人脑胶质瘤免疫抑制因子TGFβ_2及TGFβ_1的基因表达

目的 研究人脑胶质瘤主要免疫抑制因子转化生长因子TGFβ2 及TGFβ1的基因表达与其胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用Northern杂交、免疫组化和Western杂交法检测了 5 0例胶质瘤、3例恶性胶质瘤体外细胞系和 8例正常脑组织TGFβ2 的表达水平。同时检测其同型异构体TGFβ1的表达水平。结果 正常脑组织几无TGFβ2 和TGFβ1表达 ,而胶质瘤均表达 2 .8和 /或 5 .1kb的TGFβ2 mRNA片段和约 2 5 0 0 0u及 30 0 0 0u的蛋白 ;TGFβ2 和TGFβ1表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高。结论 TGFβ2 和TGFβ1表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关 ,TGFβ2 和TGFβ1可作为恶性胶质瘤免疫基因治疗的候选基因。

膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

双功能分子白介素-2-粒细胞-巨噬细胞集落生长因子促进树突状细胞在肿瘤免疫抑制环境中的活化效应

目的将本室构建与制备的双功能分子白介素-2-粒细胞-巨噬细胞集落生长因子(IL2-GMCSF)蛋白作用于肿瘤条件培养基(TCM)环境中的树突状细胞系(DC),检测其对DC细胞的活化,探讨其用于活化DC、进行抗肿瘤免疫治疗的可能性。方法制备小鼠黑色素瘤B16F10细胞系的TCM,用以培养DC2.4细胞,同时分别添加IL2-GMCSF、GM-CSF、IL-2、或IL-2与GMCSF组合使用。24 h后,检测DC2.4细胞的吞噬与增殖活性、细胞成熟表型、细胞因子分泌与信号通路活化。结果 DC2.4细胞具有未成熟DC的特征,在TCM培养条件下吞噬能力增强、但增殖活性显著受抑,TCM对DC成熟表型表面标志的表达有一定促进作用,并促进单核与DC来源的趋化因子(MDC),但抑制DC的IL-12分泌。与之相反,IL2-GMCSF主要借助其GM-CSF活性,促进DC2.4细胞的吞噬与增殖活性,并促进DC进一步成熟,且高表达IL-12与MDC。与GM-CSF相比,IL2-GMCSF可诱导更高的炎性NF-κB通路活化水平,而抑制调节性STAT3通路的活化。结论与GM-CSF单独作用相比,IL2-GMCSF可更好地促进肿瘤免疫抑制环境中的DC活化,有望成为有效的临床抗肿瘤治疗手段。

鬼毛针多糖对免疫抑制小鼠血清中IL-2和TGF-β_1水平的影响

目的:观察鬼毛针多糖对免疫抑制小鼠血清中IL-2和TGF-β1水平的影响。方法:给CY皮下注射造模的免疫抑制小鼠腹腔注射(i.p)鬼毛针多糖,空白对照组及模型对照组给予等量的生理盐水,连续给药7天。给药结束后,用ELISA双抗体夹心法测定各组小鼠血清中白介素2(IL-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的水平。结果:鬼毛针多糖可以提高免疫抑制小鼠血清中IL-2水平,并可同时下调血清中TGF-β1水平。结论:鬼毛针多糖可以通过调节小鼠血清中免疫因子,增强免疫抑制小鼠的免疫功能。

鼻咽癌免疫抑制因子研究——鼻咽癌细胞培养上清对正常人淋巴细胞cAMP、IL-2及对IL-2增殖活性的影响

在正常人淋巴细胞加入鼻咽癌低分化细胞培养上清(CNE-2S)。分别测定不加入和加入CNE-2S的淋巴细胞内环磷腺苷(cAMP)、白细胞介素-2(IL-2)及对IL-2的增殖活性。绪果,11例正常人淋巴细胞内cAMP含量加入CNE-2S后比未加入前有明显升高(P<0.05)。9例正常人的IL-2活性加入后比未加入前有明显降低(P<0.05)。9例正常人的IL-2受体的增殖活性加入后无显著差异(P>0.05)。结果表明,CNE-2S可提高正常人淋巴细胞内cAMP水平。与此同时,IL-2活性受到明显抑制,但淋巴细胞IL-2受体增殖活性的变化不显著。

