结果如下:(1)免疫性状与生长性状间的相关:迟发性超敏反应(DTH)、红细胞数(RBC)、免疫球蛋白G(IgG)、血清总蛋白(TP)与日增重呈弱负相关,r值在-0.17^-0.35之间(P<0.05);DTHI、gG、TP与达上市体重日龄呈弱正相关,r值在0.20~0.25之间(P<0.05)。(2)部分免疫性状与胴体性状间的相关:DTH分别与胴体长、胴体斜长、胴体净重、腿臀比率和腿臀肉骨率呈弱负相关,r值在-0.18^-0.25之间(P<0.05);与板油率和内脂率呈弱正相关,r值分别为0.21(P<0.01),0.22(P<0.01)。RBC、TP与胴体长、肋骨数、眼肌面积、胴体净重、屠宰率、腿臀比率、腿臀肉骨率间呈弱负相关,r值在-0.16^-0.36之间(P<0.05);与三点背膘厚均值、6~7肋间背膘厚、10肋背膘厚、板油率、内脂率性状间呈弱正相关,r值在0.18~0.35之间(P<0.05)。TP与胴体斜长和屠宰率呈弱负相关,r值分别为-0.29(P<0.01)-、0.24(P<0.01)。IgG与屠宰率和胴体净重呈弱负相关,r=-0.17(P<0.05)。(3)部分免疫性状与肉质性状间的相关:DTH、TP与滴水损失呈弱负相关,r分别为-0.26(P<0.01)和-0.19(P<0.05)。RBC与系水力呈弱正相关,r=0.34(P<0.01),TP与大理石评分呈弱正相关,r=0.20(P<0.05)。相关分析结果表明:部分免疫性状与生长、胴体性状间呈不利相关,与肉质性状间呈有利相关。

影响猪免疫性状的单倍型关联分析

旨在缩小课题组前期全基因组关联分析(Genome-wide Association Study,GWAS)结果区间范围,为下一步大规模群体验证提供有效候选基因。应用GWAS检验出的显著SNP标记构建单倍型,在大白猪×民猪F2设计资源群体内开展其与4个血常规指标(红细胞压积(Haematocrit,HCT)、血红蛋白(Hemoglobin,HGB)、平均红细胞血红蛋白量(Mean Corpuscular Hemoglobin,MCH)、平均红细胞体积(Mean Corpuscular Volume,MCV))和3个T细胞亚群指标(CD4+CD8-CD3+、CD4-CD8+CD3+和CD4+CD8-CD3+/CD4-CD8+CD3+)合计7个免疫性状指标的关联分析,寻找显著单倍型区段中的候选基因。分析结果表明:7号染色体上的3个单倍型区段均与T细胞亚群指标关联极显著,单倍型区段3(block7-3)与HGB及HCT关联极显著;8号染色体上3个单倍型区段均与MCH和MCV关联极显著,并由此定位5个候选基因:影响T细胞亚群指标的ABCF1和PPP1R10基因,影响HGB及HCT的GRM4基因,影响MCH及MCV的ALB和AFP基因。结合上述结果及基因功能,定位的5个基因可作为候选基因开展下一步研究。

鸡白细胞介素-1β基因内含子1、2多态与部分免疫性状的相关性分析

【目的】以白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)基因为候选基因,研究其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),及其与部分免疫性状的关系。【方法】根据红色原鸡IL-1β基因序列设计引物一对,利用PCR-SSCP方法检测了如皋鸡、文昌鸡以及安卡鸡IL-1β基因内含子1、2的SNP,同时检测了56日龄的血清IL-1浓度、异嗜性粒细胞/淋巴细胞(heterophil/lymphocyte,H/L)值、绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)抗体滴度、新城疫(newcastle disease,ND)抗体滴度、禽流感(avian influenza,AI)抗体滴度5个免疫性状,并进一步分析了SNP位点与免疫性状的关系。【结果】共检测出6个SNP位点,分别为T107G突变、T130A突变、C143T突变、A208C突变、T241G突变及T274C突变。经关联分析,发现107、208、241及274位点存在显著的基因型效应(P<0.05或P<0.01),基因型组合对H/L值及ND抗体滴度两个性状上存在显著效应(P<0.05)。【结论】241位点突变型个体3个免疫性状均优于野生型,有望在鸡的抗病育种中筛选为新的标记位点。利用基因型组合选择效果优于对单个位点的选择。

