剧烈运动与训练诱发体内产生免疫抑制蛋白的初步研究

免疫抑制蛋白是在应激情况下体内出现的一种大分子蛋白,可抑制免疫功能,它是否参与了运动与免疫的调节?研究结果表明,持续的大运动量训练可使运动员血清出现免疫抑制蛋白,其分子量为140KD;1次急性超负荷游泳后小鼠血清内出现大分子量的免疫抑制因子,其分子量亦为140KD。说明免疫抑制蛋白在运动与免疫的调节中发挥着作用,提示在运动与免疫的调节中,存在着不同于神经内分泌调节机制的另一途径,即免疫抑制蛋白途径。

运动员剧烈运动后血中应激免疫抑制蛋白的产生

我们曾经报道，大鼠或小鼠在束缚应激后血中产生了一种能抑制免疫功能的应激免疫抑制蛋白，（又称Ｎｅｕ－ｒｏｉｍｍｕｎｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＮＩＰ，神经免疫蛋白）。本工作证明，运动员在大运动量的训练后血清中也产生一种能抑制淋巴细胞转化的物质，它的生化特性及分子量与前述大鼠和小鼠中的应激免疫抑制蛋白相同。在体外实验中，应激大鼠的血清培养人淋巴结细胞，获得了与大鼠实验相同的结果，即人淋巴结细胞也能产生应激免疫抑制蛋白。同时小鼠束缚应激的血清和大运动量的人类血清可以分别抑制人正常淋巴细胞和正常小鼠由ＣｏｎＡ诱导的淋巴细胞转化，以上结果表明，这种应激免疫抑制蛋白的种属特异性不强。

T淋巴细胞产生的应激免疫抑制蛋白

综述应激免疫抑制蛋白（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎｏｆｓｔｒｅｓｓ，ＩＳＰＳ）的研究概况和进展。大鼠和小鼠在应激条件下，通过中枢神经系统的作用，由外周Ｔ淋巴细胞产生了一种大分子蛋白质，对某些免疫功能具有抑制作用。称之为应激免疫抑制蛋白。它具有以下两个特点，一是相对分子质量很大，不像是已知的细胞因子、干扰素、肽类激素、神经肽等。二是它的独特生成机制。它是在应激条件下，通过中枢神经系统的作用，再以交感神经为介导，通过释放去甲肾上腺素，在Ｔ淋巴细胞生成的。这种生成方式尚未见到类似的报道。

束缚应激免疫抑制蛋白单克隆抗体的研制

我室以前的研究发现，在束缚应激大鼠和小鼠血清中能产生１种抑制正常淋巴细胞转化的大分子蛋白质，相对分子质量为１５５×１０５和３７０×１０５，并且证明该蛋白的生成受中枢神经系统的调控［１］。随后又发现应激大鼠外周淋巴组织（脾和淋巴结）匀浆提取物亦可抑...

应激免疫抑制蛋白降低大鼠动脉血压

目的：探讨应激免疫抑制蛋白对大鼠动脉血压的作用。方法：将部分纯化的应激免疫抑制蛋白作静脉注射，ＭａｃＬａｂ记录仪记录血压。结果：足背静脉注射部分纯化的应激免疫抑制蛋白２００、４００和８００μｇ后，血压下降，并呈明显的量效关系。结论：应激免疫抑制蛋白可明显降低正常大鼠动脉血压。

应激免疫抑制蛋白的组织分布

束缚应激后大鼠和小鼠的血清能抑制正常大鼠和小鼠淋巴细胞由Con A诱导的转化.这一结果说明,应激后动物血清中产生了某种能抑制淋巴细胞转化的因子,由于它还具有抑制其它免疫功能的作用,因此称之为应激免疫抑制蛋白(ISPS).

应激免疫抑制蛋白的细胞来源

目的 :研究应激免疫抑制蛋白 (immunosuppressiveproteinofstress,ISPS)的细胞来源。 方法 :免疫荧光染色后 ,运用流式细胞仪和激光扫描共焦显微镜两种技术对ISPS进行定性和定量研究。结果 :流式细胞仪结果发现无论在正常还是应激条件下 ,ISPS均在T淋巴细胞上表达 ,且应激后ISPS表达量在T淋巴细胞显著升高至正常时的 3倍。在激光扫描共焦显微镜下 ,直接观察到分离纯化的T淋巴细胞中有ISPS阳性细胞存在 ,且发现T细胞的两类亚群均具有产生ISPS的功能。结论

重症肌无力患者胸腺提取液免疫抑制蛋白的研究

取手术切除重症肌无力患者胸腺制备胸腺提取液,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,并利用细胞培养和细胞增殖试验观察胸腺提取液对正常人外周血单个核细胞增殖的影响。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现约30％左右的重症肌无力患者胸腺提取液中在分子量约为11000的蛋白,这些患者的胸腺提取液对外周血淋巴细胞增殖有显著的抑制作用,与胸腺提取液中没有这种蛋白的重症肌无力患者相比有显著差异(P<0.01)。说明部分重症肌无力患者胸腺提取液蛋白成分和生物学活性异常,有明显免疫抑制作用。

