人类趋化素样因子超家族2在自身免疫性睾丸炎模型下参与调控小鼠睾丸中精子生成

目的:构建实验性自身免疫性睾丸炎(EAO)小鼠模型,探究人类趋化素样因子超家族2(CMTM2)在调控小鼠睾丸精子生成过程中的作用。方法:在CMTM2基因敲除小鼠及野生型小鼠中采用EAO模型,评价CMTM2基因敲除小鼠的免疫学生殖表型,统计分析基因敲除组的精子生成数量、形态及活性,分析睾丸组织切片、睾丸间质中巨噬细胞及淋巴细胞浸润程度;利用RT-PCR及Western、Northern印迹技术检测CMTM2基因敲除型纯合子、杂合子及野生型小鼠的CMTM2表达水平。结果:CMTM2基因敲除纯合子小鼠与野生型小鼠成年后,两组睾丸长轴及精子生成数量比较,差异具有统计学意义(P<0.05);CMTM2敲除小鼠EAO模型睾丸中巨噬细胞及淋巴细胞总数较野生型小鼠EAO模型上升,精子活性及正常形态比例下降。结论:CMTM2基因作为生精调控基因,在成年雄性小鼠中高度表达,在维持精子发生的过程中呈重要作用,且在慢性炎症状态下CMTM2基因表达产物减少导致精子发生减弱。

BALB/c鼠自身免疫性睾丸炎动物模型的制作

【目的】探讨BALB/c鼠睾丸炎动物模型的建立方法,观察睾丸炎形成后到生殖功能恢复的时间间隔,以及该动物模型的稳定性。【方法】BALB/c小鼠(10周)背脊皮下注射睾丸混悬液0.1mL,浓度2×107/mL,1次/周,共4次。同种睾丸混悬液(组1)、同种睾丸混悬液加完全免疫佐剂(组2)、异种睾丸混悬液(组3)、异种睾丸混悬液加完全免疫佐剂(组4)、空白对照(组5)。【结果】组3建模成功率80%,第5、8、11周按Johusen评分为5.2±1.44、6.2±0.79、8.1±0.87,组1、2、5评分均在9.0以上,组3生精功能明显降低(P<0.05)。组4小鼠于第2次注射后3～5d,全部死亡。组3第5周生精上皮细胞减少至2￣3层,曲细精管管腔中有稀疏的精子,间质出现水肿,淋巴细胞浸润约10%￣25%。第5周组3附睾尾精子浓度为(11.0±6.2)×106,精子存活率(10.73±8.14)%,精子活动率(7.3±6.1)%,明显低于组1、2、5(P<0.05),于第11周组3恢复至正常水平。睾丸炎生精障碍持续21￣28d。【结论】异种小鼠生殖细胞可诱导建立BALB/c小鼠的EAO模型,模型有一定的持续稳定性,可用于精子发育生物学研究。

椒蒿对自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的研究椒蒿挥发油对自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响。方法雄性BALB/c小鼠80只,随机分为4组(生理盐水组、模型组、橄榄油组、椒蒿组),采用睾丸内注射冰醋酸的方法造模,各组都在手术前3天开始灌胃,手术后继续灌胃,共连续灌胃24d(盐水组只灌胃,不手术)。分别于术后3周、9周取外周血,通过流式细胞仪对CD4+CD25+调节性T细胞进行检测。结果术后3周,模型组、橄榄油组、椒蒿组小鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分比均低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),而此3组之间差异无统计学意义(P>0.05)。术后9周模型组与橄榄油组小鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分比低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),椒蒿组与生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论椒蒿能使自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞百分比提高,后者可发挥免疫调节作用。

原癌基因c-kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义

【目的】探讨原癌基因c-kitmRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义。【方法】建立并分析自身免疫性睾丸炎动物模型:42只BALB/c小鼠随机分为6个实验组和1个对照组。6个实验组小鼠分别给予KM小鼠睾丸混悬液皮下注射,每周1次最多者4次,在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取一组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kitmRNA的变化。【结果】在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kitmRNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组(P<0.05),至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异已经没有统计学意义(P>0.05)。【结论】c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因mRNA的低表达可能参与自身免疫性睾丸炎导致不育的发病机制。