文昌鸡免疫性状与部分生长性能的相关分析

随机选择同批出雏文昌鸡80只,隔周称量体质量,并于49日龄均分为两组,分别腿肌注射25%绵羊红细胞(SRBC)悬液0.5 mL(A组)和1 mL(B组),56日龄翅静脉采血,检测异嗜性粒细胞与淋巴细胞的比值(H/L)以及SRBC抗体滴度,分析生长性能和免疫性状之间的相关性。结果表明:H/L值与相对生长率和日绝对生长量之间均呈负相关(r=-0.0370,r=-0.1180),A、B组SRBC抗体滴度值呈显著差异(P<0.05),A组与相对生长率和日绝对生长量之间呈显著的负相关(r=-0.3980,r=-0.4000),B组与生长性能均不存在显著相关。研究结果显示腿肌注射0.5 mL SRBC抗原能更好的评估文昌鸡的免疫性能。

牡丹红鸡与白来航蛋鸡典型免疫性状的比较

随机选取地方鸡种牡丹红鸡和引进蛋鸡品种白来航鸡各30只,在相同饲养管理和免疫程序下饲养,于49日龄腿肌注射25%绵羊红细胞(Sheep blood red cell,SRBC)0.5m L,分别检测了41、56、71、89日龄的异嗜性性粒细胞(Heterophil)数量、淋巴细胞(Lymphocyte)数量和异嗜性粒细胞/淋巴细胞比率(Heterophil/Lymphocyte,H/L),56、71、89日龄的SRBC抗体滴度和30、41、56、71、89日龄新城疫(New castle disease,ND)的免疫抗体滴度等免疫性状的差异。结果显示,牡丹红鸡在H/L值、SRBC抗体滴度极显著高于白来航鸡(P<0.01),ND免疫抗体滴度上显著高于白来航鸡(P<0.05)。结果表明,家禽的免疫性状在品种间存在遗传差异,中国地方鸡种比外来鸡种在多个免疫性状上存在不同程度的优势。

山东地方鸡种Mx基因遗传变异与免疫性状的关系

采用PCR-SSCP技术研究山东地方鸡种(鲁禽鸡、琅琊鸡、石歧杂鸡、汶上芦花鸡、莱芜黑鸡、济宁百日鸡)Mx基因多态位点与绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)免疫抗体滴度和禽流感(avian influenza,AI)、新城疫(newcastle disease,ND)免疫抗体滴度等免疫性状的关系。扩增包含Mx基因intron 13和exon 14约150 bp的片段,通过SSCP分型、测序,在5个地方鸡种共发现2个SNP突变位点分别为Mx基因编码序列第1 892位点G→A(Ser→Asn),第1 911位点G→A。与免疫性状进行关联分析,发现鲁禽鸡、琅琊鸡、莱芜黑鸡Mx基因编码序列1 892位点与H9抗体滴度显著相关(P<0.05)。

长白猪NEAT1基因C1149G多态性位点与血液和免疫性状的关联（英文）

NEAT1是一个长的非编码RNA，参与了免疫反应、paraspeckle形成以及mRNA的输出等生物学过程。本研究利用PCR—RFLP方法检测了猪（Susscrofa）NEAT1一处C1149G单核苷酸位点的多态性，

鸡部分免疫性状全基因组关联分析研究

中国农业科学院张磊（2012）利用高密度SNP芯片对鸡血清免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,Ig G）浓度等9个免疫性状进行GWAS研究。从中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京油鸡（国家级保种场）的保种群体,组建50个公鸡家系（50只公鸡、250只母鸡,公母比例1：5）的同批后代公鸡728只,

猪血液免疫性状的复合基因组选择研究

该研究在提出"复合基因组选择(composite genomic selection)"概念的基础上,利用华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室构建的免疫资源群体数据,通过交叉验证(cross-validation)策略,与标准GBLUP法对照,利用白细胞(WBC)、噬中性粒细胞(NE)等13项血液免疫性状对复合基因组选择的预测效果开展验证。研究结果表明,除血小板(PLT)等3个性状外,所有性状复合基因组选择的准确性均高于标准GBLUP法,分析结果支持复合基因组选择优于基于单一加性遗传组分的GBLUP的结论。同时,还探讨了不同交叉验证参数组合对复合基因组选择准确性的影响,发现最宜交叉验证倍数是性状特异性的,跟性状特性有关。总之,该研究提出了基于全部遗传组分的复合基因组选择法,并得到猪血液免疫性状数据分析结果的初步支持,特别是针对较小规模群体,复合基因组选择可能是提高基因组预测准确性的有效方法。