人扁桃体中应激免疫抑制蛋白的初步观察

以前的实验证明 ,在应激条件下 ,外周淋巴组织中可产生一种蛋白质 ,具有抑制某些免疫功能的作用 ,称为应激免疫抑制蛋白 (immunesuppressiveproteinofstress,ISPS)。本实验用人外周淋巴器官扁桃体进行了研究 ,证明扁桃体的提取物能抑制小鼠由ConA诱导的淋巴细胞转化 ,而且这种抑制作用可被ISPS单克隆抗体 (2C4 )部分翻转。间接ELISA法证明人扁桃体提取物能与 2C4单克隆抗体相结合。以ISPS单克隆抗体 (2C4 )作免疫组织化学研究 ,证明人扁桃体中有很多染色呈阳性的细胞。这些结果从不同角度提示 。

亚洲璃眼蜱免疫抑制蛋白P36的分子鉴定及重组表达

为了解蜱吸血和病原传播的分子机制,本研究从亚洲璃眼蜱唾液腺中克隆获得一个编码免疫抑制蛋白P36的同源性基因,该基因全长924bp,编码区为708bp,预测的编码蛋白包含235个氨基酸,分子量为27ku。BLAST分析表明,该基因预测的氨基酸与美洲花蜱和安氏革蜱唾液腺中的免疫抑制蛋白P36高度同源。RT-PCR分析表明,该基因在未吸血成蜱中没有表达,但吸血后表达。将目的基因与载体pGEX-4T-1连接后转化BL21表达菌,经诱导后得到GST融合重组蛋白。该实验结果为进一步研究P36奠定了基础。

去甲肾上腺素诱导ConA活化的大鼠淋巴细胞产生应激免疫抑制蛋白

目的 :观察去甲肾上腺素在体外诱导正常大鼠淋巴细胞产生应激免疫抑制蛋白。方法 :采用体外培养的方法 ,以ConA活化正常大鼠的淋巴结细胞 ,同时加入去甲肾上腺素共同孵育 12～ 16h ,测定细胞提取物对正常小鼠淋巴细胞转化的影响。并利用应激免疫抑制蛋白单克隆抗体以抗体中和及ELISA法 ,鉴定应激免疫抑制蛋白。结果 :去甲肾上腺素 (10 -5～ 10 -3 mol·L-1)可在体外诱导以ConA活化的淋巴细胞产生一种能抑制正常淋巴细胞转化的物质。用应激免疫抑制蛋白单克隆抗体所作的抗体中和及ELISA测定发现 ,提取物中的抑制物可被应激免疫抑制蛋白单克隆抗体识别。结论

亚洲璃眼蜱免疫抑制蛋白p36基因的RNA干扰研究

本研究利用RNA干扰技术研究亚洲璃眼蜱p36基因在其生长、发育、繁殖方面的生物学功能。通过注射p36基因的dsRNA成功实现了该基因的表达沉默,干扰组表达量下降了99%。蜱p36基因沉默后,24 h的吸附率下降了50%,饱血率下降了55.5%,卵孵化率下降了100%。结果表明p36基因在亚洲璃眼蜱吸血和繁殖中具有重要作用。

腹腔注射6一羟多巴胺对抗小鼠应激免疫抑制蛋白的产生

采用腹腔注射交感神经化学切断剂６－羟多巴胺（６－ＯＨＤＡ）的方法，在小鼠束缚应激模型上观察外周交感神经在应激免疫抑制蛋向产生中的作用。结果表明，腹腔注射６－ＯＨＤＡ后，血清中应激免疫抑制蛋白的产生明显减少，第五天降至最低点，以后逐渐恢复，第 １４天恢复正常。脾脏和淋巴结中去甲肾上腺素（ ＮＥ）的含量，在注射６－ＯＨＤＡ后第一天明显降低，而且至少在１４天内维持在很低水平。说明６－ＯＨＤＡ已损坏了交感神经纤维。注射６－ＯＨＤＡ前３０ｍｉｎ注射去郁敏（ＤＭＩ），阻断交感神经的重吸收作用，可明显对抗６－ＯＨＤＡ抑制应激免疫抑制蛋白产生作用。以上结果表明，外周交感神经具有促进应激免疫抑制蛋白生成的作用。