芪倍合剂对UC小鼠模型TGF-β1/Smad2信号通路及Th17/Treg平衡、炎性细胞因子表达的影响

目的探究芪倍合剂对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型转化生长因子(TGF)-β1/Smad2信号通路及T辅助细胞(Th)17/调节T细胞(Treg)平衡、炎性细胞因子表达的影响。方法30只小鼠随机分为对照组、UC组和UC+芪倍合剂组,每组10只。UC组和UC+芪倍合剂组通过葡聚糖硫酸钠构建UC模型,UC+芪倍合剂组通过芪倍合剂灌肠。比较两组结肠黏膜病变情况、外周血炎性细胞因子Th17、Treg和TGF-β1/Smad2信号通路水平。结果与对照组比较,UC组干预后每日疾病活动指数(DAI)评分、结肠病变程度、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、Th17、Treg、Th17/Treg及结肠黏膜和淋巴细胞中的TGF-β1/Smad2通路水平显著升高,IL-4水平显著降低(P<0.05)。UC+芪倍合剂组干预后DAI评分、结肠病变程度、TNF-α、IL-1、Th17、Treg、Th17/Treg及结肠黏膜和淋巴细胞中TGF-β1/Smad2通路水平显著低于UC组,IL-4水平显著高于UC组(P<0.05)。结论芪倍合剂可以通过抑制结肠黏膜和淋巴细胞中TGF-β1/Smad2通路抑制炎性反应和调节Treg/Th17细胞平衡,从而起到缓解UC的作用。

天花粉蛋白通过激活CD8Tc2亚群诱导人体免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的机制,采用抗原非特异性T淋巴母细胞增殖系统,筛选了37个Tk致敏的抑制性T细胞系。分析表明,健康人体内Tk相关抑制性T细胞的频率为5.0×10-7～10.8×10-7,该细胞系属CD8+TCRαβ+,细胞因子表达格局呈现向IL-4和IL-10明显偏移和IFN-γ分泌明显下降的格局。结合我们已有关于CD8+T细胞介导Tk相关应答而不显示细胞毒性的工作,可从表型和功能分析上确认,Tk针对体外人体淋巴细胞增值的免疫抑制,由CD8Tc2细胞介导。

免疫抑制因子IL-10在肝脏疾病中的研究进展

1989年Fiorentio等发现小鼠活化的TH2细胞产生的一种活性物质，后来证明是一种糖蛋白，可抑制TH1细胞的激活和细胞因子的产生，将其命名为细胞合成抑制因子（cytokine synthesis inhibitory factor, CSIF），

CD4＋CD25＋调节性T细胞对晚期肺癌患者免疫抑制作用的研究

目的探讨Treg及Th1/Th2类细胞因子在晚期肺癌肿瘤免疫抑制中的作用。方法选取100例初治晚期肺癌患者及50例健康自愿者。采用流式细胞术检测其外周血中Treg、Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2、TNF-a)、Th2类细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)水平,同时分析CD4^+CD25^+Treg与Th1/Th2类细胞因子之间的相关性。结果 (1)晚期肺癌患者外周血中Treg为(11.12±5.83)%,高于健康对照组(7.46±3.07)%,差异有统计学意义(P=0.003);(2)化疗前肺癌患者外周血中Treg为(11.12±5.83)%,明显高于化疗后(6.45±3.74)%,差异有统计学意义(P<0.001);(3)晚期肺癌患者与正常对照组Th1/Th2类细胞因子水平分别为:IFN-γ(8.56±3.62 vs 10.79±3.27,P=0.049)、IL-2(8.48±2.87 vs10.22±4.03,P=0.03)、TNF-a(6.18±2.67vs8.14±2.87,P=0.007)、IFN-γ/IL-4(3.33±1.44 vs 4.09±1.00,P=0.028)、IL-4(3.17±1.19 vs 2.45±0.43,P<0.001)、IL-6(3.88±2.08 vs 2.33±0.88,P<0.001)、IL-10(3.64±1.73 vs2.54±1.08,P=0.008),其中Th2类因子水平明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05);(4)CD4^+CD25^+Treg与Th1类细胞因子IFN-γ、TNF-a、IL-2及IL-6无相关性(P均>0.05);与Th1/Th2(γ=-0.273,P=0.003)呈负相关;与Th2类细胞因子IL-4(γ=0.237,P=0.009)、IL-10(0.626,P<0.001)呈正相关(P均<0.05)。结论晚期肺癌患者CD4^+CD25^+Treg、Th2类细胞因子水平显著升高,Th1类细胞因子水平下降,它们共同导致肿瘤患者免疫抑制及肿瘤进展,监测其水平变化有助于判断肺癌患者疗效、预后,有效调控CD4^+CD25^+Treg及负性细胞因子水平可能是治疗肺癌的一个新策略。