Vps28基因敲除小鼠模型的构建及其对泌乳和免疫性状影响的研究

尽管基于QTL定位和关联分析研究挖掘了许多奶牛产奶性状候选功能基因,然而仅有少数几个基因经过体内外的功能验证。本课题组前期全基因组关联分析(GWAS)研究结果表明Vps28基因与奶牛产奶性状表型显著相关,并在奶牛乳腺组织中特异性高表达。为了深入了解该基因对泌乳性状的作用和功能,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了Vps28基因敲除小鼠,对其进行体内功能研究。研究结果显示Vps28基因敲除纯合型小鼠(Vps28-/-)极可能导致胚胎早期死亡,故只获得杂合型基因敲除小鼠(Vps28+/-)。敲除小鼠模型构建成功后,检测乳腺组织和脾脏组织中Vps28基因mRNA和蛋白的表达,结果显示与野生型小鼠(Vps28+/+)相比,Vps28+/-杂合型小鼠Vps28的mRNA和蛋白表达量均显著下降。进一步对母鼠的泌乳量、乳房形态和血常规进行检测,发现Vps28敲除母鼠的泌乳量下降,乳头明显凹陷,且血常规中白细胞数量、中性粒细胞数量、淋巴细胞数量和中间细胞数量显著低于野生型小鼠,推测Vps28基因不但影响泌乳,而且影响相关免疫性状。

鸭基因组整体DNA甲基化差异与部分免疫性状的关系

DNA甲基化是真核细胞基因组主要表观遗传修饰方式之一,是调节基因组功能的重要手段。本试验以金定鸭、樱桃谷北京鸭、番鸭、半番鸭(番鸭♂×金定鸭♀、番鸭♂×樱桃谷北京鸭♀)为试验材料,应用MethylFlash整体甲基化定量试剂盒检测其甲基化程度,采用全自动生化分析仪测定总蛋白、球蛋白、IgA、IgM和IgG等部分免疫性状,并分析了两者的关系。结果表明,两个远缘杂交种(番鸭♂×金定鸭♀、番鸭♂×樱桃谷北京鸭♀)的DNA整体甲基化程度显著高于或极显著高于亲本(金定鸭、樱桃谷北京鸭、番鸭),而3个亲本间以及两个远缘杂交种间差异不显著(P>0.05)。所有免疫指标性状值大致表现为家鸭高于番鸭,番鸭高于半番鸭。鸭基因组整体DNA甲基化水平与免疫性状间呈负相关,其中与总蛋白、球蛋白和IgM相关达显著或极显著水平。试验结果揭示了半番鸭及其亲本基因组整体DNA甲基化对部分免疫性状的影响。

品种和日龄对生长猪基线免疫性状、皮质醇及生产性能的影响

在一些研究中我们猜测:不同品种的猪在基线免疫和生产性能测定方面将存在差异,并且这种差异将受到猪只日龄的影响.本试验分别测定4、8、12周龄巴克夏(n=36)、杜洛克(n=18)、梅山(n=54)、长白×大白杂交猪(n=36)及大白猪(n=36)的基线免疫性状、血浆皮质醇浓度和生产性能.所有仔猪均在17～21日龄断奶并转入相同的哺育环境.分别估算白细胞总数(WBC)、白细胞分类计数、血浆皮质醇浓度、免疫球蛋白G(IgG)浓度、自然杀伤细胞毒性、嗜中性粒细胞吞噬作用(PHAGO)及趋化性(CHTX).在各个不同日龄的猪中,梅山猪的血浆皮质醇浓度最高,而大白猪最低(P＜0.05).除梅山猪血浆IgG浓度会随日龄的增加而下降外,其它品种的猪均升高(日龄:P＜0.01;品种×日龄:P＜0.005).自然杀伤细胞毒性在梅山猪中最大(P＜0.05).对于嗜中性粒细胞的吞噬作用以及趋化性存在品种与日龄的互作效应,P值均小于0.001.总之,大白猪嗜中性粒细胞的吞噬作用最高(P＜0.05),趋化性最低(P＜0.05).长自×大白杂交猪的趋化性最高(P＜0.05).巴克夏猪具有最高数目的嗜中性粒细胞(P＜0.001).12周龄时,梅山猪的体增重最小(P＜0.001),杜洛克猪增重与采食量之比最大(P＜0.001).性别对于免疫性状、生产性能及皮质醇测定差异不显著,P值情况分别为:P≥0.15,P≥0.20和P=0.70.品种和日龄会影响生长猪基线免疫性状及血浆皮质醇浓度,表明品种和日龄是影响各种应激原或应激素反应的重要因子.