抗氧化剂与钙离子拮抗剂合用防治大鼠免疫性睾丸炎的实验研究

目的 :研究抗氧化剂与钙离子拮抗剂联合应用对大鼠免疫性睾丸炎的防治作用及其作用机制。 方法 :Wistar大鼠随机分为正常对照组、预防免疫性睾丸炎症组 (预防组 )和免疫性睾丸炎症模型组 (模型组 ) ,从第一次免疫的次日起 ,预防组每天给予 90 m g/kg维生素 E、C合剂 (Vit C∶ Vit E=2∶ 1)和 5 0 m g/kg维拉帕米灌胃 ,共80 d,模型组未给予干预措施 ,正常对照组未加任何处理。检测 3组的精子计数、精子畸形率、睾丸重量、曲细精管直径 ,光镜观察睾丸间质及曲细精管生精细胞的变化。 结果 :预防组与正常对照组的精子计数、精子畸形率、睾丸重量和曲细精管直径差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,镜下表现接近于正常对照组。模型组与正常对照组相比 ,精子计数、睾丸重量和曲细精管内径均有明显减少 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,精子畸形率明显增加 (P <0 .0 1)。光镜下睾丸间质明显充血 ,生精细胞脱落 ,生精上皮空泡变 ,多核巨精细胞形成 ,不同程度的炎性细胞浸润。 结论 :维生素 E、维生素 C、维拉帕米联合应用可明显减轻大鼠免疫性炎症损伤。

椒蒿挥发油对小鼠自身免疫性睾丸炎的影响

目的研究椒蒿挥发油对小鼠自身免疫性睾丸炎睾丸组织结构及血清抑制素B和卵泡刺激素含量的影响。方法健康成年雄性BALB/c小鼠150只,随机分为生理盐水组、模型组及椒蒿低、中、高剂量组(即椒蒿挥发油的体积分数为0.938%、1.875%、3.375%),采用单侧睾丸注射冰醋酸的方法造模。各组都在造模前3d开始灌胃,手术并单侧睾丸注射冰醋酸后继续灌胃,连续灌胃24d后,分别于术后3周、6周、9周取材检测,光镜观察非手术侧睾丸生精小管内的变化,ELISA法检测血清抑制素B和卵泡刺激素的变化情况。结果术后3、6、9周,模型组及椒蒿低、中剂量组血清抑制素B含量均低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),卵泡刺激素含量均高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),术后9周,椒蒿高剂量组血清抑制素B和卵泡刺激素含量与生理盐水组比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后9周,椒蒿高剂量组光镜下睾丸组织结构基本正常。结论椒蒿挥发油对小鼠自身免疫性睾丸炎的发生有一定的拮抗作用,同时也跟剂量有关,高剂量组的拮抗效果最好,术后灌胃9周,睾丸组织结构基本恢复正常。

不同品种小鼠实验性自身免疫性睾丸炎模型的建立

[目的]研究ICR、BALB/C以及C57三种品系的雄性小鼠对实验性自身免疫性睾丸炎(EAO)的易感性。[方法]将每种品系的12只健康雄性小鼠随机分为对照组与EAO组,每组6只。对小鼠进行皮下注射,每次0.2mL,注射3次,两次间隔2周。对照组小鼠皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)乳化的PBS;EAO组小鼠皮下注射完全弗氏佐剂乳化的同系睾丸匀浆。在第一次免疫注射50d后,取小鼠附睾尾与输精管检测精液品质;取小鼠睾丸制作切片,HE染色后用于组织病理学观察。[结果]结果显示,与对照组相比,BALB/C小鼠EAO组的精子密度显著降低,ICR与C57小鼠EAO组的精子密度无显著变化;3种品系小鼠EAO组的精子活力和活率都显著降低;BALB/C小鼠EAO组的睾丸损伤严重,ICR与C57小鼠EAO组的睾丸损伤不太明显。[结论]由此表明,BALB/C品系的小鼠比ICR与C57小鼠更易诱导EAO。

橘叶提取物对小鼠自身免疫性睾丸炎的影响

目的研究橘叶提取物对实验性自身免疫性睾丸炎(EAO)模型小鼠睾丸组织形态及血清白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。方法采用单侧睾丸注射冰醋酸法建立小鼠EAO模型,随机分为空白组、模型组、橘叶乙醇提取物组、环己烷组、乙酸乙酯组、正丁醇组和水部位组。光镜下观察睾丸组织结构变化,ELISA法检测血清IL-1β和TNF-α浓度。结果给药3周后,橘叶乙醇提取物、正丁醇部位和水部位组能明显改善睾丸组织病变,减轻炎症反应。橘叶给药组除环己烷部位外,其余各组均能明显降低EAO小鼠血清中炎症因子IL-1β水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 01)。此外,乙醇提取物组、正丁醇部位组中TNF-α含量也明显降低(P <0. 05,P <0. 01)。结论橘叶乙醇提取物、乙酸乙酯、正丁醇及水部位对小鼠EAO的发生均具有拮抗作用,其中,正丁醇部位抗EAO活性较明显,这可能与抑制炎性因子IL-1β和TNF-α释放有关。