HL-60细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对T细胞的作用及其生物学特性

白血病细胞培养上清液和白血病人血清能抑制PHA—P诱导的人外周血T淋巴细胞的增殖;抑制白细胞介素2(IL—2)的产生和反应性。以正常2BS人胚肺细胞培养上清液和正常人血清作对照则无抑制作用。白血病细胞培养上清液无细胞毒作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结果表明,来源HL—60人早幼粒白血病细胞的肿瘤免疫抑制因子(tumor-derived immunosuppressive factor,TDSF)的分子量约为87KD,其化学本质为蛋白质。抗急非淋白血病药物对这种TDSF的分泌有部分抑制作用。

千金子二萜醇调控TGF-β/Smad4通路调节肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡

目的探究千金子二萜醇对肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响及转化生长因子(TGF)-β/Smad4信号通路调控作用的可能机制。方法12只BALB/c小鼠随机分为模型组、实验组(模型+千金子二萜醇)和TGF-β/Smad通路抑制剂组(模型+LY2109761),通过接种肾癌Renca细胞构建肾癌小鼠模型。灌胃21 d后,取小鼠瘤块和脾脏组织并计算各组瘤块体积增长率,Western印迹检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ和Smad4蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平,RT-qPCR检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ、Smad4、IL-4和IFN-γmRNA表达水平。结果与模型组相比,实验组肿瘤体积增长率、TGF-βRⅡ、Smad4 mRNA和蛋白表达显著降低,IL-4水平显著降低,IFN-γ水平显著升高,LY2109761组TGF-βRⅡmRNA表达显著升高,蛋白水平显著降低,Smad4蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。结论千金子二萜醇通过调控TGF-β/Smad4信号通路抑制肾癌模型小鼠的肿瘤生长,并调节Th1/Th2免疫平衡。

抗肿瘤药对膀胱癌细胞产生的免疫抑制因子作用的影响

为探索抗肿瘤药对膀胱癌细胞产生的免疫抑制因子 (TDSF)对肿瘤“免疫逃逸”病理生理过程的影响 ,采用免疫生化共育实验的方法 ,取得膀胱癌细胞产生的免疫抑制因子作用于人外周血单个核细胞 (PBMC) 6h ,即可抑制白细胞介素 2 (IL 2 )产生 ,与对照组相比经统计学处理P <0 .0 1。当TDSF存在时 ,经激活的PBMC效应细胞对外源性IL 2反应显著减弱 ,表明IL 2的作用受到TDSF的抑制。植物血凝素 P(PHA P)刺激PBMC增殖 ,但TDSF使其增殖抑制。表明IL 2产生及其作用受到TDSF抑制。抗肿瘤药对TDSF的分泌有阻抑作用。

TGF-β——在口服致抗过程中产生的重要免疫抑制剂

在过去几年间,惊人的研究结果表明,可简单地通过口服抗原(口服致抗过程)防止自体免疫疾病。现有证据表明,上述过程诱导产生的转化生长因子(TGF-β)能抑制体外免疫反应并对自体免疫疾病具有负调节作用。这一发现支持用TGF-β治疗自体免疫疾病的观点,尽管TGF-β由口服致抗的CD8细胞释放比外源施以更有效。

麦粒灸对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠Th1/Th2平衡及转录因子T-bet、GATA3的影响

目的观察麦粒灸对化学治疗诱导的免疫抑制小鼠Th1细胞(Th1)/Th2细胞(Th2)平衡及转录因子T盒子转录因子(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)的影响。方法32只SPF级雄性CD-1(ICR)小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、盐酸左旋咪唑组、麦粒灸组,每组8只。除正常组外,其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg,每日1次,连续3 d)制备免疫抑制小鼠模型。盐酸左旋咪唑组小鼠灌胃盐酸左旋咪唑溶液(10 mg/kg);麦粒灸组小鼠灸“关元”、双侧“足三里”、双侧“三阴交”,每穴3壮,每壮约30 s。每日1次,连续7 d。观察小鼠一般情况;检测脾脏质量及脾脏指数;HE染色法观察脾脏组织病理;蛋白质印迹法和实时荧光PCR法检测小鼠脾脏组织T-bet、GATA3、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4蛋白及mRNA表达;酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4含量。结果与正常组比较,模型组小鼠反应迟钝、步态不稳;脾脏质量及脾脏指数增加(均P<0.05);脾脏组织结构紊乱,脾脏组织T-bet、IFN-γmRNA及蛋白表达下降,GATA3、IL-4 mRNA及蛋白表达升高(均P<0.05);血清IFN-γ、IL-2含量减少,IL-4含量增加(均P<0.05)。与模型组比较,盐酸左旋咪唑组和麦粒灸组小鼠一般情况好转,脾脏组织结构改善,脾脏组织T-bet、IFN-γmRNA及蛋白表达下降,GATA3、IL-4 mRNA及蛋白表达升高(均P<0.05);血清IFN-γ、IL-2含量减少,IL-4含量增加(均P<0.05)。结论麦粒灸对化学治疗诱导的免疫抑制症状具有改善作用,其机制可能是调节转录因子T-bet、GATA3的表达,调节Th1/Th2平衡,从而恢复免疫平衡状态。