通城、瑞典长白、英国大白及其三元杂种猪部分免疫性状研究

本研究拟通过对健康的通城、长白、大白纯种猪以及长大通和大长通三元杂种猪的某些免疫指标之间的比较研究,试图反映品种间一般免疫力或抗病力的差异,同时也探索一般免疫力的性状测定指标,为猪一般抗病力基因的筛选奠定基础。(1)关于各性状在品种间的差异本研究和已报道的研究均说明品种是影响免疫性状的一个重要因素。在IgG,DTH,WBC,RBC,TP 5个性状中,通城猪在其中的4个性状(IgG,DTH,RBC,TP)上均高于其它的国外引入品种和三元杂种。

品种和日龄对生长猪基线免疫性状、皮质醇以及生产性能的影响

在一些研究中我们猜测不同品种的猪在基线免疫和生产性能测定方面将存在差异,并且这种差异将受到猪只日龄的影响。本试验分别测定4、8、12周龄巴克夏(n=36)、杜洛克(n=18)、梅山(n=54)、长白×大白杂交猪(n=36)以及大白猪(n=36)的基线免疫性状、血浆皮质醇浓度和生产性能。所有仔猪均在17到21日龄断奶并转入相同的哺育环境。分别估算白细胞总数(WBC)、白细胞分类计数、血浆皮质醇浓度、免疫球蛋白G(IgG)浓度、自然杀伤细胞毒性、嗜中性粒细胞吞噬作用(PHAGO)以及趋化性(CHTX)。在各个不同日龄的猪中,梅山猪的血浆皮质醇浓度最高,而大白猪最低(P<0.05)。除梅山猪血浆IgG浓度会随日龄的增加而下降外,其它品种的猪均升高(日龄P<0.01;品种x日龄P<0.005)。自然杀伤细胞毒性在梅山猪中最大(P<0.05)。对于嗜中性粒细胞的吞噬作用以及趋化性存在品种与日龄的互作效应,P值均小于0.001。总之,大白猪嗜中性粒细胞的吞噬作用最高(P<0.05),趋化性最低(P<0.05)。长白×大白杂交猪的趋化性最高(P<0.05)。巴克夏猪具有最高数目的嗜中性粒细胞(P<0.001)。12周龄时,梅山猪的体增重最小(P<0.001),杜洛克猪增重与采食量之比最大(P<0.001)。性别对于免疫性状、生产性能以及皮质醇测定差异不显著,P值情况分别为P0.15,P0.20和P=0.70。品种和日龄会影响生长猪基线免疫性状以及血浆皮质醇浓度,表明品种和日龄是影响各种应激原或应激素反应的重要因子。

免疫应答性状筛选及高免疫力奶牛的培育进展

遗传选育是提高奶牛疾病抗性的重要途径。然而,现有的奶牛抗病育种研究大多是针对某一特定疾病抗性的选种选育,往往会导致其他疾病发病率的升高或生产性能的降低,且进展缓慢。适应性免疫应答性状选择是一种新兴的奶牛一般抗病性选育技术,基于该技术选育的“高免疫应答”奶牛具有较好的综合抗病性能。该文分析了奶牛抗病选育技术现状,综述了适应性免疫应答性状选择技术的原理和在奶牛育种中的应用,阐述了本课题组在该种性状测定方法、测定技术优化及新型标记功能机制方面取得的最新研究进展,旨在为培育具有自主知识产权的优质、高产、适应性强的本土化高免疫力奶牛新品系提供理论和数据支撑。

三个地方鸡种MHCB-LBII基因遗传变异与免疫性状的关联分析

旨在研究3个地方鸡品种（汶上芦花鸡、莱芜黑鸡、济宁百日鸡）主要组织相容性复合体（MajorHistocompatibility Complex,MHC）B-LB II基因遗传变异与绵羊红细胞（Sheep red blood cell,SRBC）、禽流感（Avian influenza,AI）和新城疫（Newcastle disease,ND）抗体滴度等免疫性状的关系,揭示不同品种间基因变异与免疫性状的相关性。以300只地方品种鸡为材料,运用直接测序和聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）等技术检测MHC B-L BII基因的序列变异。在3个地方鸡品种中分别发现了19~22个核苷酸变异位点,可导致其中16~18个氨基酸的变异。3个地方鸡种MHC B-L BII基因中分别有7~8个（Single nucleotidepolymorphism,SNP）位点与部分免疫性状存在不同程度的显著相关性。变异位点G97A和T138A在3个品种中均存在,与SRBC、ND、AI抗体滴度均显著相关（P〈0.05）。其中,G97A突变在济宁百日鸡中与ND抗体滴度显著相关（P〈0.05）,在莱芜黑鸡中与SRBC抗体滴度显著相关（P〈0.05）,在汶上芦花鸡中与H9抗体滴度显著相关（P〈0.05）;变异位点T138A在汶上芦花鸡和济宁百日鸡中与H9抗体滴度显著相关（P〈0.05）。研究表明3个地方鸡种的MHC B-LB II基因遗传变异与免疫性状存在显著关联。