黄芪对小鼠自身免疫性睾丸炎的保护及作用机制

本文探讨了黄芪对自身免疫性睾丸炎(EAO)小鼠模型的睾丸组织形态和白介素-1β(IL-1β)水平的影响。方法 实验动物为成年昆明白小鼠,随机分组:对照组、EAO组、EAO+黄芪低低、中和高剂量组,采用单侧睾丸注射冰醋酸法建立小鼠 EAO 模型。灌胃给药处理开始与造模型之前的3天,冰醋酸注射到单侧的睾丸后持续给大鼠灌胃给药 24天后,在手术后的第3周, 6周和9周分别取材进行分析,使用正置相差显微镜观察对照组睾丸组织的变化,使用ELISA法检测血清 中IL-1β浓度的改变。结果 手术后的第9周,EAO+黄芪高剂量组光镜下睾丸组织结构基本恢复正常。术后3、6、9周,EAO模型组、EAO+黄芪低、中和高剂量组血清中白介素-1β含量均高于正常对照组,差异有统计学意义( P <0.05 ),术后3周后,能明显改善睾丸组织病变,减轻炎症反应。与EAO模型组比较,EAO+黄芪低剂量组无明显差异,EAO+黄芪中、高剂量组处理的EAO小鼠血清中炎症因子IL-1β水平显著降低。结论 在小鼠EAO的发生过程中,黄芪能够起到拮抗作用,这种拮抗效果与剂量呈正相关;睾丸组织结构在手术后灌胃处理后的第9周开始基本恢复正常,这可能与抑制炎性因子 IL-1β释放有关。

薯蓣皂苷元对小鼠免疫性睾丸炎的作用及机制

目的:研究薯蓣皂苷元(diosgenin, Dio)对小鼠免疫性睾丸炎的作用及机制。方法:小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、盐酸左氧氟沙星组,以及Dio低、高剂量组,左侧睾丸注射30μL 10%冰醋酸诱导小鼠免疫性睾丸炎。给药21 d后,检测睾丸组织氧化应激及炎性因子水平、病理变化、细胞凋亡情况、NF-κB/NLRP3和Keap/Nrf2信号通路相关蛋白及阳性细胞表达。结果:模型组小鼠睾丸部分生精上皮结构紊乱,出现空泡样变,睾丸间质出现大量炎性浸润;Dio组小鼠睾丸各级病理改变得到有效恢复。与空白组比较,模型组小鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6和MDA水平明显升高(P<0.01),SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.01),睾丸细胞凋亡率明显升高(P<0.01),睾丸NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、Keap1、Nrf2蛋白及NF-κB、Nrf2阳性细胞表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,Dio组上述炎症及氧化应激指标水平明显纠正(P<0.01),睾丸细胞凋亡率明显降低(P<0.01),睾丸Nrf2蛋白及阳性细胞表达明显升高(P<0.01),其余蛋白及阳性细胞表达均明显降低(P<0.01)。结论:Dio可改善免疫性睾丸炎小鼠的炎症及氧化应激,机制可能与调控NF-κB/NLRP3和Keap/Nrf2信号通路有关。

大鼠睾丸纤维化模型的建立

目的 :建立大鼠睾丸纤维化模型 ,为进一步研究睾丸纤维化的发病机制打下良好基础。 方法 :将Wistar大鼠分为正常组 (12只 )和模型组 (40只 ) ,采用制造自身免疫性睾丸炎的经典方法结合单侧睾丸内注射卡介苗 ,建立睾丸纤维化模型。 结果 :距第 1次免疫 80d时 ,自身免疫性睾丸炎的发生率为 10 0 % ,睾丸纤维化的发生率为11.1% ;距第 1次免疫 14 0d时 ,自身免疫性睾丸炎的发生率为 10 0 % ,睾丸纤维化的发生率为 81.5 %。 结论