免疫捕获-核酸扩增-微孔杂交检测贝类中甲型肝炎病毒的方法研究

目的 :建立贝类中甲型肝炎病毒新的检测方法。方法 :先用IgG抗体吸附标本中的HAV ,然后将HAV中的RNA逆转录成cDNA ,用PCR方法扩增。PCR产物与标记特异基因探针孔中分子杂交 ,最后加入与标记物对应的酶配体 ,酶联免疫检测。结果 :采用的两对引物和探针均可用于检测。仅加入HAV的可测出阳性 ,其余病毒测不出。寡核苷酸探针 3 75nmol/L、7 5nmol/L、15nmol/L比较理想 ,杂交时间为 12 0min ,显色 3 0min最佳。免疫捕获 -核酸扩增 -微孔杂交方法比原方法提高 2 5倍以上。推测方法的检测限达到 8pfu/g贝组织。 结论 :免疫捕获 -核酸扩增 -微孔杂交方法灵敏度高、特异性强 ,且可以定量。

乙型肝炎病毒YMDD变异不同检测方法比较与评价

目的比较检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的3种不同方法,评价其在监测拉米夫定抗HBV治疗中发生耐药突变的价值。方法对80例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者,测定其治疗前后血清HBVDNA含量、ALT水平变化,分别用聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)、通用模板信号扩增(UT-PCR)技术、以及基因测序3种方法进行HBVYMDD变异检测,并分析结果。结果80例患者用基因测序法检测出34例发生YMDD变异,变异发生率为41.25%;用PCR-ELISA法检测出21例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率差异有显著性(χ2=4.68,P<0.05),两者结果的符合率为61.76%;用UT-PCR法检测出33例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率无统计学差异(χ2=0.03,P>0.05),两者结果的符合率为97.06%。结论基因测序和UT-PCR方法检测HBVYMDD变异非常可靠,是监测拉米夫定耐药株的非常有效的方法,UT-PCR方法更适合临床应用,而PCR-ELISA方法需提高其敏感性。