灵芝多糖和香菇多糖纠正环磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫抑制的作用研究

目的:探讨灵芝多糖(GLP)及香菇多糖(LNT)拮抗环磷酰胺(Cy)所导致的荷瘤小鼠的免疫抑制作用,同时观察两种多糖与 Cy 合用的抑瘤作用特点。方法:GLP 或 LNT 与 Cy 合用对荷 S_(180)小鼠瘤重影响采用抗移植性肿瘤实验;生物检测法测定 GLP 或 LNT 与 Cy 合用对荷瘤小鼠白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)各项指标的影响。结果:GLP(25 mg/kg、50 mg/kg)或 LNT(2.5 mg/kg、5 mg/kg)与 Cy(20 mg/kg)合用可显著抑制小鼠 S_(180)的生长,与单用 Cy 组比较差异无显著性。GLP 和 LNT均可显著增加 Cy 所致免疫功能低下小鼠脾 IL-2的产生;GLP 和 LNT 可不同程度增加 Cy 抑制的小鼠脾细胞 IFN-γ产生,可对抗 Cy 对小鼠脾细胞分泌 IFN-γ的抑制作用;GLP 和 LNT 可显著拮抗 Cy 时小鼠巨噬细胞(Mφ)TNF-α分泌的抑制作用,使之恢复至正常水平。结论:GLP 和 LNT 可显著恢复 Cy 所导致的小鼠免疫状态低下,增加免疫状态低下小鼠的 IL-2、IFN-γ和 TNF-α的产生。

Th2细胞因子与肿瘤髓系来源抑制细胞相关性的研究进展

髓系来源抑制细胞(MDSC)是骨髓细胞的一种异质性群体,对肿瘤发挥着免疫抑制作用。白细胞介素4(IL-4)、IL-6、IL-10、IL-13、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、血管内皮生长因子(VEGF)、环氧合酶2(COX2)等相关因子可以调控MDSC的生成、增殖、迁移和活性,并通过多种途径介导MDSC发挥免疫抑制作用。而IL-4、IL-6、IL-10、IL-13等Th2类细胞因子主要参与调控MDSC的产生和活性,促进MDSC的增殖,提高MDSC的抑制功能。如通过诱导MDSC生成精氨酸酶1(Arg1)、转化生长因子β(TGF-β),促进T细胞的凋亡,以及MDSC通过产生Th2细胞因子与巨噬细胞之间相互联系,引起促进肿瘤进展的Th2型免疫反应的发生。

人脑肿瘤转化生长因子β_2基因表达与其增殖活性相关性研究

目的探讨人脑肿瘤转化生长因子β２（ＴＧＦβ２）基因表达与其恶性进展及增殖活性的相关性。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、免疫组化和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交法检测了５０例胶质瘤、３０例脑膜瘤、３个恶性胶质瘤体外细胞系和８例正常脑组织ＴＧＦβ２的表达水平。用Ｋｉ６７标记指数（Ｋｉ６７ＬＩ）检测肿瘤增殖活性。结果正常脑组织无ＴＧＦβ２表达，而脑肿瘤均表达２８ｋｂ和／或５１ｋｂＴＧＦβ２ｍＲＮＡ片段和约２５ｋｄ及３０ｋｄ的蛋白；其在胶质瘤中的表达显著高于脑膜瘤，而低恶度胶质瘤（Ⅰ、Ⅱ）、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤、体外细胞系四者表达水平也有显著性差异；ＴＧＦβ２表达水平与Ｋｉ６７ＬＩ呈正相关。结论ＴＧＦβ２表达水平有随肿瘤增殖活性增高而升高的趋势，提示其可能为胶质瘤恶性进展的重要原因之一。

山羊TGFβ_2部分cDNA的扩增和序列分析

在人和小鼠等的 TGFβ2 基因序列基础上 ,选用 1对同源性引物 ,采用反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)技术从山羊卵泡总 RNA中扩增出 2 73bp的 TGFβ2 c DNA片段 ,进行序列测定 ,由此 c DNA序列推出了相应的 TGFβ2 蛋白分子的氨基酸排列。比较了山羊与人、小鼠、大鼠的 TGFβ2 部分 c DNA核苷酸的同源性和氨基酸的相似性 ,核苷酸同源性分别为 91.9% ,87.5 %和 88.6 % ;氨基酸相似性分别为 97.8% ,96 .7%和 96 .7%。