阉割和睾酮替代对大鼠应激免疫抑制蛋白的影响

目的 :研究阉割和睾酮替代对束缚应激模型大鼠血清中应激免疫抑制蛋白的影响。方法 :成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、阉割组、阉割后睾酮替代组。每组 10～ 12只。以上各组随机抽出一半给予束缚应激 ,另一半作为不应激对照。观察各组大鼠血清对ConA诱导的淋巴细胞转化的作用 ,作为反映血清中应激免疫抑制蛋白含量的指标。在离体实验中观察不同浓度的睾酮对淋巴细胞转化的直接作用。结果 :阉割可促进应激大鼠血清中应激免疫抑制蛋白的产生 ,睾酮替代可对抗这一作用。结论 :睾酮可在一定范围内对抗应激免疫抑制蛋白的产生。

血浆非特异性免疫抑制蛋白对大鼠淋巴细胞粘附主动脉内皮细胞的影响

淋巴细胞粘附于血管内皮细胞(EC)是它们从血液迁移进入血管外组织的关键之一。我们利用主动脉内膜制备(Hautchen)技术和免疫荧光标记法初步研究了猪血浆非特异性免疫抑制蛋白(PNIP)对淋巴细胞粘附主动脉EC的影响,结果表明,PNIP不仅能抑制淋巴细胞的丝裂原反应而且也能够显著地抑制血液、胸腺或肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞粘附主动脉EC。研究还发现,粘附细胞中膜表面免疫球蛋白IgG阳性(SmIgG^+)B细胞所占比例明显下降。这些结果提示血浆免疫抑制蛋白能够抑制淋巴细胞对EC的粘附,从而可能影响炎症,动脉粥样硬化和血栓的形成。

急性亚极量运动24h后机体血清免疫抑制蛋白的变化

探讨急性亚极量运动诱发机体免疫抑制蛋白(Immune Suppressive Protein of Stress,ISPS)出现的最短时间。方法:以北京体育大学研究生院8名健康学生为研究对象,实施急性亚极量强度跑台运动,受试者分别于运动前、运动后24 h无菌采集静脉血进行指标测定。结果发现,急性亚极量运动后24 h机体内ISPS水平升高,证实在急性运动后短至24 hISPS就能在人体内被诱导出现。结论:与运动前相比,急性亚极量运动应激24 h后,受试者血清对正常小鼠ConA诱导的淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,是血清中ISPS蛋白水平升高引起。

应激免疫抑制蛋白在血清中的作用时间

在小鼠束缚应激 1 2h后的第 1 ,1 2 ,2 4和 48h血清明显抑制淋巴细胞转化 ,第 96h的血清已不再具有显著的抑制作用 .经计算 ,应激免疫抑制蛋白在血清中生物作用的半寿期为2 1 3h .

新型重组免疫抑制蛋白B7-2-L-PE40KDEL的分子构建与生物活性及结构特性

目的 构建重组B7 2 L PE4 0KDEL融合蛋白 ,特异性杀伤CD2 8高表达的T细胞 ,选择性阻断T淋巴细胞活化过程中的B7:CD2 8/CTLA 4共刺激信号系统 ,由此诱导免疫耐受 ,特异性防治移植物抗宿主疾病 (GVHD)和宿主抗移植物疾病 (HVGD)。方法 采用基因融合序列重叠延伸 (SOE)策略 ,构建新型重组pRSETA B7 2 L PE4 0KDEL外毒素融合蛋白的原核表达载体 ,实现融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达 ,利用亲和层析等方法进行蛋白质纯化。对该融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性等进行模拟分析。采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD2 8受体的T细胞的活性进行测定。结果 构建并高效表达了B7 2 L PE4 0KDEL融合蛋白 ,所获融合蛋白的纯度大于 95 %。该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示 ,其柔性及抗原性、亲水性表位均未显著改变。活性测定显示 ,该重组融合蛋白能有效特异性地杀伤高表达CD2 8的人T淋巴瘤细胞系 ,而对未表达CD2 8的人白血病细胞系则无任何杀伤。结论 具有靶向性免疫抑制活性的新型重组B7 2 L PE4 0KDEL外毒素融合蛋白的构建、表达对特异性防治GVHD和HVGD可能产生积极的影响。

免疫抑制酸性蛋白检测在胃癌诊断中的价值

ＩＡＰ是Ｔａｍｕｒａ等人在１９８１年首先发现，从晚期胃癌病人的腹水中提纯并加以分析。以后陆续报道在头颈部肿瘤、胃癌、肾癌、肺癌以及卵巢癌病人血中检测到高浓度的ＩＡＰ。我们用单向免疫扩散法检测４２例胃癌患者的血清ＩＡＰ水平，了解ＩＡＰ在胃癌检测中的临床...

化学切断交感神经可对抗大鼠应激免疫抑制蛋白的产生

大鼠新生期腹腔注射 6 OHDA ,成年后其血清中去甲肾上腺素含量明显减小 .应激后的大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用明显减轻 ,同一大鼠脾脏和淋巴结匀浆提取物对正常淋巴细胞转化的抑制作用也明显减轻 ,血清和淋巴组织对淋巴细胞转化的抑制活性之间有显著的正相关关系 .结果表明 。